[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： 7gc?7TM  
b!<\#[ A4  
5O%?J-Hp  
F$j?}  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） 6}cN7wnm j  
`N}aV
Ns  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 4%$#   
~H c5M5m  
流  速：1.0 mL/min %M*2j%6  
TCR|wi] kW  
波  长：242 nm N(l  
`aDVN_h{6  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） onU\[VvM  
P~*'/!@  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 @R_ON"h  
[Y4Wm?  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） ZY|$[>X!  
(h|E@gRa  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A  u]OY
u  
#}lWM%9Dy  
柱  温：30℃ | =:<[FU  
DB+oCE<.#  
6Nws>(Ij  
RF= $SMTk  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） ^ib =fLu  
iwy;9x  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 S%jW}v';  
`n
RF"T_  
附件二 7GvMKtuSK  
h'+F'1=  
BV6B:=E0  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS XE]"RD<z  
^zW=s$\Fo  
色谱条件： T! I3.  
D/afa8>LQH  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm gT(
8.<h8  
dvM%" k  
进样口：250℃，不分流进样 +4Fw13ADE  
G)q;)n;*=  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） E $P?%<o  
^wD`sj<Qg  
进样量：1μL I9dX\w}  
!zsrORF{  
流速：1 mL/min 7xFZJ#  
LIrebz  
质谱条件： "%b Gwv  
[k0/ZfFwV  
接口温度：280℃ *<[zG7+&[  
7<Qmpcp =  
电离方式：EI Zu<S<??Jf  

1{wbC)  
电离能量：70eV 1*|/N}g)  

k]^ya?O]p  
溶剂延迟：7min !Qf*d;wxn(  
+xgP&nw[-  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 @SyL1yFX  
;4 (}e{  

6(BgnH8oc   序号 oam;hmw	@OGG]0 J   保留时间/min 0\vG <	]31=8+ D   中文名称 =Xg/[J%	se i2\l 8q   英文缩写 .Zj`_5C	lGBg8/[   SIM离子 qv}ECQ
<9piKtb|L   1 8e3eQ	AS@(]T#R   8.265 \@WVeFr	P.5l9Ns(O   邻苯二甲酸二甲酯 |/^S%t6*	eBs.RR ]O   DMP  N%xCyZ	<R;wa@a>   163、77 U1X"UN)
7=9>yba)^   2 H@Ot77(*	vdAd@Z~\   9.135 R-9o3TPa	i9XpP(mf   邻苯二甲酸二乙酯 [}ja\!P	;'8Wl   DEP Fd\uTxykp	`dG;SM$T,   149、177 }Le]qoW['
wCg7JW#   3 Z>bN U	m^!j)\sM5   10.888 a;Y:UwD9*	8IRKCuV   邻苯二甲酸二异丁酯 K+!e1 '	P>iZgv   DIBP ocW~ I3	/~w*)e)   149、223 %p )"_q!ge
QJ;dw8   4 5)T[ha77u	|~ fI=1;;x   11.637 TS9<uRO0	$.4A?,d   邻苯二甲酸二丁酯 7WS$fUBi	2I_ yUt-   DBP ZBpcC 0 z	=EFh*sp   149、223 c86KDEF
4h|*r !   5 l1k&@1"	oio{@#DX`   11.979 j [lS.Lb	o}:x-Y   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 SkmTW@v	]dNNw`1\V   DMEP ;K\2/"$QD	_-y1>{]H   59、149、193 /}~=)QHH
C_Q3 ^mLx   6 S!u8JG1	bl a`B=r   12.72 fub04x)	MZQDFuvDxZ   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 s tajTN*J	?V!5V Ha   BMPP C @<T(`o	6?[P^{GpH   149、251 Z[*unIk
K:'^f? P   7 @z ",1^I	bVU4H$k   13.044 C3W4:kbau	Pp!4Ak4TT9   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 a r8iuwfZ	:5&D6   DEEP Jg=!GU/::	$k0(iFzR1   45、72 rc[~S
,uC-^T |n   8 I?g}q,!]	ni{'V4A   13.41 1-E6ACq	uFSU|SDd.   邻苯二甲酸二戊酯 ;dUKFdKH}	4@fv%LOQo   DPP [pTdeg;QE	1Zc=QJw@   149、237 @U=y}vi8
YRVh[Bqg`   9 \54B	Jfr'OD2$ %   15.552 o% ~fJx:]y	aXj UDu7   邻苯二甲酸二己酯 G?$o+Y'F	w;ZT-Fti   DHXP bgBvzV&'8	< e BmCrJ   104、149、76 >&;J/ME
^yB] _*WJ   10 -&7?!<f	95#]6*#[4!   15.694 &T,,fz$	8[J%TWq%9   邻苯二甲酸丁基苄基酯 [?7QmZK	#1$4<o#M   BBP n+sv2Wv:	 DlCN   149、91 h?dSn:Y\?
:a)RMp+^0   11 H][TH2H1	3HtM<su*h   17.153 >4wigc	I>.pkf<V   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 yWRIh*>nE	W gyRK2#!   DBEP Fu{VO~w	.?NfV%vv   149、223 A94:(z;{
cu}( \a   12 [\Wl~ a l	b~fl,(sZp   17.81 aK6dy\	90+Vw`Gz=   邻苯二甲酸二环己酯 3"Oipt+	*sp")h#Z   DCHP hb8oq3*x	pSQ2wjps   149、167 2 d|^$$#`
][Tw ^r&   13 @dK_w'W	/z^v%l   18.056 !8|r$mN8	{@ Lun6\   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 OF1^_s;	g,YF$:e   DEHP )2EvZn	$U ._4   149、167 T)22P<M8
=\8 x   14 3?aM\z;	0?FJ~pu   20.444 |;V-;e*	6&E[hvu   邻苯二甲酸二正辛酯 5R.jhYAj	KpG'E    DNOP B;Z _'.i,d	yWc%z6dXC   149、279 7{"F%`7L
9gK1Gx:   15 [xfg6	]_s;olKNI   22.98 XOS^&;	5't 9/8i   邻苯二甲酸二壬酯 ^|U5 @u_	'q/C: Yo   DNP gi: M=	p8s%bPjK   57、149、71 %P R,TWe

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 F1o"H/:n  
#8jH_bi  
附件三 #3u471bp  
gb0ZGnI  
QCWk[Gx  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 T)B1V,2j=  
$$G^#t1=XZ  
eL!G, W  
9wFQ<r  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 {n%U2LVL  
NeyGIEP  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 oYN# T=Xi  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% way-Q7  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% [}_ar  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% gB@Wv91  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% |Y1<P^  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% *H RxC  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% %t
zz3Y  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% *WgP+"h  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% Cst>'g-yB  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% 2h6F j&  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% &[KFCn  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% {w^flizY  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% z[ ;{p.W  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% %GS)9{T&  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% "v3u$-xN1  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% q#Qr@Jf  
Phgn|  
m x,X
!}  
   95
wV+ q*  
t@v>eb  
j4}aK2[<  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 J= |[G'  
(lPNMS|V  
HKcipDW  
]-fZeyY$  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 vPwDV_zk  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% ;.:UfW  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% d)o<R;F  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% |k+&weuY  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% WD?V1:>+  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% {U(h]'  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% @xkM|N?  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% *
j*jA/  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% 5^d%+*l;q  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% mifYk>J^9  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% D@JHi
'F  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% ;5%&q6&a  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% [ $"iO#oO  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% R
&alq  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% p$%h!.~99T  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27%  7:p]~eM)  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 WR a+zii,  
O*rmD<L$  
>nhE%:X>  
v:"m  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 f#v#)Gp+  
kPO6gdwq$  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 ~#x:z^U  
CzSZ>E$%U  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 1 Itil~  
oSn! "<x  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 "]T$\PJ
un  
}Kj Ju ;  
qX5yN| A4  
Dn_"B0$lk  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 )u8*zwq  
<&5m N  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， J3e
:Y!  
*;hY.EuoFz  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 jg [H}  
F$Im9T6  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 N0Efw$u  
uf)W-Er6~  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 ;} lT  

MA\m[h]  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 Kt W6AZJ  
KD% TxK  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 Y[Q@WdE9  
A4G,}r *n  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 'K@-Z]  

Inn@2$m~  
DKne'3pH  
g,}_G3[j0m  
0KYEb%44  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： 1xD=ffM>8N  
pNOwDJtK  
' qWALu  
.l>77zM6  
1、样品提取方法： r
YogW!  
ZYI{i?Te#  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 ;gBRCZ
 
[<-
  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 OZx W?wnd  
,$+lFv3LE  
8dZ0rPd?  
p<zSJLN  
2、固相萃取方法： "5-^l.CKH  
~p1j`r;  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： J/\V%~ 1F  
"$N#p5  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； y=`2\L" O  
"]z-: \ V  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 3D`YZ#M  
OlAs'TE^  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； |p><'Q%*  
7]9 a<  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 q8^^H$<Db  

U4gF(Q  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 %K\?E98M  
,_yhz0.  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 zRq-b`<7V  
wW#}:59}  
1jy9lP=  
PIH*Rw*GKZ  
补充说明： AI,(
z;{P  
lD"(MQV@0  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 UG)8D5  
r9 ui|>U"  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 Kc K>%%  
ZHGC6a!a  
x9;gT&@H  
dgA-MQ5{  
^1Zeb$Nw'  
RAG3o-  
7PANtCFb&  
COW}o~3-4  
JMH8MH*  
&4b&X0pU  
{_S}H1,  
`e(vH` VZ  
xZ4~Oo@@_'  
N5i+3&  
$OP7l>KZY  
:,J}z~I,lB  
b@S Cn9  
.h9l7 nZt  
Q($Z%1S  
*e-A6Sh  
*cC_j*1@  
xfb]b2  
3:8{"md@2  
6S+U&Ce\  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS xo&]RYG[<  
#*TEq
 
色谱条件： e_
V O3"  
7{I h_.#  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ap{
2$k ,  
* 1Od-3  
进样口：250℃，不分流进样 4"xPr[=iG  
D<V~f B  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） (4\d]*u5-c  
 +QE^\a  
进样量：1μL HW7; {QMg
 
xCYE B}o9r  
流速：1 mL/min $2u 'N:o  
S6fL>'uQ  
{'AWZ(  
`\m*+Bk[5  
质谱条件： #'q<v"w  
6<'21  
接口温度：280℃
}sx_Yj  
WyZL9K{?  
电离方式：EI Y& F=t/U2  
Z*])6=2Q  
电离能量：70eV !H2QjW  
zLF?P3^  
溶剂延迟：7min 0d3+0EN{  
Q7g>4GZC  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 JkGnKm9G  
;r6jx"i  
sg8/#_S1i  
7^M9qTEHp  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

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