包括:
)UR1E?' 1. Venusil ASB-C18或ASB-C8色谱柱或XBP-C8色谱柱(4.6*250mm,5μm,150Å)任选1支
\HCOR, `T 2. 混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支/盒,3盒
UUl*f!&
o 以上2项均为科技部“十一五”国家支撑计划成果
,q8(]n4 3.
三聚氰胺标准品1瓶(250mg,≥99.5%)
&c20x+
4. 真空固相萃取装置(12位)
^[en3aQ 5. 0.22μm,13mm Nylon针式过滤器过滤 200个/包
BpH|/7 6. 三聚氰胺
分析方法手册1份
%njOX#.w 7. 庚烷磺酸钠(10g/瓶),高纯甲醇、乙睛
DK)u)?! Y]~IY?I * 试剂规格请以签订合同时为准,博纳艾杰尔科技拥有最终解释权。
-=}b;Kf- 1 固相萃取(SPE)柱的选择:
.XI
r?>G 三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物),净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂上,具有阳离子和反相两种吸附机理,并具有以下优点:
.U<F6I:<md 1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂),使样品更干净,提高
检测的灵敏度。
):S!Nl 2) 批次重复性好。
jSB'>m] 3) 回收率高,重现性好,即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
{b2
aL7 2 样品前处理步骤:
0:. 6rp 2.1标准样品配制:
<z',]hy 取50mg三聚氰胺标准品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液,使用时,以合适溶液稀释至所要的浓度。
[NL -! 2.2提取:
} #qQ2NCH 称取饲料/奶粉样品5g (或牛奶10mL),加入50mL 1%三氯乙酸提取液,充分混匀,加入2mL 2%乙酸铅溶液,超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中,8000rpm/min离心10min,取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX),同时处理多个样品,需要用真空固相萃取装置(12位),可达到方便、快速、高通量分析样品的目的。
J]dW1boT@ 2.3净化(PCX小柱,60mg/3mL) :
(V!0'9c 1) 活化及平衡:3mL甲醇,3mL水
!O 8.#+ 2) 上样:加入提取液3mL
u3ST
; 3) 淋洗:3mL水;3mL 甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。
K_Re}\D 4) 洗脱:5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)。
1LX)4TCC 5) 浓缩:50℃,氮气吹干,20%甲醇/水定容至1mL。
[Teh*CV i(Vm!Y82 bJPJ.+G7 2.4检测:HPLC-UV检测方法
5e8xKL ~
?d>fR:X 三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离,按照
美国食品药品监督管理局(
FDA)的三聚氰胺
检测方法和
中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法,采用艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列和Venusil XBP色谱柱,均能得到良好的结果,分析色谱图如下:1、 三聚氰胺的FDA检测方法
W"t"X ~T3 色谱柱:Venusil ASB C8 4.6×250mm
OT@yPG 缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH为3.0。
*Dc@CmBr 流动相:缓冲液:乙腈= 85:15
7D9]R#-K 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10μL,
+99Bi2H}o 进样前用0.22μm针式过滤器过滤
USFg_sO 流 速:1.0mL / min
yV2e5/
i 柱 温:40 ℃
!5~k:1=
波 长:240nm
?0) @jc= 2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法
$Elkhe]O % (1)色谱柱:Venusil ASB-C18 4.6×250mm
dN0mYlu1| 缓冲液:10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
y]^#$dK(z 流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15
UFf,+4q 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10uL
r&Qt_ 进样前用 0.22μm针式过滤器过滤
70=(.[^+ 流 速:1.0mL/min
67?n-NP 柱 温:40℃
y;r"+bS8 r@Nl2 波 长:240nm
<5k&)EoT (2)色谱柱:Venusil XBP-C8 4.6×250mm缓冲液:10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠
l#ZyB| 流动相:缓冲液:乙腈=85:15进样量:样品用缓冲溶液溶解成约0.1mg/ml,进10μL
p {?}g' 进样前用0.22μm针式过滤器过滤流速:1.0mL/min
"f<#.}8 柱温:20℃波长:240nm
8m|x#*5fQl Rt<10minLC-MS参考方法
Vf$1Sj w 由于HPLC-UV方法中,流动相添加了离子对试剂,限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法,三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,没有良好的保留与分离。源于此
问题,博纳艾杰尔科技公司自主开发了新的方法,采用博纳艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列亲水色谱柱,不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离,参考方法如下:
H4 =IY 缓冲液:10mM NH4AC流动相:缓冲液:ACN=95:5
J+iX,X 流 速:1.0mL/min进样量:先用70%ACN溶解成约1mg/mL,用ACN稀释成0.1mg/mL,进10μL
a}w&dE$!- 进样前用0.22μm针式过滤器过滤柱温:40℃
7>
)l{7 波长:240nm
[d\#[l_ 0OEtU5lf`y