[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： GV
dJ&d\x  
 <*p  
z}p*";)A  
y<y9'tx  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） &hzr(v~;  
{|Fn<& G  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 1qwJPM  
Km0P)Z  
流  速：1.0 mL/min Zg >!5{T  
hHsO?([99  
波  长：242 nm SJ:Wr{ Or3  
`I5So-^&z  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） 6;}FZ  
W; ?'  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 /k^O1+]H  
ZRoOdo94  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） ro@`S:  
_l](dqyuN(  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A 3 e<sNU?  
~ny4Ay$#  
柱  温：30℃ rfc;   
5y|/}D>  
l+i9)Fc<i  
j`kw2 (  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） 7\1bq&a<  
dD0:K3@  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 `?R~iLIAq  
!`%3?}mv,  
附件二 rwUKg[ 1N  
3<nd;@:-  
G&/RJLX|w  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS %2)'dtPD~  
;8 D31OT  
色谱条件： x!o>zT\  

KC-q]  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm W=$d|*$  
l`s_#3  
进样口：250℃，不分流进样 $DOBC@xxzT  
U[b$VZ}  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） bt/u ^E  
P7;=rSW  
进样量：1μL 4%TY` II  
> !thxG/_  
流速：1 mL/min I|?zSFa  
6_a42#  
质谱条件： `gIlS^Q  
8m0Gx
gS  
接口温度：280℃ E4^zW_|xE  
XY]|OZ7(  
电离方式：EI #\kYGr-G)  
IG?044Y  
电离能量：70eV 4@D 8{?$~Q  
+@wa?"  
溶剂延迟：7min t&+f :)n  
E\2|  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 q| p6UL9  
U$R+&@;  

VU7x w   序号 : E`N0UA	= 8F/]8_   保留时间/min :*V1jp+	3-4' x2    中文名称 j8* fa	^sxcBG   英文缩写 FVOR~z	{e4`D1B   SIM离子 fI@4 v\
AW;"` ].   1 [UN`~	SB R=   8.265 P+r-t8	bd],fNgJ   邻苯二甲酸二甲酯 |U}al[	?0HPd5=<v   DMP zx	C]{:>= K   163、77 ?rqU&my S
L$*sv .   2 *3_@#Uu7	P)he3   9.135 (9bFIvMc	w>M8FG(4]   邻苯二甲酸二乙酯 Zi$v-b*<	go^?F- dZ   DEP :sD/IM",},	~4HS 2\   149、177 5(F @KeH>
24u;'i-y5   3 tz0_S7h	IBYRuaEB   10.888 sB|>\O#-	p-d2HXo   邻苯二甲酸二异丁酯 4L'dV	yQ5F'.m9e   DIBP "YY6_qQR'	.L;M-`^   149、223 &DnX6%2
yht|0mZV   4 S.,om;`	I$Z8]&m   11.637 GEJEh wO;H	OMaG*fb=   邻苯二甲酸二丁酯 aZK%?c	P)VysYb?   DBP 0FL PZaRP	Aqi9@BH   149、223 (`z ` ni
6rBXC <Z   5 n*7Ytz3#'	e;IzK]kP   11.979 F=/@D)hND	(]wd8M   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 =3~u.iq$	p3sR>ToJ   DMEP "JHdF&	/hNZ7\|P   59、149、193 p5 !B
=TTk5(m   6 >= G{ .H	1WArgR   12.72 W.B;Dy,Y	'G6M:IXno   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 _ct18nh9	Q9Y$x{R&   BMPP _kgGz@/p	v#HaZT]u   149、251 j@j%)CCM
NXJyRAJ*%   7 `|Ll	w2 L'j9   13.044 R%(ww	H1FD|Q3   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 <Z$r\Huf	.U66Uet>RX   DEEP h-^7cHI}	x vi&d1   45、72 _ li\b-
Gk.;< d   8 208dr*6U	<2\4eusk   13.41 OT&mNE4	ZQd\!K8y^Q   邻苯二甲酸二戊酯 ~MvLrg"i	ngZkBX   DPP C,+Sv-	=4;GIi F@   149、237 ]FJpe^ ua
$X.X_   9 Q k`yK|(0=	x)X=sX.   15.552 0G(T'Z1	{r9fKA   邻苯二甲酸二己酯 XO)|l8t#$=	y;N[#hY#CD   DHXP wIW]uo/=	^]He]FW':G   104、149、76 )V!dmVQq{g
4\%0a,\^   10 LoHL}1BG-	w5I +5/I   15.694  Y'NQt?h	:tu_@3bg-   邻苯二甲酸丁基苄基酯 4Fr0/="H	1uTbN   BBP b??k|q	n<;TBK   149、91 g)+45w*+5
%2=nS<kC   11 i)V-q9\	p&=F:-   17.153 ;b:Ct<	C%<[mM   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 .$>?2|gRv	_p vL b   DBEP .}.5|z} A	Fl GKy9k   149、223  m?hC!n>
V|vU17Cgy   12 x Kz^J SF	@"T_W(i;BI   17.81 @=)_P G	u2'xM0nQ   邻苯二甲酸二环己酯  L's_lC	EKf"e*|(L   DCHP '6u;KIG	n@w$5y1@   149、167  3+"z
OUn, URI   13 E N%cjvE	S/]2Qt#T   18.056 Ab -uK|<	HS]|s':   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 pUZe.S>G	FkR9-X<   DEHP $`x4|a8-	6",1JH,;p   149、167 ZY+NKb_
tM <6c+   14 ?@6N EfQf	c?"#x-<1s   20.444 uj,YCJ8UZs	=o;8xKj   邻苯二甲酸二正辛酯 8-3]Bm!	yt}Ve6 m   DNOP 4\a KC%5	x;dyF_*;   149、279 nh"nSBRxk
tSran   15 / E}L%OvE	jcD_<WSe   22.98 gp DH_!K	&u&+: m   邻苯二甲酸二壬酯 mrWPTCD{	2*;qr|h,   DNP d1]CN6 7{G	#$W02L8   57、149、71 "i>?Tg^

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 salC4z3  
4`Ud\Jm[s  
附件三 PP$sdmo  
BDI@h%tJb:  
7A\`  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 G`
zNCx.  
LZn'+{\`  
+a!3*G@N+  
8X,6U_>#a  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 ~o!-[  
@q
'kKVJs  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 77@N79lqO  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% 'GJB9i+a^  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% B
u(51wU8  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% (L/>LZn|  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% oN1D&*  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% dTg`z,^F  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83%  aO&U=!  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% RM|J |R  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% z)3TB &;  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% &42]#B"*  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% Ljy797{f  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% rwq   
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% Ixxs(  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% VExhN';  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% A 6S0dX  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% D]@(LbMG4  
hZ45i

?%  
Nn05me"X  
   Orq/38:4G  
UXct+l  
Bq8#'K2i
,  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 b bC@  
3WwS+6R  
!4p{b f  
\lK?f]qJq  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 }_lG2#Ll5  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% }U7IMONU  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% b~^'
P   
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% mP^B2"|q  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% )>f f"| X  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% 29:2Xu i  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% ^y>V-R/N  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% EeYL~ORdi  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% ( %7V  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% ]{tWfv|Xg8  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% pqg2#@F.  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% R V#w0 r  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% lz=DGm  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% (U5XB [r_P  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% l4kqz.Z-g  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% @yGnrfr  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 nNe`?TS?f  
vwZd
@%BO  
sDV*k4  
UPtWj8h  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 [H#*#v  
<.c@l,[.z  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 .BLF7> M1  
~'/I[y4t  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 C9oF*{  
#A|~s;s>N  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 2i);2>HLG  
B!jINOg  
MxiU-  
K7&A^$`  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 SfE^'G\  
)2X ng_,  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， YWA:741  
*VT@  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 &/lJ7=Nq  
+P6#7.p`Z  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 Co8b0-Z  
GK}?*Lfs  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 2]NP7Ee8Z  
mM~!68lR  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 6__@?XzJ  
G;Y,C<)0k  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 L4sN)EI  
iy Od&|.  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 d^ !3bv*h  

8{^GC(W{]  
pv.),Iv-68  
H0Xda.Y(  
8y )i,"  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： C 5!6k1TcE  
({62GWnn_  
D#(Pg  
{_D'\i(Y_  
1、样品提取方法： 0a;zT O/"v  
7[,f;zG  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 +1A<kJ  
A~t7I{`  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 @J)vuG S  
&wvv5Vd  
z[Qv}pv  
;W"[,#2TM  
2、固相萃取方法： <;K/Yv'{r  
U3QnWPt}>  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： {,-#;A*yW  
&kE|~i:=,9  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； `w}"
0+V  
&3. 8i%  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； .?TVBbc%5  
|@F<ajlV  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 6]*qx5m`<l  
NgKNT}JDv  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 b7/4~_s  
L\5n!(,0  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 YDJc
@*D  
xb\lbS{ f  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 x.I-z@
\E  
+9t@eHJT1  
LdL< 5Q[  
/$E1!9J  
补充说明： e>/PW&Z8Z  
l\H9Io3  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 SRMy#j-  
5}f$O  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 T ^uBMDYe  
|m~|  
K-K+%U  
o9JJ_-O"  
3=`UX  
u4%-e)$X  
*M&~R(TMn  
} ZV$_  
rN OwB2e  
m%akx@{WL  
yhZ2-*pTg  
`g3H;E  
l{6fR(d
?  
ZfoI7<?33  
K-#v5_*  
z" 4$mh  
bvi Y.G3  
iU5M_M$G  
l'm!e'7_  
s&TPG0W  
qYF150  
}I`"$2   
@vs+)aRa  
i_Ol vuy~  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS {Dupk0'(  
]O]6O%.ao  
色谱条件： <5BNcl\ZL  
3e,"B S)+  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm {0?^$R8j  
&65I 6  
进样口：250℃，不分流进样 W<Ri(g-  
a1#",%{I  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） ,)?!p_*@:  
Ky[s&>02  
进样量：1μL B}fd#dr  
,
4mb05w;d  
流速：1 mL/min Fe1^9ja  
GahIR9_2  
W %<,GV  
s{uSU1lQn  
质谱条件： ^V0I!&7lx  
_a\$uVZ   
接口温度：280℃ ST1;i5   
("s!t?!&YS  
电离方式：EI ra F+Bt`  
QfV:&b`  
电离能量：70eV ZMEYF!jN  
YeI|&FMX  
溶剂延迟：7min EouI S2e;a  
Of;$ VK'  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 42Cc`a%U  
,#.9^J  
\4|osZ0y  
tC&jzN"  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

(h27SLY m  
&\Yd)#B/  
<Q?_],ip  
5YgUk[J