[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一：
qzHqj;  
+{C9uY)$vf  
lA.;ZD!  
4$?wD <  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） InP y:}  
Nr]8P/[~  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 H7yg9zFT N  
/J[H5uA  
流  速：1.0 mL/min &G pA1  
O+E1M=R6h  
波  长：242 nm 
Xb<DpBrk  
`dgM|.w5=  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） U50s!Zt45  

)@<HCRQ'q  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 O/DAf|X|  
];pf  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） q?imE~&U  
Z@uTkqG)  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A "+n4c'  
V\@jC\-5Vt  
柱  温：30℃ QM[A;WBr7  
kfqpI  
" K 8&{=  
A$%Q4jC}  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） @,x_i8  
O;X(pE/G  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 XMN?;Hj>  
J$#h(D%  
附件二 <#+oQ>5s  
gEr4zae  
hWq.#e6  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS $nB-ADRu@  
_ yfdj[Ot`  
色谱条件： gEZwW]r-  
gd337jw  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm CY*ngi&  
PUbaS{J7  
进样口：250℃，不分流进样 e#>tM  
Dh2:2Rz=#7  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） p=!#],[  
33Ssylno
 
进样量：1μL z 0~j  
3g4e']t  
流速：1 mL/min `S"W8_m  
q 1YLq(e  
质谱条件： +
$>N]1
 
c{1V.  
接口温度：280℃ [^<SLTev  
}qer  
电离方式：EI tf4*R_6;1$  
O$a#2p&  
电离能量：70eV hlX>K  
|2z}Xm5\  
溶剂延迟：7min KwS`3 6:  
fD'/#sA#'  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 L>SZgmV+  

AlO,o[0  

BsKbn@'uC   序号 [M4xZHd#o	x8Q~VVZr   保留时间/min My. dD'C	`%|u!   中文名称 @|DmE!)	[6H}/_nD   英文缩写 ~]&B>q	Rfht\{N 7   SIM离子 [a@B =E
*|oPxQCtK   1 qYiv 	z=qWJQ   8.265 gt/!~f0r	|~eY%LB   邻苯二甲酸二甲酯 )S2iIi;Bq	}t \ 10nQ   DMP #7o0dE;Kg9	`NQ{)N0!   163、77 e8{^f]5
,ijW(95{k   2 pw3(t	>b>gr OX   9.135 S6GMUaR	t@)my[!   邻苯二甲酸二乙酯 @V$I?iXV	6 Uw;C84!   DEP yX'IZk#_L	D^u\l   149、177 t!{x<9
$@2"{9Z   3  %}h`+L	MqdB\OW &   10.888 5mavcle{4r	Hd0Xx}3&   邻苯二甲酸二异丁酯 vTd-x>n	/PqUXF   DIBP 1~@|eWr|	E*k([ZL   149、223 &Mj1CvCv
U Du~2%   4 ' #H")i	?E7=:h(@t   11.637 B\[-fq	D0ruTS   邻苯二甲酸二丁酯 zQc"bcif5(	~<,Sh~Ana.   DBP ao$):,2*	lw[<STpD;   149、223 XWtiwf'K
}g{_AiP rv   5 :l"dYfl	<*Ub2B[m   11.979 5B*qbM	tD-gc''H   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 T3z(k la	8lwM{?k$   DMEP Y<Q\d[3^F	I4ilR$jg   59、149、193 S}7> RHe
x=,8[W#XT   6 U$'y_}V	VAKy^nR5j   12.72 t5)J;0/	A5XR3$ 5P   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 [H,u)8)	^~l  $&~   BMPP 2-v\3voN	<AU Wby,"   149、251 -t4 [oB
o.^y1mH'   7 bx>i6 R2	~E*d G   13.044 r7I B{}>-	0{ R/<N   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 y  $V[_TN	YKs4{?vw   DEEP A1A3~9HuK	ez*j jm   45、72 \+Y!ILOI
x~/+RF XF   8 qI2'u %	@ls.&BHUP   13.41 ?63&g{vA	@J vZ[T/   邻苯二甲酸二戊酯 9Nt3Z>d	N[k<@Q?*a   DPP hI~SAd ,#A	8QF`,o XQO   149、237 >o[|"oLO
6^YJ]w   9 z[&s5"	T9)wj][ .   15.552 RJc%, ]:	.>]N+:O   邻苯二甲酸二己酯 =B(mIx;m	/EFq#+6   DHXP (5`T+pAsV	)5yj/0oT   104、149、76 s AE9<(g&@
]\;xN~l   10 Lk.h.ST	V5MO}   15.694 I@./${o	*Bw#c j   邻苯二甲酸丁基苄基酯 C\Ayv)S#2	^:DyT@hQB5   BBP ,sDr9h/'C3	1K[(ou'rl   149、91 5"=:#zN
PDC]wZd/   11 \4s;! R!	X8CVY0<o   17.153 1xTTJyoq	6tdI6   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 Sdc*rpH"(	>L[lV_M_>   DBEP ;.s:X	j=j+Nf$   149、223 p\S8oHW e
n\= (S9   12 [hU=mS8=^	(,LL[&;:   17.81 hTw}X.<4	;0j*>fb\q7   邻苯二甲酸二环己酯 .B$h2#i1	Taasi` k   DCHP hTTfJDF	!}q."%%J_%   149、167 NI\H \#bJ
*V|zx#RN   13 _?b;0{93u	F+*Q <a4   18.056 }17bV, t	KjYDFrR4   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 k7T alR	!!+Da>   DEHP rfTe	)E`+BH   149、167 $8@+j[>
!KDr`CV &   14 $e1:Q#den2	\HG$V>2   20.444 ~B]jV$=	`[@VxGy_   邻苯二甲酸二正辛酯 2 `&<bt[g	A'~#9@l<   DNOP 5H!%0LrJg=	Ky6+~>   149、279 Bb_Q_<DTs
uk6g s)qxC   15 1RA }aX	4cB&Hk   22.98 LYNZP4(R	^$}/|d(   邻苯二甲酸二壬酯 @T/qd>T o	3W'FcE)|E   DNP .FJ j	N"~ qoJO   57、149、71 0@v 2*\D#

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 4x=V|"  
MtMvpHk  
附件三 aS c#&{  
t-3v1cv"  
lCM6T;2ID  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 eD>-`'7<  
K0d -MC  
]#vvlM>/  
Q `J,dzY  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 0"wbcAh)  
/\IAr,w[  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 eO|^Lu]+  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% =:t@;y  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% f;@b a[  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% $@+p~)r(l  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33%  [%gK^Zt  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% .
N2nJ/  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% ];d5X  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% qaCi)f!Dl  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% Nqo#sBS  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% #z-iL!?  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% Mipm&5R  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% Cu)%s  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% _D7HQ  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% .g(\B  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% Se;?j-  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% q>(I*=7  
>[E|p6jgT  
^ 2Fs)19R  
   {"gyXDE1  
}v'PY/d.  
~Uwr68 9N  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 !S >|Qh  
yp^[]Mz=  
3-_U-:2"  
5 vu_D^Q  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 %Zv(gI`A  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% 5u u2 _B_L  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% c=jI.=mi3  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% 0]2B-o"kI  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% Hq"<
vp  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% ai;gca_P#  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% Ei?9M
^w  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% 3q.[-.q  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% _1>(GK5[  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% _'v }=:X  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% [ilv/V<  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% $E9daUt8"J  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% 'j,Li(@}  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% (61twutC  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% ]\9B?W(#  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% I$6 f.W  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 RW8u0 ?b  
`&7
?+s  
Q_Squuk  
)PNk O3  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 gipRVd*TA  
U<byR!qLie  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 czi!q1<vg  
0k]N%!U  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 74wa  
NO1]JpR  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 Q-CVq_\3I  
#]^`BQ>  
#R|4(Hl L  
24l9/v'  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 U?yXTMD  
g; @PEZk1  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， ^r$5];n  
i/B"d,=<  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 5@5="lNjS  
:g_ +{4  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 '.yr8  
'-{jn+,
 
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 vi|ASA{V  
e&nw&9vo  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 2YQ$hL~  
hG)lVo!L4j  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 d~%Rnic6*  
1Btf)y'  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 ['<rfK  

8,7^@[bzXx  
_ VKBzOH  
o#fr5>h-w  
Y 3h`uLQ  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： tp*.'p-SI  
Gh>&+UA'$1  
w;W# 'pE  
WPI<SsLd  
1、样品提取方法： ' Dcj\=8
 
Bs)'Gk`1  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 0Q?)?8_  
lo n V_Xx  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 n&OM~Vs  
s|I Y t^  
+`,;tz=?  
ttOk6-  
2、固相萃取方法： @@JyCUd  
ja^_Lh9  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： 7UIf  

TZ&X0x8  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； v5>A1\  
<qg4Rz\c]  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； ] # VHx  
m??Py"1y  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； cbN;Kv?ak}  
U0gZf5;*  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 m9 vX8 ;.  
=Ox}WrU~  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 }R`Rqg-W  
q3AqU?f  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 q`,%L1c4  
,jOJ\WXP  
w lH \w?  
M@#T`aS  
补充说明： V"m S$MN  
h%:rJ_#Zl  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 B*N1)J\5  
GlnO8cAB  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 TP"cEfs x  
s'h;a5Q1'Q  
Y8zTw`:V  
VGmvfhf#"  
4b:|>Z-  
T1] ?E]m{  
V&w2pp0  
p&h?p\IF  
H_X^)\oJ  
HwFX,?  
q0iJy@?A  
>#w;67he2  
gv''A"  
L5-|-PP|;  
$VuXr=f}  
4f([EV[6dK  
7uF|Z(  
uh)S;3|  
Cf 2@x  
k, HC"?K  
=l/6-j^  
WMSJU/-P  
>]\I:T  
o4);5~1l  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS xu2KEwgb  
\D7b Tn  
色谱条件： '<R>cN"  
0!T`.UMI  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm CKYg!\g(:  
KK){/I=z  
进样口：250℃，不分流进样 /Mqhx_)>A  
M+)a6ge  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） l8\UO<^fY  
#BC"bY  
进样量：1μL @ZjT_  
{.p.?  
流速：1 mL/min J2YQdCL  
%6UF%dbYH`  
qJhsMo2
IH  
i0vm0 0oT  
质谱条件： ~b f\fPm  
dftBD  
接口温度：280℃ /
^.|m3  
C]`uC^6g  
电离方式：EI y0zMK4b  
asT-=p_ 0.  
电离能量：70eV %TB(E<p`  
p_FM 2K7!  
溶剂延迟：7min Ei;tfB  
h9vcN#2
2D  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 ).T&fa"  
La
4S/.  
f6Qr0Op  
 T]#V  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

9&6juL  
(O.%Xbx3  
8{ zX=  
04a ^jjc