[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： 8^ #mvHah  
2`Gv5}LfyR  
qrBZvJU  
wda';@y5(  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） #`ejU&!6  
M_1;$fWq  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 g9>~HF$U  
wNDbHR  
流  速：1.0 mL/min S/gm.?$V  
m 7LUrU  
波  长：242 nm \l,rpV
v5m  
6STp>@Ch]"  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） $a#H,Xv#  
R7_VXvm>z  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 q|dH~BK  
wAF,H8 -DK  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） 1oY^]OD]W  
wk$,k  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A q``wt  
!G?gsW0\h  
柱  温：30℃ h @/;`E[  
E X "|H.(  
\3zj18(@8!  
X.#oEmA,P  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） 8]"(!i_;)  
Hf
c"L>  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 $g\&5sstE  
*l+Cl%e  
附件二 }nrXxfu  
d8x%SQ!V  
WxUxc75  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ?J!
3j{4e  
{qpi?oY  
色谱条件： o
y\B;aAK  
lj[,|[X7`  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm Gt-UJ-RR y  
P~ 0Jg# V  
进样口：250℃，不分流进样 >lzA ]aM$c  
M0'v&g  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 3YL l;TP_  
/n{1o\  
进样量：1μL E3l*8F%<3  
S\ ,mR4:  
流速：1 mL/min Paf%rv2  
'\7G@g?UZ  
质谱条件： "VUY
h$=[  
\=e8%.#@J  
接口温度：280℃ E4%j.  
;`j/D@H  
电离方式：EI `wz[='yM  
aMuVqZw  
电离能量：70eV bud&R4+  
VD7i52x S  
溶剂延迟：7min ]7YNI S  

#%,RJMv  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 v! hY  
'-
PC7"o  

2.I^Xf2   序号 IQ!Fv/I<	sfD5!Z9#1   保留时间/min S33j?+ Vs	al^!,ykc   中文名称 '?5j[:QY@	,J=P,](   英文缩写 *|:Q%xr-	p.JXSn   SIM离子 nhT(P`6
sH#X 0fG   1 |F$BvCg	lx0~>K]   8.265 T2'RATfG	a$11PBi[9   邻苯二甲酸二甲酯 0"WDH)7hJ	- xm{&0e)   DMP }(FPV*mS	"9y( }    163、77 k%'m*Tf
*s4\\Wb=   2 }%!tT\8	Fz q41jiS   9.135 P1>AOH2yG	|+,[``d>"   邻苯二甲酸二乙酯 PA;6$vqX	"h"NW[R   DEP O~Wt600{E	U Z_'><++   149、177 `RRE(SiKU
F'm(8/A$   3 m6mwyom.	K{fsn4rk   10.888 _~'+Qe_o$5	A=5epsB   邻苯二甲酸二异丁酯 XL}"1lE	U977#MXf   DIBP @Yw,nQE)b	$4SzUZ0   149、223 E6B!+s!]
266oTER]v:   4 o|pT;1a"	~V=<3X   11.637 Z)9g~g94	^D^JzEy'?C   邻苯二甲酸二丁酯 \G@wp5	9Z "+?bv/   DBP G9P!_7 2	m#/_x   149、223 {:nQl}
t`'iU$:1f   5 \VMD$zZx	L)QE`24   11.979 LA3<=R]	?' ]h%'Q   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 uQb!=]	kUx& pYv   DMEP h&3YGCl	2L_6x<u'   59、149、193 /.Nov
/ Ss7"*JLe   6 IxR?'	s^OO^%b   12.72 dx*qb	:1q4"tv|   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 . v@>JZC	{+<P:jbz;   BMPP Z+`{7G?4m	U!%!m'   149、251 jeyLL<
juF{} J2   7 9~rUkHD	f~OU*P>V@   13.044 I]"96'|N	)?M9|u   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 Uawpfgc}	lDC$F N   DEEP kc'pN&]r:	GsbAlN P   45、72 F ["wDO
q{ 2I_[p   8 @UBjq%z	b?4/#&z]   13.41 -"Y{$/ B	Ed0IWPx   邻苯二甲酸二戊酯 GBFw+v/|4	b5IA"w   DPP >StO.Q99	SYeadsvF   149、237 o 47r<>t
p_ Fy>j   9 y~ G.V,0	ri C[lB   15.552 3'c\;1lhT	 %dErnc$   邻苯二甲酸二己酯 VKm!Ri$	04J}UE]Ww   DHXP $rXh0g	1[*U YcD   104、149、76 k"kJ_(
~9F ,%   10 r4x3$M c	AeIrr*~]B   15.694 RUCPV[{b	PCd0 ?c    邻苯二甲酸丁基苄基酯 d1!i(MaV!	#X: 'aj98   BBP GN#< yv$av	CV$],BM   149、91 KPSh#x&I
$@\mpw ANl   11 B)$c|dUV	dAP|:&y@   17.153 L?_7bXoD	TUL _TR   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 }14{2=!Q	;E~4)^   DBEP 0U66 y6	d#:3be{|&q   149、223  "SN4*
s/"&9F3   12 kH*Pn'	Kzy/9   17.81 @/J[t	*y`%]Hy<   邻苯二甲酸二环己酯 !DjvsG1x	LL!.c   DCHP HLQ"?OFlz	J MX6yV   149、167 fBBa4"OK=
50jOA#l[   13 -O:_!\uA	F}Mhs17!|   18.056 . F&9.#>	zHB_{(o7   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 >Sk[vI0Y	?tf&pgo   DEHP u# W5` sl	,Y_{L|:w   149、167 G" b60RQ
[~5p>'   14 (lA.3 4.p	Eu@ 5L9A   20.444 NQTnhiM7$	OL59e% X   邻苯二甲酸二正辛酯 ske@uzAz	6,Hqb<(   DNOP R)Q4	!KS F3sz   149、279 z,;;=V6 j
1ZJ4*bn   15 /z." l!u6	S^RUw   22.98 4Wel[]	S[M4ukYK   邻苯二甲酸二壬酯 C.a5RF0	.,2V5D-${   DNP Pd=,$UQp	>.9eBz@   57、149、71 >X}{BDMb.

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 *<3iEeO/R  
tQnJS2V"{u  
附件三 {q2<KRU2+#  
9;:7e*x]lc  
@f' AWeJ2  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 Nuo<` 6mV@  
Xa\ ]ua_  
dK7 ^  
2X +7bM  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 l?N`V2SuR  
m&{rBz0  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 |W/Hi^YE2  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% $o::PDQ?  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% .;}pU!S~R  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% l9,w> ]s  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% yl|R:/2 V  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% 4v i B=>  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% m.
/*LXU  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% |O 'Hh7  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% E,Dlaq  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% 7jD@Gp`" 3  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% 1gO//fdI  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% g8B&u u #  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% X@G[=Rs  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% -U&098}<K  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% I-j(e)P(o_  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% XWJ0=t&}  
vjY);aQ  
yRSy(/L^+  
   :a#|  
1/F<T  
*s 1D\/H  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 4"
rb&$E   
Sf# \6X<B  
/6?tgr  
mJU>f-l  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 n/,rn>k7:  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% R A-^!4tX  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% $L $j KNwf  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% iGpK\oH  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% `Nxo0Q  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% je$R\7B<  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% IX > j8z[  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% 2\kC_o97  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% woC FN1W  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% "1=.5:y
G  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% Iltg0`  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% 4@ydK  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% 3:z4M9f  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% xP|%rl4  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19%
&9GR2GY  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% >8.v.;`  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 r_
RTtS#  
[M>_(u6   
&}=,8Gt1G  
?y@pRe$2  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 Oip..f0  
q2i~<;Z)9  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 bZfJG^3  
l6Bd<tSH  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 8}@a?QS(&  
 ?C\9
lLX  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 XL9lB#v^  

2@rc&Tx  
V@f#/"u'  
~;Kl/Z  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 NebZGD2K  
FM];+d0  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， xoaQ5u  
+R$KEGu~0Y  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 =v9;HPiO  
YgDasKFm'  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 +[+Jd)Z  
U"Oq8
5vY  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 p {3|W<  
d0az#Yg!  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 HR  
MvFXVCT#  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 e#^by(1@}  
K .~U% v}  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 8Qh/=Ir  

L=HL1Qe$G]  
Q&M(wnl5  
@&EE/j^  
Ej.D!@   
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： unD8h=Z2  
P?]q*KViM  
@Cqg2  
gfr``z=>O  
1、样品提取方法： g`J? 2 _]  
wQ[2yq  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 xn}'!S2-b  
8^< -;  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 o5Qlp5`:u  
wu 3uu1J  
\19XDqf8  
dHOz;4_  
2、固相萃取方法： hj4A&`2  
Pv0OoN*eJ{  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： D 3Int0n  
NPS=?5p>  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； 4] DmgOru%  
oMMU5sm  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； Po^2+s(fY  
OpH9sBnA  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； -@J;FjrXmP  
7Uj[0Awn  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 }3?M0:  
'`3-X];p  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 *><] [|Y@H  
f-{ [ushj  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 ;'<K}h
 
@
cjhri|vH  
%@BQv4oJ  
L;z-,U$;%R  
补充说明： >ueJ+sgH  
!HB,{+25  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 @Sv  ?Ar  
1C|j<w=i  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。  Z-vzq;  
[J*)r8ys  
&Owt:R)9~  
lI5{]?'  
n"MFC  
gVI*`$  
Gu%`__  
Az. Y-O<$\  
<"\K|2Sg  
f|q6<n_nM  
lv\2vRYw-  
x/4lD}Pw]  

Mv9s  
Cu`ZgKLQ  
t^7R6y  
@RnGK 5  
pw$I~3OFd  
^QnVYTM  
>"Hj=?  
4$|G$h  
JEP"2MN,  
,Tr12#D:  
f9&D1Gh+w  
=T\pq8  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS t /47lYN)  
$GPA6  
色谱条件： oZ8SEC"]  
 qQom=x  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm #h&?wE>  
=-:o?&64  
进样口：250℃，不分流进样 aI\VqOt]  
Z os~1N]3  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） "7aFVf  
,{oANqP  
进样量：1μL |_ @ia
LE  
kPxEGuL'  
流速：1 mL/min LD6fi  
My[L3KTTp  
% ,X(GwX  
xp39TiXJ*  
质谱条件： NKMB,b  
J L Z  
接口温度：280℃ # I<G:)  
/|\`NARI  
电离方式：EI i'57 |;?  
6F<L 4*4U  
电离能量：70eV &{ f5F7E@  
z* `81  
溶剂延迟：7min rLVAI#ci=  
\twlHj4  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 x7/2e{p uu  
EU\1EBT^  
:2?'mKa7  
+FJ o!~1  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

xqG` _S l  
xWlB!r<}Gz  
~\Ynih  
kTnvD|3_!P