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近日，蒙牛纯牛奶被检测出强致癌物——黄曲霉毒素M1，消息一出顿时又掀起一股食品安全隐患的讨论。相比之前的三聚氰胺，黄曲霉素是否更难检测？现已整理出全套的专业检测方案，让乳和乳制品中黄曲霉毒素M1无处躲藏。 e<+<lj "
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1. 试用范围 )C]x?R([m 牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等乳制品 MWwJzVL8 q? z> 2. 方法原理 ' p} `i/ 黄曲霉毒素M1易溶于极性溶剂，因此均匀基质中的黄曲霉毒素M1可以通过甲醇/水震荡分散提取，对于高脂肪/油含量的样品基质加入正己烷予以脱脂。本方法采用免疫亲和柱净化，荧光检测器测定乳制品中黄曲霉毒素M1。 f6ZZ}lwaV V | ?WF& 3. 所需设备和耗材 9C
}qVoNu 黄曲霉毒素免疫亲和柱：Welchrom® IAC (1ml，25支/盒；3ml，15支/盒)（上海月旭提供）； HtBF=Bo q 高效液相装置带荧光检测器； qd2xb8r 均质机； kq/u,16@ 水平振荡器； 3)E(Ry QA3 SPE转接头及50ml大容量上样器：Welchrom® SPE Adapter； -Zy)5NB-tZ 分析天平（精度0.02 g)； s (PY/{8 SPE装置带抽真空系统：Welchrom® SPE Device； B@cz
?%] 黄曲霉毒素M1标准品； ^#SBp Lw PBS 缓冲溶液：称取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH2PO4，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中，用HCL或NaOH调节pH至7.4，然后定容至1000ml； {BOLP E- 甲醇（色谱纯）； FmT
`Oa> 乙腈（色谱纯）； Q< =Y 正己烷（分析纯）。 L#j /0IHD $WaZ_kt 4. 样品前处理 w-rOecwFvu 称取25g(精确至0.01 g)混匀的样品，置于50 mL具塞离心管中，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化； ;' 1Apy 称取25 g(精确至0.01 g)混匀的样品，用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH值至7.4，9500r/min下均质5 min，水浴加热至35℃～37 ℃，6000 r/min下离心10 min。收集全部上清液，待净化。 c E76L%O 称取10 g(精确至0.01 g)样品置于250 mL烧杯中，加入50 mL约50 ℃的水于乳粉中，玻璃棒搅拌均匀。溶解后冷却至室温，移入100 mL容量瓶中，水洗烧杯并转移洗涤液，用PBS定容至刻度后装入离心管6000转/分钟下离心15 min，混合上清液，取50mL上清液待净化。 P;GprJ`l 切取均质的样品5g(精确至0.01 g)于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，9500 r/min下匀浆5 min，超声提取30 min，6000r/min下离心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中，同时加入30 mL正己烷，振摇2 min，分层后，弃去正己烷层。重复用正己烷提取2次。提取液减压浓缩至约2 mL，转移浓缩液至离心管，烧瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗涤并倒入50 mL离心管中，加PBS溶液稀释至50 mL，6000r/min下离心5 min，上清液待净化。 fM" :f|
G 称取5g(精确至0.01 g)试样，置于50 mL烧杯中，用20 mL正己烷将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中，待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，旋转蒸发仪减压浓缩至约5 mL，加PBS稀释至约50mL，待净化。 I :&# U$ mw+j|{[
5. 免疫亲和柱净化（3cc） l%PnB
)F - 将IAC装于固相萃取装置上，接上大体积上样器，10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在2–3 ml/min，确保上样前柱子保留少量（0.5ml）的PBS溶液，活化液不收集；
- 将待净化液加入免疫亲和柱，流速不超过5 mL/min，不收集流出液；
- 用约20ml去离子水淋洗柱子，流速不超过5 mL/min，抽真空1分钟，不收集流出液；
- 用1.5ml甲醇洗脱，流速控制在1d/s，收集洗脱液过膜后上机测试。
注：免疫亲和柱从冰箱去除需升到室温后使用 -Enbcz(B w %u5< 6. 色谱条件： sp{j!NSL 色谱柱： Ultimate® XB-C18 250 mm x 4.6 mm，5µm（上海月旭提供） cjY@Ot*i$ 预柱： Ultimate® C18，5µm，ULT5BG18（上海月旭提供） BE4\U_]a3 流动相： 水:甲醇:乙腈=11:4:5 s`vSt*
]K 柱温： 35℃ x]' H jTqX 检测波长： 发射波长：365nm，激发波长：450nm F@^N|;_2 进样量： 100µL a7 )@BzF# yA}nPXrd 附：测试谱图 |Gc&1 *$
ZbyG*5i q swt\Ru6, j4vB`Gr] Zh? V,39
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