[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： xlaBOKa%  
-xf=dzm)  
t1 .6+  
aKC3T-  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） 1]v.Qu<  
!g~xn2m$R  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 d+fig{<b  
S-:l 60.  
流  速：1.0 mL/min cQUmcK/,  
nK6{_Y>  
波  长：242 nm l23 #"gGb  
?+b )=Z  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） ueYZM<],  
&}%3yrU  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 ~FM5]<X)  
Ah28D!Gor  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） .QzHHW4&0  
W)?B{\  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A SV}I+O_w  
x(&o=Pu  
柱  温：30℃ -Yy,L%E]F:  
Q\Fgc ;.U  
_JiB=<Fkr  
)}1J.>5  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） 5vxJ|Hse@  
gh|TlvnA  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 +dcB h Dq  
Ro`9Ibqr  
附件二 ;tP-#Xf  
;"$Wfy  
9aFu51  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS -/Pg[Lx7Pb  
V}o`9R@tx}  
色谱条件： =VF
i}C/  
vg[A/$gLM  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm m r"b/oM{  
r==d^  
进样口：250℃，不分流进样 ICAp  
"159Q  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） (7Su{ tq  
1T&NU  
进样量：1μL IAy
yRl\  
?='2@@8;  
流速：1 mL/min ]R%[cr  
gOiZ8K!  
质谱条件： 3yGo{uW  
7R5m|h`M  
接口温度：280℃ UHyGW$B  
p :{,~ 1  
电离方式：EI GJs{t1 E  
&/m0N\n?  
电离能量：70eV %Ev)Hk  
@\U;?N~k  
溶剂延迟：7min *""iX
i[  
<)  cJz  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表
n +v(t  
B#]:1:Qn  

l&|Tb8_'   序号 3mQ3mV:	wZ5k|5KtW   保留时间/min 4`Cgz#v {	v4]#Nc$~T   中文名称 Xz?7x0)Z	(zPsA   英文缩写 Z,-J tl	tl 9`   SIM离子 F0wW3+G
Xyu0np;@   1 wHZ(=z/q	BM9:|}\J65   8.265 ac,<+y7A	,g1~4,hqQ   邻苯二甲酸二甲酯 t]{, 7.S	[B^V{nUBc   DMP ~(L&*/c	P V9q=   163、77 %C)|fDwN
BA9;=orx   2 BPy pA$	.4!wp&   9.135 C?rb}(m	Ut(BQM>U+$   邻苯二甲酸二乙酯 bR=TGL&	n* z;%'0   DEP ks8xxY	qjRp 5   149、177 SU4~x0
l 4cTN @E   3 !?m8UE	U&6f:IV   10.888 E"%G@,|3*	-GL-&^3IjH   邻苯二甲酸二异丁酯 [M:BJ%*	o n?8l?iQ   DIBP iLkP@OYgQ	2<+9lk   149、223 i9y&<^<W
qn@:A2ed   4 V s1Z$HS`	hlTM<E   11.637 qQUCK	DU-&bm   邻苯二甲酸二丁酯 B@2VI 1%	-.X-02   DBP `V[{,!l;X	^p433   149、223 !w8t`Z['
[Grd?mc#   5 <n)J~B^	 +M"Fv9   11.979 Nm. H	7<<-\7`   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 HH-A\#6J	u?(@hUV.   DMEP Wchu-]	7#~v<M6   59、149、193 B3+9G,or
Jy#c 6   6 .3X5 ~OH	"QKCZ8_C   12.72 {Jna' eS	w)rd--9f   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 CN{xh=2qY[	{;L,|(o^   BMPP /fSsh;F	UhKd o   149、251 l u?:1V-
!,^y!+,Qy   7 Hz"FGwd	Q;s{M{u   13.044 8Vjv #pm	dC;&X g`   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 ~ MsHV%	0y t36Du   DEEP 8AuE:=?,,	+$#<gp"   45、72  C7G,M
pW@W-k:u   8 Xp9I3n d|	_tX=xAO9   13.41 8Th,C{	xSd&xwP   邻苯二甲酸二戊酯 c't QA	WYTqQqQk   DPP GW;%~qH[,	EZ .3Z`   149、237 |A'I!Jm
R\3a Sx L   9 xz"60xxY	0wv#AT   15.552 #%p44% W	W%g*sc*+   邻苯二甲酸二己酯 C:J;'[,S	@N >7+ 4   DHXP ~ wb1sn3	;l@94 )@0   104、149、76 Xul`>8y|
uAO!fE}CJ   10 B]rdgjz*	KYFKH+d>m   15.694 ?J rUZXY	` ~GXK   邻苯二甲酸丁基苄基酯 V6g* "e/8	#VQZ"7nI@   BBP ^ D0"m>3r	Kw fd S(   149、91 \'O/3Y7?X
Au2^ T1F   11 W6?=9].gc	TQ\#Z~CbK{   17.153 J{/hc} $	-#%M,Qb   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 PE{<'K\g	cRI2$|   DBEP .LAB8bg	NvzPZ9=@-   149、223 !0pK8k&MG
U vMkL   12 L~/L<Ms	(z;lNl(*C   17.81 |) cJ	Y>C05?>   邻苯二甲酸二环己酯 i@D4bd9lR	I *N v|HST   DCHP _U LzA	*pD|N   149、167 ~uq010lMno
du~V=%9   13 ZI1]B944ni	n6t@ e^   18.056 yZ[g2*1L	=&pLlG    邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯  ~AYleM	Y2 J-`o$5   DEHP |]@Pq[Hn|	Pb8@owG8   149、167 f! #!
0(eaVi-%D   14 8\lh'8	ZKrLp8l\   20.444 s;Gd`-S >d	<:}nd:l1   邻苯二甲酸二正辛酯 3T2]V? 	cKt=?   DNOP @Vre)OrN#	0[MYQl`   149、279 XQ#K1Z
4& }%GH>}   15 jn<?,UABD	azPH~'E'   22.98 R#T-o,m	7(Fas(j3   邻苯二甲酸二壬酯 /K:r4Kw	%U\,IO`g   DNP Qi18q|l8v	L!}!k N:?   57、149、71 m$vq%[/#

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 nv/'C=+L  
?]PE!7H  
附件三 YML]pNB  
M)1Y7?r]  
M`)/^S9   
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 O+OU cMa,  
#f<3[BLx  
;2P  
-}_1f[b  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 Cxeam"-HTt  
y @S_CB47  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 WdH/^QvTP  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% c]zFZJ6M  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% z:4_f:70  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% 2;u i'B  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% mf)+ 5On  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% ( *Xn"o  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% B+snHabS6  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% C!*.jvhT  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% Cq"KKuf  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% sfj+-se(K.  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% eZLEdTScM  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% &)%+DUV|  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% :oP LluW*  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% <+i(CGw  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% {r,Uik-nL  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10%
`Y#At3{  
:v&[!  
CLR1CGnn7  
   e w^(3&  

AjC:E+g  
z;c>Q\Q  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 (m~>W"x/  
)`u17 {  
jUe@xis<T  
_jWs(OmJ  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 aukcO;oG<  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% 6g(;2gY  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% 'Wlbh:=$  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% X5
 vMY  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% uEPp%&D.+  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% ,=/9Ld2w 9  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% D8A+`W?  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% \!ZA#7  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% D#GuF~-F!R  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% :zW? O#aL-  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% z,Xj$wl  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% 0fc;H}B*  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94%
jV% VN  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% " ILF!z  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 1_7p`Gxt[/  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% xst-zfkH`  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 Ks.b).fH  
j<^!"_G]*?  
k(ouE|B  
iYXD }l;r  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 %1#\LRA(  
+5y^c|L0  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 4%0s p  
v H
HgZ  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 W2{w<<\$3}  
eT%x( P
 
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 Dw i-iA_q  
uEgR>X>  
c]pz &  
:hICe+2ca  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 ?0~g1"Y-*K  
+s#%\:Y M  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， `n>/MY  
4&E"{d >  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。  ]]p\1G  
+  }"+  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 .]>Tj^1  
.qE  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 -gGw_w?)(  
"nr?WcA  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 e\~nqKCb  
~Jf(M^E  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 v,n 8$,  
@Yt394gA%\  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。
O+&;,R:  

r_f?H@v  
1>1&NQ#}  
%o4ZD7@ '  
0w
CJNXm  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： IdsPB)k_  
dC$z q~q  
Z6eM~$Y  
diF-`~  
1、样品提取方法： C:+-T+m[  
#)&k F+  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 ^Oy97Y  
cn62:p]5  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 f;AQw_{  
kjVUG >e>  
37OU  
>|{n";n&  
2、固相萃取方法： [D
r'  
05o)Q &`  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： =35g:fL  
b 6kDkE  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； }W2FF
  
<{ZDD]UGs0  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； .r ,wc*SF  
bVLBqa=  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； `!,"">5  
$6[%N Qp  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 V ,+&.A23  
wH?]kV8Q  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 uSsP'qd  
|*fi!nvk@  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 ,+P2B%2c  
Wq2Bo*[*  
}j)][{i*x  
49o/S2b4z  
补充说明： sC'PtFK8z  
f8?hEa:js  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 IKrojK8-?  
w-"tA `F4  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 rDWwu'  
/[qLf:rGI  
YJ!jdE}  
Xf; _r+;  
k?}y@$[)  
Doe:m#aNj  
+V9(4la  
q8)wAl  
 w!b;.l  
?^ R"a##  
~Zw37C9J  
Ri3*au/
Q  
xS;tmc  
[M#(su0fv  

Q]]M;(  
CropHB/t  
Of -8n-  
Lie= DD  
paUJq?Af  
U^Iq]L   
bV:MOj^  
[4-u{Tu  
0IQ|`C.  
%htbEKWR  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS }7i}dyQv}  
RPkOtRKL=w  
色谱条件： ^mZTki4  
RohD.`D  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ,-.=]r/s  
[jF\"#A  
进样口：250℃，不分流进样 %/wfYRp*  
(z'!'?v;  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） W97 &[([
 
(ZEDDV2  
进样量：1μL G$  Ii  
?T:$:IHw  
流速：1 mL/min d*<goBd  
(?zZvW8  

s)|l-I  
4kQL\Ld#E%  
质谱条件： :n<<hR0d  
cc$+"7/J^c  
接口温度：280℃ z|>f*Z  
!U!}*clYL  
电离方式：EI Y+I`XeY  
v><uHjP  
电离能量：70eV :V#W y  
%L$P']%t@  
溶剂延迟：7min 3_tO  
xl
$#00|y  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 L_YVe(dT  
V/G'{ q  
oA&V,r  
bG0t7~!{E  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

3~4e\xL  
J.
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