[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： 6Cz7A  
w8eG;  
!^c:'I>~  
-ET*M
<  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） r Iya\z1W  
&"U9X"8b  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 2ApDpH`fiJ  
?noETHz)  
流  速：1.0 mL/min &{-oA_@  
Y9 IJ  
波  长：242 nm mF6@Y[/B  
tnQR<
  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） O,F]\  
oso1uAOfp  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 Ns+)Y^(5  
VxUvvJ{-v  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） e.)yV'%L  
@{J!6YGh  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A kjLsk-  
>< <$  
柱  温：30℃ LG/=+[\{E  
aJuj7y-  
P.
[6s$J  
aH5t.x79b  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） h/0<:eZ*  
u%+6Mp[E  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 "VT{1(]t  
&.cGj@1!J  
附件二 %KJ"rvi4K  
\j2: 6]Hm  
j:rs+1bc  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS @!L@UP0
 
Pqr Ou  
色谱条件： U(S@1i(  
.-C+0L1j  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm 3oppV_^JdT  
z._C*c  
进样口：250℃，不分流进样 )RA v[U1  
KV^:sxU  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） +H)!uLvaB  
nU?Xc(Xy  
进样量：1μL %mB!|'K%  
_-|yCo  
流速：1 mL/min eu}:Wg2  
UijuJ(Tle  
质谱条件： 3IU$  
cjy0s+>>  
接口温度：280℃ Ru9pb~K  
<M=W)2D7  
电离方式：EI o3TBRn,  
Tg<>B  
电离能量：70eV xd bu|fC  
|$.sB|_ N  
溶剂延迟：7min J
X2 |  
8,H#t@+MT  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 $:-= >  
`3
>)BV<P  

*xZQG9`kt   序号 mISuo	(7Ca\H3$   保留时间/min @WDqP/4	!Lg}q!*%>V   中文名称 .2(@jx,[	}07<(,0n   英文缩写 i*cE	6q  xUT   SIM离子 C(%5,|6
"` ?Wu   1 c;t(j'k`	u7y7   8.265 B'BbTI,	k`4\.m"&   邻苯二甲酸二甲酯 `bt)'ERO%#	z_,]fd=o   DMP x_H7=\pX ]	KxTYc   163、77 @Ozf}}#
`bi_)i6Low   2 H R! >g	[Ey%uh 6*   9.135 $b 71	uF.\dY \xv   邻苯二甲酸二乙酯 VV}fW"_ND	I\4`90uBN   DEP :~A1Ud4c	6~Oj e>w;   149、177 ^[\53\R~
\g[f4xAV   3 R\Ynn^w	b yreleWo   10.888 )I  UWM	,c %gwzU   邻苯二甲酸二异丁酯 fF]&{b~wk	d=OO(sf   DIBP {|wTZ	G@I_6cE   149、223 mS;Q8Crh
/ykxVCvAt   4 LYT<o FE-	Zu73x#pI   11.637 ;A'1 7B8	5Fm?,^   邻苯二甲酸二丁酯 "uERa(i	R/FV'qy]   DBP f2e$BA	&MLhCekY   149、223 ,ui'^8{gK
X10TZ   5 soK_l|z:J	7n/I'r   11.979 %z_b/yG	Z"nuO\zH~   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 _IGa8=~	0~5}F^8[L   DMEP u"$HWB~@z	ptL}F~   59、149、193 QN5N hs
& b2(Y4   6 D4S?bZFHo	A^7Zy79   12.72 NGGd6V%'-	l),13"?C(   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 2_DtzY:=	iJ# oI@s   BMPP U.jMK{	"2j~3aWj   149、251 uT2cHzqKB
`G{t<7[[;   7 I#e*,#'S	k (^b   13.044 RtEkd_2	9peB+URV   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 CBHWMetJ*	YR#1[fe*_   DEEP t":>O0>cz	Stx-(Kfn4   45、72 _CT|5wQF<
y5 +&P   8 -OAH6U9^	m8`A~   13.41 pgi7 JQ	S)h1e%f, f   邻苯二甲酸二戊酯 ]kvE+m&p}^	U:( t9NX b   DPP Fv B2y8&W	W`kgYGnFG   149、237 ? 'nMZ
]e9k f$'   9 %vzpp\t	Nrh`DyF0D!   15.552 "b;?2_w:E	YN3uhd[2   邻苯二甲酸二己酯 m-]"I8[	R/7l2*   DHXP N11am	(C|%@61S   104、149、76 C2T,1=
c{0?gt.   10 VB%xV 	rL /+`H   15.694 k5/}S@F8	X;0@41t'   邻苯二甲酸丁基苄基酯 %|~UNP$	*BV .zbGm   BBP BN67o]*]<	1zffPC8jl   149、91 pD9c%P
JP]K\nQx'   11 Phczf	1vr/|RWW   17.153 _e W*	}\F>z   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 :d;5Q\C`	,o`qB81   DBEP w@4+ &v>O	RDbA"e5 x   149、223 FWj~bn
ME(!xI//JZ   12 a]*^uEs	)]}*oO   17.81 q &.!*rPD	z)0F k   邻苯二甲酸二环己酯 5"sF#Y&	` mi!"pmw   DCHP X*sF-T$.	N\u-8nE5   149、167 JBqzQ^[n
B3D4fYQ   13 :p{iBD A	v-kH7H"z   18.056 Gp14;	H/ b(db s   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 F"q3p4-<>	mb#)w`<   DEHP 1ayxE(vMcX	Vq*p?cF .   149、167 cc>h=%s`
'?d[ ip   14 6};Sn/8	[]@Mk   20.444 n4:WM+f4	R_^:<F0   邻苯二甲酸二正辛酯 /A>/ ]2(	X9P -fF?0   DNOP 4fN<pG,	6 2LZ}yn_"   149、279 <"t >!I
F4k`x/ak   15 ,e;(\t:	]@'YlPU   22.98 ThHK1{87X}	;xb:{?   邻苯二甲酸二壬酯 <@?bYp	p1Els/|   DNP L:S[QwQu8	ub-ZrC'   57、149、71 LTi0,03l<

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ->_rSjnM{  
p`N+9t &I4  
附件三 N=%4V  
.0 }eg$d  
d%?$
UnQ  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 lFJDdf2:$C  
Qze.1h  
,v\^efc:%  
Fw.df<  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 w&F.LiX^  
\P~h0zg?  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 2J;_9 g&M  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% {(#2G,  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% .s-V:k5  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% ?cur}`  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% H;w8[ImK  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% +%sMd]$,n  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% a* 2JLK  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% 
U,Q  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% O n/q&h5  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% y <] x  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% ;X;q8J^_K_  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% 4"^v]&I  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% .QVN&UyZ  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% z{m%^,Cs,  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% 4ux^K:z  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% I
eN~E'~  
2I$-&c]  
bDtb"V8e  
   Q@(tyW+8U@  
FKWL{"y  
HRg< f= oz  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 :meq4!g{1  
wX+KW0|>  
Jp 7m$D%  
+'V ,z  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 0#:St  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% \Z8:^ct.P  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% 8~|tl,  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70%
VMl)_M:'  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% v5A8"&Jr  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% \O=t5yS  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% yL#2|t(  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% l<-0@(x)  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% 9{&oVt~Y$  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% iM_Zn!|@\  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% !Ct'H1J-  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% cz;gz4d8  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% QLD
ld[  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% u(C?\HaH  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% h e1=  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% eUEO~M2&U{  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 -4IHs=`;I  
mIy|]e`SJ  
^+'[:rE  
ccPTJ/%$  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 d%wy@h  
|0Y: /uL#)  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 "ytPS~  
X{YY)}^  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 V@C8HTg  
^/V>^9CZ  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 "7X[@xX@  
xxS>O%  
2f8\Osn>m  
(.Th?p%>7  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 dvX
[,*wz  
R|u2ga~  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， |@*3 nb8  
XTro;R=#  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 ;.'\8!j  
=lOdg3#\a  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 !+(c/ gwBh  
GVKc4HGt  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 JV`"kk/  
x=VLTH/oo  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 fuQk}OW{  
>.o<}!FW  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 \'9(zbvz9  
vi;yT.  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 /:.p{y  

q^}iXE~  
$L72%T  
Lo O"d'{  
;(Z9.  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： 7! /+[G  
As|e=ut(  
C)&BtiUN/  
,UxAHCR~9  
1、样品提取方法： PSU}
fo  
cE*d(g  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 `dgZ`#  
(J.U{N v  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 j HEt   
XJA];9^  
7J|nqr`>t  
TV?MB(mN  
2、固相萃取方法： T@ zV   
O0sLcuT$  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下：
0\wW%3C  
G54`{V4&s  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； YLb$/6gj6  
1P G"IaOb  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 5p~hUP]tT  
5i=C?W`'  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 5I/lFoy7  
a" L9jrVrw  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 CsN^u H
 
E^m;Ab=  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 ;]W@W1)$  
4-oaq'//BT  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 T_fM\jdI  
dQy K4T  
EKEJ9Y+47H  
M<P8u`)>4H  
补充说明： .Gb!mG  
ZKai*q4?  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 ;?%_jB$P  
x kdC-S  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 -! ^D8^s  
\J(kM,ZJ  
<T]ey  
0B: v0R
 
w8a49Fv  
MfO:BX@$  
^,aI2vC  
~ 7<M6F  
fg4mP_  
%*#+(A"V  
9dWz3b1[ ]  
5]n\E?V'L  
L@Q+H N  
8e1Z:axn0  
D"%>  
=}.gU WV  
F<XOt3VY.  
M=3gV?N  
<>728;/C  
]sJC%/  
'by+hXk  
=[LorvX+  
5JHEBw5W%  
SZ}=~yoD(  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS w 5?D]u  
Qj*.Z4ue  
色谱条件： p4 =/rkq  
"%
p7ft  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm [:cvy[}v@  
: ]
+6l  
进样口：250℃，不分流进样 s^K2,D]P  
2`TV(U@  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） B(ktIy  
*@H\J e`  
进样量：1μL dvU{U@:sz  
n,2   
流速：1 mL/min /R&h#;l  
%qiVbm0  
x~vNUyEN)  
@XX PJq;J  
质谱条件： R TpNxr{[  
N9-7YQ`D  
接口温度：280℃ 0%dOi ko  
.7  0  
电离方式：EI f:ObI  
N+@ Ff3M  
电离能量：70eV hlB\Xt  
y<E];ub  
溶剂延迟：7min KE@+I.x  
dGn0-l'q  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 #Pp:H/b  
(u} /(Ux  
t15{>>f4>  
#-<Go
'yF
 

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

"(7y%TFt:  
T+ZA"i+   
q.`<q  

E|"SMA,