[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： i c{I  
J jAxNviG  
>.wZEQ6QK  
R}oN8
 
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） <K)]kf  
QSaDa@O V  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 5*z>ez2YQ7  
;
0eVE  
流  速：1.0 mL/min hWly8B[I  
SGKAx<U  
波  长：242 nm NVzo)C8kb  
[P}Bq6;p  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） 7nPg2K&  
mc]+j,d  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 (H:c80/V  
=Ji[ ;wy@  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） XU7to]'K  
#GGa,@O  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A +VVn@=&?  
)i /w:g>  
柱  温：30℃ pbKmFweq  
38sLyo G=i  
1{/Cr K/o  
t a95]|z"j  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） 
a)lCp  
7Td 9mkO  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 j![1  
Ek V#i  
附件二 p+Q9?9  
`i|!wD,=\  
) YB'W_  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 0B[~j7EGO  
1 jLQij  
色谱条件： {li Q&AZ  
, 2
U  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm Mi NEf  
)" Z|x  
进样口：250℃，不分流进样 ;TC]<N.YJT  
F<iV;+  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 8LF=l1=~  
*
'?V>q,  
进样量：1μL "PS ) "t  
3A0Qjj=  
流速：1 mL/min 7k%!D"6_R  
 6shN%  
质谱条件： yW*,Llb5  
 jrS$!cEo  
接口温度：280℃ gw">xt5  
?MfwRWY  
电离方式：EI MOytxl:R  
U|QP]6v  
电离能量：70eV wi%ls8
F  
1fM`n5?"  
溶剂延迟：7min 6#qt%t%?D  
7 _"G@h  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 6f t6;*,  
e7-IqQA{3C  

(F3R!n   序号 Nq6; z) $	)J+A2>   保留时间/min O'@[f{	-eD]gm   中文名称 ox\D04:M	Z( "-7_   英文缩写 QoxQ "r9Wh	j e3Qq1   SIM离子 \D]9:BNJ
P*U^,Jh <   1 j ffNA^e	l]Ym)QP   8.265 1A#/70Mo	6R$Yh0%   邻苯二甲酸二甲酯 8Z"f"	:V@)A/}uk   DMP V\]j^$	dV}]\8N   163、77 pjoyMHWK
kCoE;)y$   2 #T{)y	X%N!gy   9.135 Qnt9x, 1m_	_iEnS4$A8   邻苯二甲酸二乙酯 L%<]gJtrO	F#RNm5   DEP ~{-Ka>A	fR+{gazk n   149、177 B.;@i;7L
j72mm !   3 @'G PZpbvZ	.O(9\3q\   10.888 #Ufb	iQT0%WaHl   邻苯二甲酸二异丁酯 :RJo#ape	T<b*=i   DIBP =h +SZXe<r	{<gX~./]c   149、223 1OMaY5F
X&5N89   4 v<)&JlR	* a1q M?   11.637 Vm8dX?	HINk&)FC   邻苯二甲酸二丁酯 +~of#	Y}s6 __   DBP f#!nj]}#	G/fBeK$.   149、223 )p>p3b g
0+SZ -]   5 !TY0;is	AFvv+ ss   11.979 n@"<NK zh	i;]# @n|   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 upZc~k!1\	,D(Bg9C   DMEP OkISRj'!U	5[)# 3vY   59、149、193 Le bc@,
Z(R0IW   6 0o6o<ggi	{r|RH"|?Z(   12.72 3W#E$^G_v	S<'_{uz   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 ^*B@=	8==M{M/eM   BMPP w{*V8S3h9	*HGhm04F{   149、251 jJt4{c
fB,eeT1v?h   7 Ct~j/.	g&EK^q   13.044 *vIP\NL?H	t?Qbi)T=z   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 LayK&RwL	jrz.n4Y`   DEEP AL,7rYZG$	N81M9#,["~   45、72 Qy[S~D_
=_m3 ~=Z   8 g"kI1^[nj	S^p^) fAmF   13.41 M<NY`7$^	xfI0P0+   邻苯二甲酸二戊酯 ^E8qI8s	8-k`"QI=   DPP A?}[rM Z	9\WtcLx   149、237 [+R_3'aK
'xG J;pY   9 :3 Hz!iZM	Qox/abC h   15.552 & /T}	oe|;>0yf   邻苯二甲酸二己酯 Ay 4P_>^	0#8, (6   DHXP r nr-wUW@	!z4I-a   104、149、76 &I8DK).M+
l1]{r2g   10 S,Q^M )$	X@tA+    15.694 Ij.mLO]	MnF|'t   邻苯二甲酸丁基苄基酯 N}7b^0k	uuF~+=.|   BBP HDzeotD	,P`GIGvkA   149、91 h> [ qXz
mrG?5 .7W   11 ,%xat`d3,3	iWr #H   17.153 #`%S[)RT	B= E/|J</   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 %Y'/_ esH2	7zE1>.   DBEP )AdwA+-x	d`$w3Hy   149、223 zIS , N '
CA&VnO{r   12 l"X,[	&1yE rGXC   17.81 "ixea- 2	9X33{   邻苯二甲酸二环己酯 y>u|3:z	3?_%|;ga   DCHP |{ZdAr.;	r#w7qEtD   149、167 upeioC q
Z zR0k   13 J#3[,~	i=P}i8,^=   18.056 &l_}yf"v	[4dX[   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 ]EQ*!	ZIh)D[n   DEHP T;PLUjp}	7xG~4N<)]   149、167 Co=Bq{GY
^/x\HGrw   14 N:+d=G`x	H(M{hfa|   20.444 Ra H1aS(	 tL<.B   邻苯二甲酸二正辛酯 wg\p&avvb	K"X"2c1o   DNOP N0NFgW;	BIe:7cR%   149、279 apfr>L3
rcY &n^:   15 3Z&!zSK^	IvI..#EzG   22.98 v+SdjFAY	Q {BA`Q@V   邻苯二甲酸二壬酯 W}MN-0	BHZhdm@),   DNP PB8g4-?p6	|d*a~T0   57、149、71 ;DR5?N/a

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ]%A> swCpn  
JI.=y5I  
附件三 EU[eG^/0@  
e|{R2z"^  
lk 1\|Q I  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 1GK.:s6.f  
.3C::~:  
$!*>5".A  
FJZ'P;3  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 g{DehBM  
5\pS8<RJ;  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 j<~Wp$\i7>  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% OCrTzz8  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% 'UsR/h5T  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% <u\Hy0g  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% |,,#DSe  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% }eVDe(7_  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% i6V$mhL  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% "v:k5a(  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% bpBn3f`?*  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% 5Hu[*  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% 4N,[Gs<7  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% i[KXkjr  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% r7W.}n*  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% fSbLkd 9  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% o?}dHTk7  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% AVjRhe  
bj i#ID2]%  
75;RAKGi  
    ="]r{  
Y[L,rc/j  
?M'CTz}<\  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 2j420
2  
@VP/kut  
?M4ig_  
,2!7iX  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 i +@avoW  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% e;=R8i  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% !N+{X \+  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% +>1Yp">?  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% #vK99S2  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% 9*j"@Rm  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% H)TKk%`7  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% w@WtW8 p^  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% &:d`Pik6  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% @QJPcF"  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% D_F1<q  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% lnl>!z  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% s#8}&2#l  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% #( 4)ps.  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% "OP$n-*@%  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% h{]0 H'g  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 GZefeBi  
'6g;UOx^=  
84f(BE  
b=L4A,w~a  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 ,=a+;D]'  
at|.Q* &a#  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 iv!;gMco  
/4I9Elr  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 xe4`D>LUo  
/$\N_`bM  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 Hg~8Td**  
NwcRH9};i  
]>/oo
=E  
cd&sAK"  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 V.e30u5  
*L&|4|BF2  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， );/p[Fd2]  
}U^i
Vq*  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 J1R5_b  
%0zp`'3Y  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 M_O)w^ '  
G|I}x/X"Q7  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 o?d`o$  
><C9PS@  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 mLV0J '  
` Nv1sA#C  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 h05BZrE  
.IsOU  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 1*f/Y9 Z  

BtsdeLj|  
&w8
5[zs  
'c %S!$P  
<{Q'&T  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： $4m*kQ  
IRW^ok.'b!  
Fky?\ec  
)d`mvZBn1  
1、样品提取方法： !wE}(0BTx  

!%)]56(  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 -c*\o3)  
nw6pV%  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 R2<s 0l  
?-)I+EAnE  
}baR5v  
Yk!/o w@.  
2、固相萃取方法： }<a^</s  
+]Zva:$#`
 
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： R%Y`=
pK>}  
mHc>"^R  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； q?qC  
W,5Hx1z R  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； \_V-A f{6  
V"\0Y0  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 8BOZh6BV  
>@xrs
 
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 g- AHdYJ  
M>9-=$ 7  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 #} ~qqJ G2  
X[ q+619  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。  CYYkzcc^  
F<>!kK/c  
p&+;w  
];.pK  
补充说明： O"Ku1t!  
=mA: ctu~v  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 /}Jj
 
Ee`1F#c  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 mM`wITy  
foJdu+^  
^Z~;4il_F  
6iCr RjY*  
%Gt.m  
ZDbc  
[Q=dCX9%  
4;2< ^[M  
&hRv
ol\J  
OE}*2P/M>  
tK pmm`2  
8']9$#  
hZ.Z3`v70  
Yb E-6|cz  
,T2G~^0  
^k]XEW{PG  
ra o[VZ  
B'fb^n <  
C+T
I]{t  
bFW=ylF9  
;72T|e  
7k rUKYVo  
~m$Y$,uH  
9T1Z
L5  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS <"_d]?,  
`|/< \  
色谱条件： Y 1t\iU  
bdc&1I$  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm !Ze5)g%H  
k<"oiCE  
进样口：250℃，不分流进样 oIduxbAp  
1#ft#-g}
 
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） SF>c\eTtx  
W;,C_  
进样量：1μL RE/~#k@a  
|v$JCU3!A  
流速：1 mL/min %|^fi8!:|  
|\7 ET[Xq  
w.?:SD  
;N0~;I  
质谱条件： ;,?KI$K  
`1bv@yzq  
接口温度：280℃ *U P@9D  
W7 #9jo  
电离方式：EI !& z(:d  
Z
2'Bk2 L  
电离能量：70eV v5QqS8u_C  
%)0*&a 4  
溶剂延迟：7min mjKS{  
WZ*ws[dVI  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 fngOeLVG  
,I%g|'2  
,^eYlmT>6
 
y&?
6FY  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

7]||UuF<  
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