一、实验材料
1.1 免疫亲和柱：博纳艾杰尔黄曲霉毒素总量免疫亲和柱订货号：BAC09001
1.2 色谱柱：Venusil MP C18 (4.6*150mm, 5μm)，订货号：VA951505-0
二、实验方法：
1.1混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标示浓度分别为1. 0µg/mL、0.3µg/mL、1.0µg/mL、 0.3µg/mL）1mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。精密量取储备液1mL，置50mL量瓶中，用70％甲醇溶液稀释至刻度，即得。
1.2 供试品溶液的制备 取供试品粉末约10g，精密称定，加入氯化钠2g，精密加入70%甲醇溶液100mL，超声处理20分钟，离心5分钟（离心速度8000转/分），精密量取上清液10mL，置50mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取25mL，通过免疫亲和柱，流速每分钟2-3mL，用水5mL淋洗，洗液弃去,使空气进入柱子,再用甲醇1.4mL分2次洗脱，收集洗脱液，用水定容至2mL，即得。
1.3测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液20µl、供试品溶液20µl，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的量，计算，即得。
三、色谱条件
仪器：高效液相色谱仪（Waters 2695），荧光检测器（Waters 2475），光化学柱后衍生装置
色谱柱：Venusil MP C18 (4.6*150mm) , 定货号：VA951505-0
进样量：20µl; 柱温：40℃; 流速：1.1mL/min
梯度洗脱程序：见表1（B：乙睛；C：甲醇；D：水）
表1 梯度洗脱程序
|
|
Time
|
Flow
|
%A
|
%B
|
%C
|
%D
|
|
1
|
0.01
|
1.10
|
0.0
|
10.0
|
25.0
|
65.0
|
|
2
|
17.00
|
1.10
|
0.0
|
10.0
|
45.0
|
45.0
|
|
3
|
17.50
|
1.10
|
0.0
|
10.0
|
25.0
|
65.0
|
四、实验结果
4.1 柱回收实验：
取酸枣仁提取液5ml，加2ppb混标5ml，用水稀释至50ml，同法以IAC柱净化，测定，计算回收率，见表2
表2 柱回收率实验（2ppb）
|
G2
|
G1
|
B2
|
B1
|
||
|
峰面积
|
标液
|
43312
|
70186
|
71599
|
102448
|
|
1
|
50909
|
81338
|
84045
|
123450
|
|
|
2
|
50909
|
81338
|
84045
|
123450
|
|
|
3
|
52124
|
84091
|
86785
|
125209
|
|
|
4
|
52832
|
83899
|
86318
|
121965
|
|
|
5
|
49030
|
77503
|
81502
|
115793
|
|
|
回收率
(%)
|
1
|
94.03
|
92.71
|
93.91
|
96.40
|
|
2
|
94.03
|
92.71
|
93.91
|
96.40
|
|
|
3
|
96.28
|
95.85
|
96.97
|
97.77
|
|
|
4
|
97.58
|
95.63
|
96.45
|
95.24
|
|
|
5
|
90.56
|
88.34
|
91.06
|
90.42
|
|
|
平均
|
94.50
|
93.05
|
94.46
|
95.25
|
|
|
RSD
|
2.83
|
3.26
|
2.50
|
2.99
|
|
4.2进样精密度实验，见表3
表3 精密度实验（n=6）
|
n
|
G2
|
G1
|
B2
|
B1
|
|
1
|
40388
|
64089
|
73374
|
104343
|
|
2
|
40275
|
64031
|
73154
|
104405
|
|
3
|
41324
|
64982
|
73406
|
104862
|
|
4
|
40265
|
64785
|
73938
|
104432
|
|
5
|
40993
|
65243
|
74473
|
105622
|
|
6
|
40726
|
64987
|
74403
|
106207
|
|
平均
|
40661.83
|
64686.17
|
73791.33
|
104978.5
|
|
RSD
|
1.06%
|
0.78%
|
0.76%
|
0.73%
|
4.3 实验图谱
图1 供试品（酸枣仁）加标，对照品叠加色谱图
图2 混合对照品色谱图
图3 供试品（酸枣仁）加标色谱图
图4 酸枣仁样品色谱图
图5 精密度实验
