三聚氰胺分析方法包组件清单 [复制链接]

包括： Kir|in)r0  
1. Venusil ASB-C18或ASB-C8色谱柱或XBP-C8色谱柱（4.6*250mm,5μm,150Å）任选1支   ZVz*1]}  
2. 混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支/盒，3盒 i}> }%l|  
以上2项均为科技部“十一五”国家支撑计划成果 Rk}=SB-  
3. 三聚氰胺标准品1瓶（250mg，≥99.5%） ^?T,>ZI  
4. 真空固相萃取装置（12位） Yy_mX}\x  
5. 0.22μm，13mm Nylon针式过滤器过滤 200个/包 jyC>~}?  
6. 三聚氰胺分析方法手册1份 q
GgdWDn`  
7. 庚烷磺酸钠（10g/瓶），高纯甲醇、乙睛 HK<oNr.d52  
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* 试剂规格请以签订合同时为准，博纳艾杰尔科技拥有最终解释权。 T7Yg^ -"  
1 固相萃取(SPE)柱的选择： [q!)Y:|u_>  
三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子和反相两种吸附机理，并具有以下优点： IO?6F@(
 
1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高检测的灵敏度。 qFjnuQ,w  
2) 批次重复性好。 G)\6W#de
4  
3) 回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。 9wv 7HD|  
2 样品前处理步骤： <(caY37o6)  
2.1标准样品配制： 1PT0<C-  
取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液，使用时，以合适溶液稀释至所要的浓度。 z>W'Ra6  
2.2提取： WhR'MkfL  
称取饲料/奶粉样品5g (或牛奶10mL)，加入50mL 1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2mL 2%乙酸铅溶液，超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)，同时处理多个样品，需要用真空固相萃取装置（12位），可达到方便、快速、高通量分析样品的目的。 04R- }  
2.3净化(PCX小柱，60mg/3mL) ： Hsz).u  
1) 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水 \}mn"y  
2) 上样：加入提取液3mL -pm^k-%v  
3) 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。 uSK<{UT~3  
4) 洗脱：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。 .\+%Q)?h:  
5) 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至1mL。 /*5lO;!s{  
Qcr-|?5L  
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2.4检测：HPLC-UV检测方法 +=A53V[C  
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三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局（FDA）的三聚氰胺检测方法和中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法，采用艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列和Venusil XBP色谱柱，均能得到良好的结果，分析色谱图如下：1、 三聚氰胺的FDA检测方法 ;v^1V+1:z  
色谱柱：Venusil ASB C8 4.6×250mm nJ-U*yz  
缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0。 dLnMd0  
流动相：缓冲液：乙腈= 85：15  9>k-";  
进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10μL， / !*+9+h  
进样前用0.22μm针式过滤器过滤 w,QO!)j!  
流 速：1.0mL / min %"0g}tK6  
柱 温：40 ℃ B:Xmc,|,  
波 长：240nm It/IDPx4ga  
2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法 xiW;Y{kZ  
（1）色谱柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm <8Zm}-U  
缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠 FX#fh 2  
流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15 xC,;IS k,  
进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10uL wA#w]8SM  
进样前用 0.22μm针式过滤器过滤 u#l@:p  
流 速：1.0mL/min tJQ
FhY  
柱 温：40℃ i.e1?Zk1  
K; +w'/{  
波 长：240nm QD}'2{M!  
（2）色谱柱：Venusil XBP-C8 4.6×250mm缓冲液：10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠 {v,O  
流动相：缓冲液：乙腈=85：15进样量：样品用缓冲溶液溶解成约0.1mg/ml，进10μL 7( &\)qf=n  
进样前用0.22μm针式过滤器过滤流速：1.0mL/min bk-veJR  
柱温：20℃波长：240nm PE IUKlX  
Rt＜10minLC-MS参考方法 p6M
jVu  
由于HPLC-UV方法中，流动相添加了离子对试剂，限制了液质联用方法的使用；但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，没有良好的保留与分离。源于此问题，博纳艾杰尔科技公司自主开发了新的方法，采用博纳艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离，参考方法如下： Qd %U(|  
缓冲液：10mM NH4AC流动相：缓冲液：ACN=95：5 mM> L0  
流 速：1.0mL/min进样量：先用70%ACN溶解成约1mg/mL，用ACN稀释成0.1mg/mL，进10μL m+t<<5I[-  
进样前用0.22μm针式过滤器过滤柱温：40℃ o_.f7|U!  
波长：240nm J<"=c z$  
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