[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

HOBP`lf  
x|{IwA9  
z,|{fKtY}  
*s;|T? ~i  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： ;}'D16`j  
M5x U9 ]B  
=V^.}WtO  
y7
^{yS[,  
1、样品提取方法： 5#QXR+ T   
i9=&;_z  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 *x)8fAr  
z ;u  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 rhL"i^  
!u]1dxa  
4l&g6YneX  
6&bIXy  
2、固相萃取方法： a5G/[[cwTV  
e${>#>  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： \(">K  
*9p |HX=  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； ^'jEnN(  
2r%lA\,h$  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； ?EX"k+G  
pZyQY+O  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 'q * Bdx  
CDi<<,  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 [Ei1~n)o  
gDIBnH  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 nv<` K9d  
MuBx#M/  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 PIXL6  
#Dfo#
]k(  
V\K<$?oUb  
#%@MGrsK  
补充说明： h8jD}9^  
YD
mWN#  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。  uIMe  
djT5X  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 N]5m(@h  
H^1gy=kdj  
VF0dE  
5|$a =UIR  
e,A)U 5X  
K'6[J"dB  
JhR W[~  
+_HdX w#  
dYOF2si~%  
F}ukZ DB  
g{pQ4jKF  
9]_GNk-D  
DOL%'k?B  
!jh%}JJ  
]O!s'lC  
u2qV6/  
E5x]zX y4  
lpEDPvD_Vm  
=l|>.\-  
52<~K  
H%.zXQ4}n  
vw rRZ"2  
Iu6W=A  
4_< nQ9K  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS Qk7J[4  
s-5wbi.C  
色谱条件： }*-u$=2  
BA`:miH<  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm p)z-W(  
)[ w&C_>]  
进样口：250℃，不分流进样 n>T:
2PQ3  
8vO;IK]9b^  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） :B+Rg cqi  
QD}1?)}  
进样量：1μL - &NQ \W  
fo;6huz  
流速：1 mL/min "]w!`^'_  
v*vn<nPAQ>  
=9fEv,Jk  
=g >.X9lr  
质谱条件：
KjBOjD'I  
_HLC>pH~#  
接口温度：280℃ )) p$v
U3  
0hFH^2%UY  
电离方式：EI 'YBi5_  
% Oz$_Xe  
电离能量：70eV m"<4\;GK  
r}ZLf  
溶剂延迟：7min B*y;>q "{U  
d[)_sa  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 D*CIE\ +  
UHr{  
GXarUjs  
xR*5q1j  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

B1x'5S;Bq  
ny278tr Q7  
'wCS6_K  
u86J.K1Q  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 #"|Ey6 &  
MD,-<X)Qy  
MB)xL-jO  
?$?Ni)Z  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 t9kgACo/M  
1DX=\BWp  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 fu`oDi  
gP}M\3-O  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 uW]n3)7<I  
ykZ)`E]P`  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 O_E[FE:+  
X0m\   
&ha39&I  
k]v a  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 O:1YG$uKa  
,uj oGSx}  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， .7oz  
(|S e+Y#e,  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 gzeG5p  
p 5P<3(  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 lrK5q  
8USF;k  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 {eS!cZJ  
<wa}A!fu  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 q_JES4ofx  
D.X%wJ8  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 AS~O*(po  
ob-y {x,R  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 Busxg?=  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。  /C   
<^d a-b>C  
附件三 hl$X.O  
4Kh0evZ  
v2jpao<K  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 Xv <K>i>k  
.]YTS
 
xi[\2g+  
*f o>  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 #QNa| f#=  
s63!]LDr  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 hgK 4;R  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% ]d~2WX Y  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% nJ}@9v F/  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97%
>hY.F/[  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% :$*@S=8O  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% hp`ZmLq/[  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% @b!W8c6  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% 03c8VKp'p  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% 6Yl+IP];i  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% GVhy }0|  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% m%=*3gH]&  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% ^HxIy;EQ<z  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% jweX"G54R  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% ia(`3r  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% SgYMPBh  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% Ch\__t*v!  
Cv}^]_`Q  
j8nkNE]&  
   3%hq<  
*yaS^k\  
DY 9]$h*y  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 \+l*ZNYM3  
tq}45{FH3  
h693TS_N  
W*t] d  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 l6y}>]  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% #3QPcoxa  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% V`1,s~"q  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% )63 $,y-;$  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% \3$!)z  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% W &IG,7tr  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% @"-\e|[N  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% N2v/<  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% n^Ca?|} ,  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% LE\=Y;%  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56%  mb1mlsE  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% "lI-/G  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% jYHnJ}<  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% /MGapmqV9  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% _MBhwNBxZ  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% MJ|tfQwhx  

附件一： z%Op_Ddp  
9qc1^F
s~  
K8$Hg:Ky-/  
3/H^YM @  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） R4"["T+L`  
dJ"3F(X  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 L[)+J2_<  
T {a%:=`  
流  速：1.0 mL/min KW+ps16~  
wb2N$Ew=  
波  长：242 nm 6cp x1y]~6  
&ME[H  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） i >Hh_q;'  
)/PvaL  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 Z7"8dlb  
T9jp*  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） S;M'qw
N  
9Gfm?.O5  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A
l %=yT6  
RQWVjF#  
柱  温：30℃ Nt,)5_K <  
\)eHf 7H  
%/>\`d?  
#B8`qFpQC  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） xr&wV0O'  
>"jV8%!sM  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 D%(9ot{!e  
>hoIJZP,  
附件二 }oYR.UH  
ehtiu!Vk  
kMKI=>s+  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS B, xrZs  
4U<'3~RN  
色谱条件： |}^[f]  
EhEn|%S
 
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm -Hh$3Uv  
eM/|"^%  
进样口：250℃，不分流进样 BT 98WR"\  
.Y_RI&B!L  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） qzE/n  
S#jH2fRo  
进样量：1μL P{(m:`N  
=zVbZ7  
流速：1 mL/min LN?T$H  
)#ic"UtR  
质谱条件： "uGJ\  
VQPq+78  
接口温度：280℃ F!pUf F,&  
}xLwv=Ia  
电离方式：EI =:~~RqHl  
`*}#Bks!  
电离能量：70eV r}f-.Fo  
jq.@<<j|$  
溶剂延迟：7min LYWQqxB  
,Oxdqxu7  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 lJ7k4ua\  
ReSP)%oW  

!vImmhI!I   序号 *:YW@Gbm	CuuHRvU8   保留时间/min l l&iMj]	UK_2i(I"e   中文名称 i~K~Czmok+	)Xg#x:   英文缩写 +d#ZSNu/	`0.5aa   SIM离子 c&'T By
V2.MZ9   1 s \kkD*	,Zs-<e"   8.265 IClnh1=	#]:nQ(   邻苯二甲酸二甲酯 53l9s<bOQ	N^`F_R1Z   DMP [QL)6Xr	se(_`a/4Q   163、77 ^ *R rx
lm@ <i4%$F   2 >Wy@J]Y#	)e{~x u   9.135 \.Q"fd?a_D	WFLT[ j!1   邻苯二甲酸二乙酯 6C)  G	_RjM .   DEP 0y|}}92:	m"@M~~bh   149、177 hC5ivJ
_.wLQL~y   3 '{U56^b]	b^^Cj(   10.888 0(- 'L\<>x	lHz:Iibt   邻苯二甲酸二异丁酯 S1%{/w	wxr93$v   DIBP D OP Ozh	A CJmy2   149、223 H>-,1/IY
M_$pqVm   4 B,|M	-5kq9Dy\,   11.637 fC]+C(*d	^=E 4~ 22q   邻苯二甲酸二丁酯   U7tT	DU]MMR   DBP H&3VPag	UQ`%,D   149、223 ?ti7iBz?
)'DFDrY   5 #x)G2T'?	]A9Vh   11.979 NTs< ;ED	*z` {$hc   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 nHNMoA	b;9v.MZ4>g   DMEP kH-1l>":	<*2.B~   59、149、193 r_FW)Fu^
s:jr/ j!   6 ,;GWn	tG^Oj:   12.72 lOI(+74	1a/@eqF''   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 Ju)2J?Xs5	7 82NiVed   BMPP ^0~?3t5	z/6kxV89   149、251 <y-KWWE
Ct$e`H!;   7 FyZw='D	[M Z'i/   13.044 kX+y2v(2++	]*ZL>fuD|   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 i7mT<w>?	7evE;KL   DEEP Ia0.I " ,	FL/@e$AK   45、72 &>*f J
~Pv4X2MO   8 u"?cmg<.1	|L%F`K>Z:   13.41 q,PB;TT	V[HHP_   邻苯二甲酸二戊酯 2%rAf8=	Me`jh8(K\6   DPP ,CA,7Mu:	p*-o33Ve   149、237 05TZ
ZgcA[P   9 CTD{!I(	H d U1gV>   15.552 F7E#x	gLaFIeF<+   邻苯二甲酸二己酯 eRWTuIV6	5sao+dZ"|   DHXP l`:M/z6"	:D-My28'   104、149、76 q~^Jd=cB\
f]tc$`vb   10 L~%@pf>	[8EzyB>fH   15.694 +!\$SOaR{	Bd*:y qi   邻苯二甲酸丁基苄基酯 R*3x{DNL	LE%3.. !   BBP \R #]}g0!	{s&6C-   149、91 _]E H~;
tu8n1 W   11 \yP\@ cpY{	Q^}6 GS$   17.153 #\U;,r	is@8x!c   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 8L]em&871	X&R ,-^   DBEP g*t(%;_m	(ns>z7   149、223 M{\W$xPL)
IjJO;   12 : 2^j/	]3UEju8$   17.81 W l!|+-	8)n799<.   邻苯二甲酸二环己酯 zg)-RCG	G .PzpBA   DCHP dS9L(&	%=C49(/K_   149、167 ~cHpA;x9<^
E RnuM   13 WKjE^u	6Ja} N   18.056 #ZFedK0vv	99xs5!4s   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 fV}:eEo|Y	rU g<(/c   DEHP nu 'r`	-> $]`h"   149、167 O/Q7{ 5n
{=Z xF   14 yJyovfJz.	NVt612/'7y   20.444 3e)W_P*0?	E:_m6 m   邻苯二甲酸二正辛酯 }jfOs(Q]	*h <_gn   DNOP E4CyW	vO?\u`vY   149、279 e$vvmbK.
k}0Y&cT!rU   15 8LPvb#9=	Y <ZaW {%   22.98 B$\,l.hE	_aaQ1A`p   邻苯二甲酸二壬酯 u)hr	KAFx^JLo   DNP j,Vir"-)	4nz$Ja)   57、149、71 m"|AD/2;(