1 仪器及材料 w_ m 仪器:Agilent GC-MS 7890-5975c;涡旋混合器;旋转蒸发仪; UJI1n?~ 玻璃器皿:30mL样品瓶;200mL鸡心瓶;容量瓶;进样样品瓶; h)rHf3: 材料及试剂:氨基甲酸乙酯专用净化柱;氨基甲酸乙酯标准品;PTFE滤膜;二氯甲烷、甲醇均为色谱纯;无水硫酸钠(经600度煅烧); 9}-,dgAB ^]kDYhe*Y 2 标准溶液配制 Tm `CA0@ 准确称取约0.1g(精确至0.0001g)氨基甲酸乙酯标准品于100mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得到标准储备液。用甲醇逐级稀释储备液,得到20、10、5、1、0.1、0.05(单位为μg/mL)标准溶液,用于绘制标准曲线。同时稀释得到标准工作液4μg/mL、40μg/mL、400μg/mL,用于进行加标回收率实验。 UcZ3v]$I 1JM~Ls%Z 3 GC-MS操作条件 J_,y?}.e3 3.1 GC条件 *\>7@r[%5 毛细柱DA-INOWAX(30m*0.25mm*0.25um);进样口温度230℃;载气:高纯氦气;流速1ml/min;程序升温:60℃(5min)3.5℃/min 150;不分流进样,进样量1μL。 `` ={FaV~m 3.2 MS条件 SE\`JGA[ 接口温度:240℃,电离方式:EI,电子能量:70eV,离子源温度:230℃,四级杆温度:150℃;扫描模式:SIM模式,监测离子:62,74,89,其中定量离子为62. {5*5tCIt C$_H)I 4 样品处理 uZNR]+Yu@ 4.1 黄酒加标样品 p|Ln;aYc 称取20g黄酒于30mL样品瓶中,加入标准工作液0.1mL,涡旋混合均匀,将样品载入到净化柱上,静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。用3*40mL二氯甲烷洗脱,每次间隔1-3min,用鸡心瓶收集洗脱液,将洗脱液在40℃下旋转蒸发至约1mL,转移溶液至带刻度试管中,用2*1mL甲醇洗涤鸡心瓶,将洗涤液也转移至试管中进行合并,并用甲醇定容至4mL,加入少量无水硫酸钠,静置5min,用PTFE滤膜进行过滤,收集,取少量入进样样品瓶,待测。 *{ .u\
BL5 4.2 黄酒样品 (\G~S
4 量取20g黄酒,将样品载入到净化柱上,往下操作步骤同4.1(将样品载入到净化柱上,静置……)。 ]}9EBf 4.3 空白样品 kn!J`"b 量取20g去离子水,将样品载入到净化柱上,往下操作步骤同4.1(将样品载入到净化柱上,静置……)。 Qtk'^Fc 0Y\u,\GrxW 5 实验结果 ZnQnv@{8l 色谱图 l|DOsI'r 将处理得到的样品在仪器条件(3)下进行检测,得到的色谱图如图1~图3. } nQH
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'?QZ7A 图1 标准溶液色谱图(浓度为1μg/mL) CxO)d7c
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y 图2 黄酒样品加标色谱图(定容浓度为1μg/mL) @wpm;]
M+Dkn3bx 图3 黄酒样品色谱图 ct/I85c@P 标准曲线 )sW1a Blu^\:?#z- 将步骤(2)配制的标准溶液,在仪器条件(3)下进行检测,绘制标准曲线,得到线性方程为y=2.19e+005*x+4.40e+003(相关系数为0.999),其中y为峰面积,x为目标物浓度(μg/mL),方法检出限为3ng/mL,定量限为10ng/mL加标回收率及精密度 BKN]DxJ6 称取17份20g酒样,其中5份分别加入浓度为4μg/mL标准工作液0.1mL,5份分别加入浓度为40μg/mL标准工作液0.1mL,另外5份分别加入浓度为400μg/mL标准工作液0.1mL,余下2份酒样作为空白,在条件(4)下进行样品处理,将得到的样品在仪器条件(3)下进行检测,结果如表1所示。表1 加标回收率及精密度
pt<84CP 计算公式 \"n&|_SZ\ 样品中氨基甲酸乙酯的含量(X)以mg/kg表示,按式(1)计算:X=(C1-C2)*V/m…………………………..(1)
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式中: Nz2}Ma 2 C1为试样中氨基甲酸乙酯的含量,单位为μg/mL; ?Hq`*I?b9 C2为空白试样氨基甲酸乙酯的含量,单位为μg/mL; |gT$M_} V为试样最终定容体积,单位为mL; ym-212wl K5!k06;s m为称取试样的质量,单位为g。 +W-sb5) eE1w<] Eg 6 结论实验结果表明,该净化柱对氨基甲酸乙酯能有较好的回收率,同时,使用该净化柱能较好的去除酒中的氨基酸、蛋白质、糖、有机酸等干扰成分。该方法黄酒用量为20g,洗脱剂用量为120mL,对氨基甲酸乙酯含量较低的酒样能有较高的富集倍数,该方法实验操作快速、简便,可应用于大批量样品的前处理。 <>p\9rVp*^ pS51fF9 >/Slk{ 附录 U%2 pbGU 针对氨基甲酸乙酯含量较高的样品,可以减少取样量,具体方法如下:称取2g黄酒于10mL样品瓶中,加入标准工作液50μL,涡旋混合均匀,将样品载入到净化柱上,静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。然后用12mL二氯甲烷洗脱,用流速调节阀控制流速为2 mL/min左右,用带刻度试管收集洗脱液,将洗脱液在30℃下氮吹至1mL(若体积小于1mL可以用二氯甲烷定容至1mL),加入少量无水硫酸钠,静置5min,用PTFE滤膜进行过滤,收集,取少量入进样样品瓶,待测。 Pf]L`haGN 其他测试方法同20g取样量的方法。