[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： ./aZ

V  
;7B2~zL  
\" 5F;J  
,.1&Ff
)S  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） 
Cb!`0%G  
D0,o
ml  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 %-0em!tUV  
O sHk AI  
流  速：1.0 mL/min n?7h
p%}  
; HR\R  
波  长：242 nm 6+{nw}e8  
FW6E)df  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） ?45K%;.9Q  
^OGH5@"  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 =~(LJ
Po6  
&Pn%zfmMN  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） 2t Z\{=  
0B!mEg  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A &p(*i@Ms  
S^sW.(I  
柱  温：30℃ da
7x 1n$D  
Vq;{+j(  
3GuMiht5  
CUTEp/+  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） 6nhfI\q3wY  
z|4@nqqX  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 /F  
!WVabdt  
附件二 Y9c9/_CSj  
2L{:H  
VIlQzM;%^  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 3=eGS  
<@;xV_`X+  
色谱条件： .4m3@!qo)E  
V,*0<7h  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm H1c|b!C  
Ok.DSOT  
进样口：250℃，不分流进样 W$ d{  
GlkAJe]  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） _xZb;PbFE  
nQ(:7PFa'  
进样量：1μL UOL%tT  
)T~ +>+t  
流速：1 mL/min ~a0}  
|$*9j""u  
质谱条件： vkauX:M  
~}9H<K3V  
接口温度：280℃ p 7E{es|J  
T!eh?^E  
电离方式：EI a\j\eMC  
U~`^Y8UF  
电离能量：70eV Qmh(+-Mp(  
B(T4nH_k  
溶剂延迟：7min YyBq+6nq5  
{(:)  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 K{|dt W&  
$">NW& i(  

Vy"^]5   序号 6L% R@r	iKTU28x   保留时间/min I 6Q_A	7^e }|l   中文名称 tg`!svL!	P VW9iT+c   英文缩写 YU"\ Wd[	?mUu(D:7D   SIM离子 !oRm.cO
9&FV=}MO   1 rKO*A7vE	1VsEic   8.265 8WQ%rN={8	&_^<B7aC'k   邻苯二甲酸二甲酯 c&W.slE6	tB?S0;yXjd   DMP !`U<RlK7	W,J,h6{F   163、77 E%:zE Q
UAO#$o(   2 LX&P]{qKS	i(kK!7W35   9.135 *0zH5c	;a)\5Uy   邻苯二甲酸二乙酯 &4 FdA|9T	=^M t#h."   DEP Q^Z}Y~.	!r <|F   149、177 wpI4P:
F'*&-l   3 @>j \~<%	_ 4]dPk#^   10.888 t1^96@m^	4et#Q   邻苯二甲酸二异丁酯 A6L}5#7-	[40 YoVlfM   DIBP 'a*IZb-M	dY.uOafr   149、223 'wt|buu-H
RJ44o>L4O   4 L]}|{<3\	2[hl^f^%,   11.637 0=DawJ9	Yv -uC}e   邻苯二甲酸二丁酯 +s}28U!	u{,^ #I}   DBP m+"%J d{q	) b8*>k   149、223 Fu/CX4R_|
.Dmvgi]   5 (" %yV_R	=3p h:t   11.979 = Yk$Q\c	RYNzTA   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 vrG NiGIi[	.R,8<4   DMEP 4E)[<%	u4'Lm+&O   59、149、193 {Hv=iVmt
W8^gPW*c5   6 P+SCX#{y	S}E@*t2h   12.72 !QovpO">z	e|LXH/H   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 2,\u Y}4	[~3p+   BMPP k<qQ+\X	f2=s{0SX0   149、251 \Mi< ROp5
]Vsze4>Z[   7 /d4xHt5a	K02./ut-   13.044 9`muk	0)B+ :   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 =h)H`	f { ueI<   DEEP +*dJddz	l>ttxYBa<d   45、72 JnZxP> 2B
0ePZxOSjD   8 !>tXib]:	"`S6 1m_   13.41 _#_Ab8#	;kbz(:wA   邻苯二甲酸二戊酯 ^c5(MR7LD	1/m/Iw@   DPP ?tcbiXRG+	$`   149、237 A1C@'9R*
K(p1+GHC   9 *<@	0,c z&8   15.552 YJ 9_cA'A	IE6/ E    邻苯二甲酸二己酯 +]6 EkZO	arB$&s   DHXP SlZu-4J.-	E'ZWSpP   104、149、76 1/i|
|Mh;k6   10 .D)}MyKnu	=nsY [ s<   15.694 lG{J	My ^pQ]@   邻苯二甲酸丁基苄基酯 U*b SM8)L*	BoXCc"q[   BBP }$o%^"[	+LyhF2   149、91 @ @5u{K
@|^Ch+%@   11 /i"EVN`t	'%MIG88   17.153 wEp/bR1=	l9Vim9R5T   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 rS jC/O&b	YlA=? X   DBEP m/ukH{H1%	5 909O   149、223 ]gEfm ~YV
u+V;r)J{   12 #B?7{#.1	qm '$R3g   17.81 yTEuf@	?=v wr,ir   邻苯二甲酸二环己酯 ANNL7Z3C	2.[qc s3zl   DCHP 3S9~rLrn?	k"U4E J{   149、167 }a`LOBne
-lp_~)j^   13 N.<hZ\].=	Z\Q7#dl   18.056 >!2'|y^	l{R)yTO   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 UOu&sg*o2B	'*k\IM{h   DEHP %(]rc%ry0	- "<f(   149、167 4EK[g M8
M]'AA Uo8   14 joG>=o	8ah]D   20.444 s,RS}ek~|	S]N4o'K}q   邻苯二甲酸二正辛酯 c1^3lgPv	)\(pDn$W   DNOP .DQ]q o]OG	`et<Z   149、279 . ~< +
hD*?\bBs0   15 E;sltl	J3]m*i5A   22.98 *E]\l+]J	U QFuEI<1-   邻苯二甲酸二壬酯 Ir'f((8:	;W].j%]Le   DNP hG^23FiN	lg1D>=(mY   57、149、71 ?<;<#JN

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ^ Xy$is3  
QC5f:BwM  
附件三 UoMWn"ZE  
pebx#}]p-  
xCp+<|1  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 ,C,e/>+My  
U]!.~ji3  
JdUz!=I  
7hF,gl5  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 9
p\Hx#^  
$mI:Im`s  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 AJ?}Hel[0  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% N{V5 D  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% ,hTwNVWI9  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% *0&4mi8  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% aFr!PQp4{  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% 9!xD~(Kr  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% wCU&Xb$F  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% :,%J6Zh?  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% <=m 30{;f  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% WpJD=C%  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% $d2kHT  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% ;-9zMbte:  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% ^Cc8F3os=  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% B-\,2rCCZ  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73%  `CAG8D  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% k(-Z@  
![a/kj  
\'; t*  
   V~J*49t&2J  
to!mz\F  
~
+pg^en  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 a9D gy_!Y  
?jNF6z*M6  
9Qt)m fqM  
*=$[}!YG  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 9E
q^B 9(  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% 6P%<[Z  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% ->&BcPLn  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% E/wQ+rv  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% %rM-"6Q  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% BG
B,Gb  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% ov\Ct%]  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% d 3EjI6R*z  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% sTKab :  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% U9<_6Bsd  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% C+/Eqq^(  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% Rz.i/wg}  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% ]{K5zSK  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% ]~?S~l%  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% `xISkW4%  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% ,( j>)g2Ob  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 X!c?CL  
``4?a7!!  
P)hi||[  
Z0\Iyc G  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 J>h;_jA  
CA*~2|  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 (w$'o*z;(  
YlKFw|=  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 ;s_"{f`Y6
 
= F<:}Tx)C  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 8,*3zVk-  
1-o V-K  
y-a|Lu*  
-_>.f(1  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 }-nU3{1  

,g|2NjUAc  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， :<utq|#s  
|';7v)CIG  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 ab
4LTF|  
sE9Ckc5  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 tX?J
@+  
M-Sv1ZLh  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 P%)b+H{$h  
u-.L^!k  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 RL &lKHA  
E{>`MNj  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 e{!vNJ0`  
T|bZ9_?+2  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 8&.-]{Z  

{u:DC4eut  
?e BN_a,r6  
rR7}SEa  
O9 qEKW)a  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： <EE)d@%>v  
Q%85,L^U  
G6I>Ry[2?  
$
idYG< ],  
1、样品提取方法： O*30|[  
?&N JN/+%  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 gn'. 9";j  
TEY%OIzU+  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 #/YKA{  
chxO*G  
"6.kZ$`%  
dC)@v]#h  
2、固相萃取方法： EKgTRRW  
kMK- E <g  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： 'H97D-86/  
hH%@8'1v  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； h\jwXMi,tj  
INi(G-!g  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； yw2sK
7  
_},u[+  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 10t9Qv/  
>=$( ,8"  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。
I)T]}et  
 Xji<oih  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 .t$~>e .  
d/N&bTg:  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 Q`'w)aV  
oF8#gn_  
,~>A>J  
Ar,B7-F!  
补充说明： 1UT&kD!si  
E:!?A@Fy  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 }y;s(4  
5Z @OgR  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 OLg=kF[[  
cA m>f[  
.0}]/%al  
N D`?T &PK  
!hdOH3h=  
^`?2g[AA  
OXAr..  
!,WO]Ov  
|L%}@e Vw_  
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FLBl`w  
V $Y=JK@  
3g ep_aC  
mqUn3F3  
1<766  
j%%& G$Tfu  
8725ET t  
s aY;[bz}  
awu18(;J  
Fp=O:]  
+xYU$e6Z  
A~0eJaq+  
|YEq<wbQ  
[P _@-:(O  
[ 0>I6Jl  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS skeH~-`M@  
sQ"; t=yC  
色谱条件： XSOSy2:  
<b>g^ `}?D  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm [[FDt[
l4  
Rq@M~;p  
进样口：250℃，不分流进样 X5_T?  
X\Gbs=sf6  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 1Y+g^Z;G  
" i!Xiy~  
进样量：1μL `En>o~L;  
W#Eg\nT  
流速：1 mL/min o$q})!  
jCp^CNbA  
z{m%^,Cs,  
1
[:tiTG|C  
质谱条件：
taBCE?{  
EBMZ7b-7  
接口温度：280℃ _=YHO.  
2%_UOEayU  
电离方式：EI R1?LB"aN  
^~`t q+  
电离能量：70eV y^:N^Gt  
)0XJOm  
溶剂延迟：7min +'V ,z  
3 )*Twqt  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 jI!WE$dt  
R>B4v+b  
A GMrBd|J{  
)-\[A<(  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

Oi4y~C_Xd  
PzH#tG&.j  
chszP{-@X  
i1^#TC$x