可乐中的4-甲基咪唑是在以亚硫酸铵为原料生产焦糖色素时产生的，焦糖色素能使可乐饮料变成棕褐色。4-甲基咪唑能导致动物长肿瘤，有可能给人体带来致癌风险。目前，我国国标中只有《焦糖色中的4-甲基咪唑的测定-高效液相色谱法》，而对于饮料中的4-甲基咪唑则没有相关检测方法。
针对此次事件，月旭科技迅速建立了饮料中4-甲基咪唑的前处理和检测方法。本方法使用月旭Welchrom® P-SCX (60mg/3mL)富集饮料中4-甲基咪唑，所建立的固相萃取方法能够极大程度排除饮料中杂质的干扰，保证检测结果的准确性。
1. 仪器及材料
材料：饮料；超纯水；4-甲基咪唑标准品；月旭Welchrom® SCX 固相萃取小柱(60mg/3mL)；玻璃移液管；洗耳球；烧杯，固相萃取装置等。
2. 实验步骤
2.1 SPE净化
SPE柱：Welchrom® SCX(60mg/3mL)
1）活化：3mL甲醇，3mL水；
2）上样：3mL 饮料样品溶液，弃去上样液
3）淋洗：3mL 100%甲醇，弃去淋洗液；
4）洗脱：3mL 10%氨化甲醇；收集洗脱液。挥干定容至0.5mL，进液相分析。
2.2 液相色谱测定
色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18(4.6×250mm, 5µm)
流动相：缓冲液/甲醇=80/20
缓冲液的配置方法：将6.8g KH2PO4和1g庚烷磺酸钠至900mL，用H3PO4调pH为3.5，再定容至1000mL，即得。
检测波长：210nm
流速：1.0mL/min
进样量：20µL
图1：4-甲基咪唑标准色谱图
3. 添加回收率试验结果
表1: 10µg/mL添加回收实验结果（n=5）
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次数 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
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回收率 |
98.2% |
92.2% |
95.1% |
96.4% |
93.6% |
