包括:
>m#bj^F\ 1. Venusil ASB-C18或ASB-C8色谱柱或XBP-C8色谱柱(4.6*250mm,5μm,150Å)任选1支
NNw0
G& 2. 混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支/盒,3盒
B<oBo&uA 以上2项均为科技部“十一五”国家支撑计划成果
g[$4a4X 3.
三聚氰胺标准品1瓶(250mg,≥99.5%)
)>I-j$%=2 4. 真空固相萃取装置(12位)
OU'm0Jlk 5. 0.22μm,13mm Nylon针式过滤器过滤 200个/包
6QAhVg: A 6. 三聚氰胺
分析方法手册1份
':!aFMj^ 7. 庚烷磺酸钠(10g/瓶),高纯甲醇、乙睛
h]pz12Yf Mh~E]8b * 试剂规格请以签订合同时为准,博纳艾杰尔科技拥有最终解释权。
a!B"WNb+ 1 固相萃取(SPE)柱的选择:
+
f,Kt9Cy 三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物),净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂上,具有阳离子和反相两种吸附机理,并具有以下优点:
'9!J' [W 1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂),使样品更干净,提高
检测的灵敏度。
0+F
--E4 2) 批次重复性好。
9_fbl:qk;\ 3) 回收率高,重现性好,即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
%~L"TK`? 2 样品前处理步骤:
rFaG-R 2.1标准样品配制:
VS >xvF 取50mg三聚氰胺标准品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液,使用时,以合适溶液稀释至所要的浓度。
HoK+g_9~ 2.2提取:
;GIA`=a% 称取饲料/奶粉样品5g (或牛奶10mL),加入50mL 1%三氯乙酸提取液,充分混匀,加入2mL 2%乙酸铅溶液,超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中,8000rpm/min离心10min,取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX),同时处理多个样品,需要用真空固相萃取装置(12位),可达到方便、快速、高通量分析样品的目的。
:W;eW%Y 2.3净化(PCX小柱,60mg/3mL) :
-Aojk8tc 1) 活化及平衡:3mL甲醇,3mL水
&gKDw!
al 2) 上样:加入提取液3mL
TD%&9$F 3) 淋洗:3mL水;3mL 甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。
u`D _ 4) 洗脱:5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)。
|1zfXG,R 5) 浓缩:50℃,氮气吹干,20%甲醇/水定容至1mL。
wl&T9O;? @Pf9;7,TV d%. |MAE 2.4检测:HPLC-UV检测方法
4hc[rN,] *5.wwV 三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离,按照
美国食品药品监督管理局(
FDA)的三聚氰胺
检测方法和
中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法,采用艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列和Venusil XBP色谱柱,均能得到良好的结果,分析色谱图如下:1、 三聚氰胺的FDA检测方法
,SidY\FzH 色谱柱:Venusil ASB C8 4.6×250mm
(xHu@l!] 缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH为3.0。
^ghYi|kQq 流动相:缓冲液:乙腈= 85:15
('7$K 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10μL,
&+&@;2 进样前用0.22μm针式过滤器过滤
b>VV/j4!/ 流 速:1.0mL / min
0&j90J$` 柱 温:40 ℃
icIn>i<m 波 长:240nm
eG1V:%3 2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法
2H}y1bkW (1)色谱柱:Venusil ASB-C18 4.6×250mm
E
I(e3 缓冲液:10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
NI#]#yM+ 流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15
+T@BOYhgq 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10uL
4qp|g'uXT 进样前用 0.22μm针式过滤器过滤
%]&$VVVh 流 速:1.0mL/min
Ajm!;LA[jO 柱 温:40℃
zUL,~u P?/JyiO} 波 长:240nm
88v8lt;R (2)色谱柱:Venusil XBP-C8 4.6×250mm缓冲液:10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠
N'VTdf? 流动相:缓冲液:乙腈=85:15进样量:样品用缓冲溶液溶解成约0.1mg/ml,进10μL
4T(d9y 进样前用0.22μm针式过滤器过滤流速:1.0mL/min
7-K8u 柱温:20℃波长:240nm
XqmB%g( Rt<10minLC-MS参考方法
!2KQi=Ng 由于HPLC-UV方法中,流动相添加了离子对试剂,限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法,三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,没有良好的保留与分离。源于此
问题,博纳艾杰尔科技公司自主开发了新的方法,采用博纳艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列亲水色谱柱,不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离,参考方法如下:
NSz} 缓冲液:10mM NH4AC流动相:缓冲液:ACN=95:5
X6G{. Vh" 流 速:1.0mL/min进样量:先用70%ACN溶解成约1mg/mL,用ACN稀释成0.1mg/mL,进10μL
_J!^iJ 进样前用0.22μm针式过滤器过滤柱温:40℃
!.,wg'\P 波长:240nm
2/*u$~ JPqd}:u3