包括：
c*. 1. Venusil ASB-C18或ASB-C8色谱柱或XBP-C8色谱柱（4.6*250mm,5μm,150Å）任选1支
{9-9!jN{" 2. 混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支/盒，3盒
?jUgDwc(w 以上2项均为科技部“十一五”国家支撑计划成果
8<mloM-4 3.
三聚氰胺标准品1瓶（250mg，≥99.5%）
(]T[n={Y 4. 真空固相萃取装置（12位）
]' [:QGr 5. 0.22μm，13mm Nylon针式过滤器过滤 200个/包
|LZ{kD| 6. 三聚氰胺
分析方法手册1份
mRRZ/m?A( 7. 庚烷磺酸钠（10g/瓶），高纯甲醇、乙睛
D
(8Z90 }BU% <5CQ * 试剂规格请以签订合同时为准，博纳艾杰尔科技拥有最终解释权。
!reOYt| 1 固相萃取(SPE)柱的选择：
]xMZo){[| 三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子和反相两种吸附机理，并具有以下优点：
2wB *c9~ 1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高
检测的灵敏度。
Qs
za,09
2) 批次重复性好。
#}B1W&\sw 3) 回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
_q #pEv 2 样品前处理步骤：
hBn UpYec 2.1标准样品配制：
0C%IdV%CU 取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液，使用时，以合适溶液稀释至所要的浓度。
M0xhcU_ 2.2提取：
@@
K/0:], 称取饲料/奶粉样品5g (或牛奶10mL)，加入50mL 1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2mL 2%乙酸铅溶液，超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)，同时处理多个样品，需要用真空固相萃取装置（12位），可达到方便、快速、高通量分析样品的目的。
/huh}&NNu 2.3净化(PCX小柱，60mg/3mL) ：
IMbF]6%p( 1) 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
c8[kL$b;j 2) 上样：加入提取液3mL
)' f =!'X 3) 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。
WHBGhU 4) 洗脱：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。
(_ :82@c 5) 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至1mL。
)@I] Rk? 2e1%L, y{W _;5zA"~c#@ 2.4检测：HPLC-UV检测方法
:3R3 >o6m 9-{
+U,3) 三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照
美国食品药品监督管理局（
FDA）的三聚氰胺
检测方法和
中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法，采用艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列和Venusil XBP色谱柱，均能得到良好的结果，分析色谱图如下：1、 三聚氰胺的FDA检测方法
]!^wB 3j 色谱柱：Venusil ASB C8 4.6×250mm
hy;V~J# 缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0。
uwI"V|g%a& 流动相：缓冲液：乙腈= 85：15
SC%HH u\l 进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10μL，
oXh t$Q 进样前用0.22μm针式过滤器过滤
/*fx`0mY) 流 速：1.0mL / min
R"HV|Dm|m 柱 温：40 ℃
I>l^lv&[+ 波 长：240nm
PE6,
9i0ee 2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法
0Cf'\2
（1）色谱柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm
E>-I
|X"L1 缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
'lpCw H 流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15
ws QuJrG 进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10uL
)sK53O$ 进样前用 0.22μm针式过滤器过滤
A2L"&dl 流 速：1.0mL/min
lcEK&AtK 柱 温：40℃
hg<[@Q%$o pQc-}o" 波 长：240nm
$.w$x1 （2）色谱柱：Venusil XBP-C8 4.6×250mm缓冲液：10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠
yD Zm)|<. 流动相：缓冲液：乙腈=85：15进样量：样品用缓冲溶液溶解成约0.1mg/ml，进10μL
8_Uh h5[ 进样前用0.22μm针式过滤器过滤流速：1.0mL/min
-O1$jBQ S 柱温：20℃波长：240nm
w?8\9\ ;? Rt＜10minLC-MS参考方法
w 2U302TZ 由于HPLC-UV方法中，流动相添加了离子对试剂，限制了液质联用方法的使用；但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，没有良好的保留与分离。源于此
问题，博纳艾杰尔科技公司自主开发了新的方法，采用博纳艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离，参考方法如下：
A*/8j\{n 缓冲液：10mM NH4AC流动相：缓冲液：ACN=95：5
\ %MsG 流 速：1.0mL/min进样量：先用70%ACN溶解成约1mg/mL，用ACN稀释成0.1mg/mL，进10μL
/!;v$es
S 进样前用0.22μm针式过滤器过滤柱温：40℃
y4I Q
a.F 波长：240nm
/ bH2 Z ~a_X
7
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