论坛风格切换切换到宽版
  • 240阅读
  • 0回复

乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的检测方案 [复制链接]

上一主题 下一主题
离线houwdz
 

发帖
105
世科币
228
威望
122
贡献值
202
银元
0
只看楼主 倒序阅读 使用道具 楼主  发表于: 2023-07-14
关键词: 黄曲霉毒素
近日,蒙牛纯牛奶被检测出强致癌物——黄曲霉毒素M1,消息一出顿时又掀起一股食品安全隐患的讨论。相比之前的三聚氰胺,黄曲霉素是否更难检测?现已整理出全套的专业检测方案,让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处躲藏。 )4  'yI*  
Lq{/r+tt/  
1. 试用范围 &F|Wk,y  
    牛奶,奶粉,发酵乳,干酪,奶油等乳制品 #\MkbZc d  
B[[1=  
2. 方法原理 @gihIysf  
    黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂,因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取,对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化,荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。 KZwzQ"Hl  
8iN@n8O  
3. 所需设备和耗材 anFl:=  
    黄曲霉毒素免疫亲和柱:Welchrom® IAC (1ml,25支/盒;3ml,15支/盒)(上海月旭提供); @1)C3(=A  
    高效液相装置带荧光检测器; Ox+}JB [  
    均质机; 6>- Gi  
    水平振荡器; T 2i\S9X  
    SPE转接头及50ml大容量上样器:Welchrom® SPE Adapter; szD BfGd%j  
    分析天平(精度0.02 g); pt8#cU\  
    SPE装置带抽真空系统:Welchrom® SPE Device; b ;t b&o  
    黄曲霉毒素M1标准品; S3_QOL  
    PBS 缓冲溶液:称取1.16 g Na2HPO4,0.20 g KH2PO4,8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中,用HCL或NaOH调节pH至7.4,然后定容至1000ml; X>VxE/  
    甲醇(色谱纯); ED R*1!d  
    乙腈(色谱纯); T|lyjX$Q]9  
    正己烷(分析纯)。  S]&7  
A49HYX-l  
4. 样品前处理 e+>&? x  
  • 牛奶样品
    称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品,置于50 mL具塞离心管中,水浴加热至35℃~37 ℃,6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液,待净化; h;sdm/  
  • 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)
    称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品,用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4,9500r/min下均质5 min,水浴加热至35℃~37 ℃,6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液,待净化。 mbRN W  
  • 乳粉和粉状婴幼儿配方乳制品
    称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中,加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中,玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温,移入100 mL容量瓶中,水洗烧杯并转移洗涤液,用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min,混合上清液,取50mL上清液待净化。 #y%?A;  
  • 干酪
    切取均质的样品5g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中,加2 mL水和30 mL甲醇,9500 r/min下匀浆5 min,超声提取30 min,6000r/min下离心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中,同时加入30 mL正己烷,振摇2 min,分层后,弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2 mL,转移浓缩液至离心管,烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗涤并倒入50 mL离心管中,加PBS溶液稀释至50 mL,6000r/min下离心5 min,上清液待净化。 9oA.!4q  
  • 奶油
    称取5g(精确至0.01 g)试样,置于50 mL烧杯中,用20 mL正己烷将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇,振荡30 min后,将全部液体移于分液漏斗中,待分层后,将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中,旋转蒸发仪减压浓缩至约5 mL,加PBS稀释至约50mL,待净化。 <sq@[\l}a  
sd~T  
5. 免疫亲和柱净化(3cc)
sS|N.2*  
  • 将IAC装于固相萃取装置上,接上大体积上样器,10ml PBS溶液活化柱子,流速保持在2–3 ml/min,确保上样前柱子保留少量(0.5ml)的PBS溶液,活化液不收集;
  • 将待净化液加入免疫亲和柱,流速不超过5 mL/min,不收集流出液;
  • 用约20ml去离子水淋洗柱子,流速不超过5 mL/min,抽真空1分钟,不收集流出液;
  • 用1.5ml甲醇洗脱,流速控制在1d/s,收集洗脱液过膜后上机测试
    注:免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用 !xxu~j^T  
:h+gSvn:  
6. 色谱条件: g np\z/'>  
    色谱柱:   Ultimate® XB-C18 250 mm x 4.6 mm,5µm(上海月旭提供) " '/$ZpY  
    预柱:     Ultimate® C18,5µm,ULT5BG18(上海月旭提供) w&7-:."1i  
    流动相:   水:甲醇:乙腈=11:4:5 /8SQmh$+e  
    柱温:     35℃ B|Rnh;B-  
    检测波长: 发射波长:365nm,激发波长:450nm 0/."R ;  
    进样量:   100µL )k8=< =s  
~iZMV ?w  
附:测试谱图 Dm j^aFB0|  
2@ >04]  
AFWcTz6#d  
,x?H]a )  
分析物
添加水平(µg/kg)
回收率(%)
RSD(%)
Aflatoxin M1
2 µg/kg
98.8
4.2
&t +   
评价一下你浏览此帖子的感受

精彩

感动

搞笑

开心

愤怒

无聊

灌水
 
快速回复
限200 字节
批量上传需要先选择文件,再选择上传
 
上一个 下一个