[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： H>
X>5_{}  
L9unhx  
M;vlQ"Yl'  
[nPzhXs  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） M-qxD"VtV=  
<{z3p:\  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 1~xn[acy  
MCrO]N($b  
流  速：1.0 mL/min T~~$=
vP9  
2p;}wYt  
波  长：242 nm @Jn:!8U0  
~G^}2#5  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） kcz#8K]~  
'St= izhd  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 (yTz^o$t|  
2"Uk}Yz|  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） lnC Wu@{  
bq&S?! =s  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A +2f
J  
F*] .  
柱  温：30℃ MMr7,?,$  
3a)Q:#okD  
2CgIY89O  
3N*C]  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） 7`<? fO  
-&D6w9w  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 AbI*/|sY  
Jd2Y)  
附件二 E/P53CD  
EjE`S_i=  
*xTquV$  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS c!wB'~MS#  
Prx s2 i 8  
色谱条件： V*uu:  
WREGRy  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm > BCX%<&  
&n kGdHX/a  
进样口：250℃，不分流进样 usf(U>  
2]f.mq_PD  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） , )3+hnFY  
<{Wa[ 1D  
进样量：1μL 3PeJPw  
V t
;&2v  
流速：1 mL/min )@M|YM1+  
3_-m>J**  
质谱条件： kIo?<=F8T  
m':m`,c
!  
接口温度：280℃ ]2 N';(R  
`?m(Z6'  
电离方式：EI wt,N<L  
B)*%d7=x  
电离能量：70eV -2?fg   
GrIdQi^8  
溶剂延迟：7min 2YQ$hL~  
d~%Rnic6*  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 A+&Va\|x  
7ac3N  

9X~^w_cdk   序号 wAYc)u#	suwj1qYJ4   保留时间/min 8wd2\J,]	V{r@D!}   中文名称 ORTM[cL	2},}R'aR   英文缩写 ~i4@sz&	\wd~Y   SIM离子 <tNx*ce5
(\T?p9   1 @S}'_g	r|(Lb'k   8.265 2yNlQP8%	_%x|,vo`(   邻苯二甲酸二甲酯 #Jn_"cCRLx	=3@^TW(j   DMP 7YsFe6D"	J[9jNCq|   163、77 +}^ 
twJck~l~n   2 sh0O~%]g	UZ y   9.135 5ewQjwW0	1j}o.0\   邻苯二甲酸二乙酯 ==$Ox6.	,Qp58u2V   DEP 0\.y0 K8	_wm"v19   149、177 iE$0-Qe[3
_c`Gxt%   3 iHTxD1D+H	%2V_%KA   10.888 ?"J5~_U .	eml(F   邻苯二甲酸二异丁酯 xqLLoSte	u2o6EU`   DIBP ;p)gTQa	1NA>W   149、223 lfb]xu]O
kx*=1AfU+Y   4 LBbk]I 	N'3Vt8o,   11.637 L-",.U*;	!Zlvz%X   邻苯二甲酸二丁酯 QzCu$ [	Sc`W'q^X   DBP oX8e}	o!dTB,Molr   149、223 eZJrV}V
$2~I-[   5 8F9sKRq|rO	n3SCiSr   11.979 }`FC'!( 	.v?Ir)   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 &-mPj82R	6p|*H?|It   DMEP -rb]<FrL^	!$ItBn/_   59、149、193 G$kspN*"A
KjFNb;mM   6 6Ef GJq	XMzL\Edo   12.72 UlF=,0P	EA_6L\+8&   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 H~y 7o_tg	H%2Y8}   BMPP )xtDiDB	Ck <g0o6   149、251 eF)vx{s
1QkAFSl3   7 4'L %Wz[6	J*@(rb#G   13.044 r[2N;U	Sw!/IPO   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 ^'"sFEV7RN	)dFTH?Mpo   DEEP RJMrSz$	5~WMb6/   45、72 dL9QYIfP
<&&xt ?I.   8 4%5H<:V7	-QaS/WO_   13.41 v5i?4?-Z	<L+D   邻苯二甲酸二戊酯 'c#ZW |A	G7lC'~}   DPP 38P_wf~\	hk"^3d!   149、237 '{EBK
&o/&T{t}   9 O'JH= '	n?@o:c5,r   15.552 kl[bDb1p	&..![,)w^!   邻苯二甲酸二己酯 \@4QG.3&	3 Yl[J;i   DHXP HkxFDU-K	?MeP<5\A   104、149、76 D4[5}NYU
1`_Mc ]   10 {b/60xl?	@R}L 4   15.694  wSV[nK	& PHHacp   邻苯二甲酸丁基苄基酯 +}4vdi"	o?{VGJH<v   BBP =NJb9 S&8A	" I`Y JEv   149、91 [zf9UUc~
*+p'CfsSka   11 P!bm$h*3?	!2&h=;i~V   17.153 0 HxF#SlKM	&5d>jEaB}   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 5&94VQ$d	4dfe5\   DBEP =}c~BHT	3*arW|Xm   149、223 C!Tl?>Tt
iwmXgsRa9}   12 NWNgh/9?	BwBv'p+n   17.81 J-,T^Wv	fYC AwS{   邻苯二甲酸二环己酯 7x1jpQ-	X$st{@}ZB   DCHP beIEy(rA	Y8C Xinh   149、167 'vCFT(C-
Z&}94   13 OY@ /18D<>	_e?(Gs0BM   18.056 g/T`4"p[H	>B3_P4pW9   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 b)`<J @&{	ThF I=K   DEHP iXXgPapz	|*8 J.H*r   149、167 )2:d8J\
t*n!kXa   14 NO;+:0n	_d,_& 7   20.444 d)9=hp;, V	(i&:=Bfn)   邻苯二甲酸二正辛酯 'BtvT[KM	rr9N(AoxW   DNOP jIg]?4bW[	"}(*Km5Po   149、279 `Z0FQ( r_
!CY:XQm   15 _?CyKk\I	#;z;8q   22.98 F}wy 7s2i	f; w\k7 #   邻苯二甲酸二壬酯 UQc!"D	OD]` oJ|   DNP %PM&`c98z7	Swa0TiT(   57、149、71 2. '` mGu

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 &|yLTx  
T$Z9F^w  
附件三 4l D$'`  
&L o TO+  
?h<4trYcv  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 e`*}?N4d  
c*USA eP  
#3uv^m LGa  
|vI*S5kn6A  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 2y[Q  
_]:b@gXUw  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 fN vQ.;  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% A(Ct^/x-  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% 62xOh\(  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% X><C#G  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% Bk8}K=%w  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% d_[H|H9i6  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% sG g458  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% D]]e6gF$e  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% KQ~y;{h?b  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% ~!uX"F8Xl  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% :>-zT[Lcn  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% /R&`]9].s  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% =OufafZb  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% N^ +q^iW  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% zC50 @S3|  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% &M-vKc"d  
p22AH%  
m.++nF  
   zJ
XK:/  
8T+9 fh]I  
2: QT`e&  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 ~vTwuc\(H  
l/3=o}8q  
eb7UA=[Z  
?|,:;^2l1  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 zgY VB
}  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% !aSj1 2J  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% I^EZ
s6~  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% P;"moluE;  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% Jqb~RP~  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% o2dO\$'  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% X$KTsG*  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% ]AQ}_dRi=  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% 3Ewdu
 
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% ~1;M4K  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% 3!8(A/YP;  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% 9287&+,0r  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% tTBDb  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% O|sk"YXF  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 8Azh&c  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% 0 aH&M4  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 _ba.oIc  
Ot!*,%sjQ  
XV<{tqa  
FPuF1@K  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 S6|L !pO  
naW!Mg a  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 ?pp|~A)b  
3l''   
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 c9xc@G!  
MF~Tr0tOC  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 Mhj.3nN  
/N(Ol WEp  
#1` lJ  
C
Ejf&n  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 /tGj`C&qtw  
Oe*+pReSD  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， A#B6]j)  
9&uWj'%ia  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 /_MEb42&  
/_G^d1T1?L  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 e+5]l>3)f  
#YMU}4=:  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 O1_dA%m  
-gpF%g`H  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 bQ"w%!  
S>o
Qm  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 62 biOea  
k2xOu9ncEj  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 tDl1UX  

u(1m#xr8$  
x^)?V7[t  
d pS@:  
3x W:"  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： d!T,fz/-.  
8i;drvf  
1WqCezI  
PO'K?hVS^w  
1、样品提取方法： <?KgzIq2  
\ CcVk"/  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 @qcUxu4  
# {k $Fk  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 o-_,l J7o^  
l8+1{ 6xP  
^=-25%&^  
^oC>,%7  
2、固相萃取方法： Su,<idS  
h Ks  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： + rN#
 
`3K."/N6c  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； %|/\Qu  
56C'<#  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； th"Aatmp  
YyYp-0#  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 0 >(hiTy<  
ZLP0SCkuR  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 V+})$m*>  
{Aj=Rj@  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 ,4,./wIq  
7 0R_O&f-k  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 -ebyW#  
zP!j {y4w  
*'@T+$3s  
5cr\ JR  
补充说明：
ln09_Lr  
vF{{$)c  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 `y& 2Bf  
Q"GZh.m  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 W_]onq6  
b5
%T)hn=  
]n4G]ybK%  
 }}d,xI  
;c#jO:A5  
GaOM|F'>  
3c[TPD_:  
1>_2 =^[  
FW
QNO(  
Au{J/G<W@  
w@hbY:Z9z  
[|APMMYK1  
Kr@6m80E5  
Z3z"c B  
+ ;N;r/d_i  
&O^t]7  
({WV<T&  
\JIyJ8FleC  
w7QYWf'  
 /J[s5{  
-nDY3$U/  
+PKd </*]  
eR: C?v  
5Tq*]ZE  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS D4$2'h  
2&XNT-Qm  
色谱条件： K>G.HN@  
hRZYvZ3  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm sq?js#C5  
Y-lTPR<Eq  
进样口：250℃，不分流进样 slAR<8  
V&7NN=  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） ^0&jy:{  
ik1asj1  
进样量：1μL pfHfw,[  
2D/bMq  
流速：1 mL/min \&47u1B  
ld3H"p rR  
L7R!,  
sf/m@425  
质谱条件： &hrMpD6z6i  
iiF`2  
接口温度：280℃ ix$ ^1(  
aRElk&M  
电离方式：EI v|KIVBkbT  
g rCQ#3K*?  
电离能量：70eV /nsBUM[;  
:,M+njcFc  
溶剂延迟：7min ("F$r$9S  
QAt]sat  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 H-nhq-fut  
cvo+{u$s  
+nHr+7 }  
jMCd`Q]K  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

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