[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： UhF+},gU  
sRf?JyB  
a2`|6M;  
VT`C<'   
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） J+20]jI  
Z{J{6 j  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 *1clPK  
'-5Q>d~&h  
流  速：1.0 mL/min TbPTgE *  
BK16~Wl  
波  长：242 nm yw9)^JU8"  
<; (pol|  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） Y &"rf   
 "0( _  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 Z}Ld!Byz  
L]C|&KP  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） L)`SNN\ipR  
'*6S0zt  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A 7"c^$fj  
bm+ #OI  
柱  温：30℃ 2#y!(D8  
Av#_cL  
4._U  
mjwh40x.o  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） wInJ!1  
nF8|*}w  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 Sas&P:#r  
EPE9 HvN  
附件二 8N8N)#A[  
ac-R q.GQY  
m3cO{ 1I  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS nMniHB'  
u;[*Z  
色谱条件： @213KmB.  
A
11w{`EM  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm C;u8qVI  
tAPr4n!  
进样口：250℃，不分流进样 (Hr_gkGtM  
S690Y]:h$v  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） n^svRM]eQ  
B{#
*PAK=  
进样量：1μL Po%+:0oX  
B1EI'<S  
流速：1 mL/min y+ZRh?2  
AgOw{bJ%  
质谱条件： .>5KwEK~  
 H %Cb  
接口温度：280℃ GI&XL'K&  
9WXJz;  
电离方式：EI 8Z=d+}Gg<  
Jj<UtD+  
电离能量：70eV uR|?5DK  
24ojjxz+  
溶剂延迟：7min '6^20rj  
n:hHm ,  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 2v ^bd^]u:  
MYQZqlV  

;Z\1PwT   序号 )7U^&I,	9H@I<`qGC   保留时间/min ^;";fr Vw	R,mOV8y"W[   中文名称 uSZCJ#'G	.\r=1HZ3   英文缩写 en"]u,!	2TH13k$   SIM离子 v'R{lXE
3AKT>Wy =   1 |Z]KF>S]	4& r5M   8.265 l@;UwnI	8Ld`$_E   邻苯二甲酸二甲酯 UL9 ]LEGG	V=$pXpro%   DMP AcZ{B<	(`W_ -PI   163、77 NCW<~
 Dno]N   2 *~h@KQm7	a&^HvXO(>(   9.135 Z\YCjs%	CF,-l B   邻苯二甲酸二乙酯 :VkuK@Th`	Ci-CY/]s   DEP 009[`Z	~=P#7l\o1   149、177 ;s$,}O.
1 $m[#3   3 K^5f	MaS-*;BY,   10.888 al{}_ 1XoU	Op_(10|   邻苯二甲酸二异丁酯 9 d f GV!Z	4[lym,8C   DIBP Mp3nR5@d$	|W\U9n   149、223 0K(&EpVE
WkMB   4 z7s}-w,	IMSLHwZ   11.637 FL[,?RU?2	]1s6=   邻苯二甲酸二丁酯 x"P@[T	 8^puC   DBP gLwrYG7@	O$7r)B6Cs   149、223 moCR64n
1Q7]1fRu   5 ojx2[a\	H`4KhdqR   11.979 jt0f*eYE8	Jo\karp b   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 P1&Irwb`	6$t +Q~2G!   DMEP A p> H-/C	l4YTR4D   59、149、193 ;pqS|ayl
2LS91   6 4$+/7I \	g6@^n$Y   12.72 %? J-0	G@U}4'V9   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 s6!! ty;Y	Zbf~E {   BMPP :/6u*HwZh	a[J_ H$6H!   149、251 @eP (j@(^
D 1(9/;9   7 vkLyGb7r<	*rC%nmJwk!   13.044 W,.Exh	V5+|H1=   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 ?$=Ml$	/brHB @$   DEEP |^O3~!JP(>	:V#B]:Z9   45、72 ;eMb$px
2 K2_ -   8 )Hqn	($[@'?Z1   13.41 FeJKXYbk<	<'O|7. ^^   邻苯二甲酸二戊酯 }QJ6"s	uD:tT ~   DPP q `@8	O2Tna<cR&   149、237 cnM`ywKW
8&v%>wxR@   9 ^j7]> I	n#)kvr   15.552 EV N:3	<*DP G\6Ma   邻苯二甲酸二己酯 f_ UwIP	p}h9>R   DHXP KgEfhO$W	4z!(!J)   104、149、76 n;*W#c
%ysfFE   10 `rI[ 	W&Kjh|[1QZ   15.694 !7aJfs2	"SN+ ^`   邻苯二甲酸丁基苄基酯 'Mm=<Bh	P};GcV-   BBP -K%~2M<	dX5|A_Ex   149、91 txXt<]N
f/RDo4   11 I6Mr[#*	D!CuE7}   17.153 52d8EG C	[p[C45d=<   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 iHL`r1I!	qmM%MPv   DBEP hCKx%&[^7	"ZLujpZcG   149、223 K?:wX(JYT
j}$Up7pW   12 lYM Nx|PF	=YRN"   17.81 _cW6H B^j	p>@S61 & [   邻苯二甲酸二环己酯 5Si\hk:o	f YuM`O   DCHP '#b7Z?83C	GqrOj++>   149、167 qJ|n73yn
]U,K]y[Bj   13 7Z;w<b~	I'[hvp   18.056 ;^,2 QsM	P9p{j1*;   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 ikGH:{	UEq;}4Bo   DEHP :`Kr|3bQ	p0.?R   149、167 afEp4(X~
RZfC?   14 V=|^r?	LoG@(g&)   20.444 (nrrzOax	b E>3D#V<   邻苯二甲酸二正辛酯 nRQIrUNq	#|XEBOmsQ   DNOP @`.u"@	73~Mq7~8   149、279 w#mnGD
>KY\Bx   15 ap%o\&T;	Mty]LMK   22.98 el|t6ZT*	1yB;"q&Xd   邻苯二甲酸二壬酯 r3j8[&B"	_TPo=}Z   DNP :s'%IGy>:	c&Zm>Qo[   57、149、71 I(<G;ft<}

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 tyn?o  
;"d,~nLn  
附件三 LY\d
dI*s  
Q*09E  
5eiZs  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 #L@} .Giz  
?Kx6Sf<i  
ot|N;=ZKo  
86;+r'3p.  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 kP!%|&w;  
%+AS0 Jh
B  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 w8AJ#9W   
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% |_l<JQvf`E  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% |Hx%f  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% Y5
nz?a  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% lTa1pp Zw  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% ry$tK "v/  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% l%^h2 o  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% NzjMk4t  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% xCR; K]!  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% ^H'hD  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% Ya~ "R#Uy  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% zx ct(  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% pgCd  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% #]?tY}~  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% BqQ] x'AF  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% Ynvj;
  
OWqrD@  
IDj_l+?c  
   ,g%o  
 wjL |Z8  
mU>&ql?e  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 Ky * DfQA  
5qC:yI  
uWh|C9Y!A  
_$8{;1$T?  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 6p#g0t  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% kymn)Ea  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% {8 N=WZ  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% 9^au$KoU  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% Xk?R mU6  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% 2 Kl a8  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% ;gUXvx~~r  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% =e
{.yggE  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% tFiR!f)  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% ;%Q&hwj  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% oNIFx5*Z  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% @\jQoaLT$_  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% Xm|ib%no  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% 2m"_
z  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% #9:2s$O[x  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% 41yOXy ;~l  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 _^!vCa7f  
y;`eDS'0.N  
7XAvd-  
RIy\u>  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 V0i9DK|!  
2<W&\D o@  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 $[CA&Y.  
U6j/BJT"  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 HYClm|   
Go8F5a@j  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 zB)%lb  
__\P`S_  
P[i
\e7mR  
fPQ|e"?  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 WYO\'W
 
mK\a I  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， xqWj|jA  
'lQ
YJ0  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 wRbw
  
otnV-7)@  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 K%2I
  
z93nYY$`Y  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 G"Pj6QUva  
/Sj_y*x1e  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 )52#:27F  
_LsYMUe  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 .
f%vDB JS  
!7Uu]m69n  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 `&,
_xUA  

>eu `!8  
]'E}   
|9 x%gUm  
?U$}Rsk{#  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： B0S8vU  
nxD'r  
FSFFk~  
AmgWj/>  
1、样品提取方法： t2Ip\>;9f  
_F3KFQ4,S-  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。  7N!tp,?  
`Fz\wPd  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 4 0p3Rv  
wwo(n$!\  
+SAk:3.#CV  
bELIRM9  
2、固相萃取方法： y;zt_O/  
}Q47_]5  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： A4~D#V  
T@%;0Ro~  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； BM|-GErE  
JZs|~@  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； Qw3a"k-  
} l:mN  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； p2pTs&}S  
4]Un=?)I  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 EpFI
KV!  
&Iv\jhq  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 hN>('S-cq  
_9}x
2uO~  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 hW0,5>[7%  
qB+:#Yrx/  
hO+O0=$}wN  
,wry u|7"$  
补充说明： 6nY )D6$JG  
aIzp\$NWVK  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 /ygUd8@  
)|{1&F1  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 %U=S6<lbj;  
3zA8pI w  
j &0fC!k  
= h<? /Krs  
2d>d(^  
\ ]kb&Qw  
#g-* n@ 1  
(4{@oM#H6  
E-tNB{r@  
Gwrx)Mq  
gGiV1jN_  
xV n]m9i  
[y=$2  
Ti@P4:q  

)ejXeg  
i:Z.;z$1  
9J;H.:WH  
Kt* za  
9 K /  
'xrbg]b%  
u,SX`6%  
(B/F6 X;o.  
Mn\B\  
e/% ;  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS &qI5*aQ8T  
c%3 @J+z  
色谱条件： >93{=+  
&fy8,}  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm =$zr t  
 p|8Fl  
进样口：250℃，不分流进样 HY|SLk/E  
[^=8k2  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） :Du{8rV  
qq%_ksQ  
进样量：1μL 1;[ <||K  
g\nL n#  
流速：1 mL/min D.x
3@+  
2xBGs9_Y  
iZ;jn8  
HY#("=9< h  
质谱条件： iv`-)UsE  
RaqrVC  
接口温度：280℃ kQcQi}e  
7cSvAX0Z.  
电离方式：EI :9>nY  
#jR?C9&!(  
电离能量：70eV ?q7Gs)B=^'  
8 F 1ga15  
溶剂延迟：7min <7h'MNf&  
AS398L  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 +d.Bf  
=!2  
jk?(W2c#{  
*0tNun 5=3  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

nfEk,(:  
mE1*F'0a  
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