[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： 3*
ZE``  
=OCHV+m  
`CO?} rW  
z@dHXj )  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） hl8[A-d(R  
Y2}\~I0  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 0P
z"[  
|-bAzt  
流  速：1.0 mL/min ;BsyN[bF  
j8P=8w{  
波  长：242 nm s"s^rC  
"6o}g.  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） @uXF(KDX  
!/2uO5  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 Bu$Z+o  
8R0Q-,'  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） hj[&.w  
\iVb;7r)9:  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A t*KgCk1  
4;_ aFn  
柱  温：30℃ $^~ dqmE2,  
?y"=jn  
oQ Ymy wY  
q}x+#[Ef  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） Lgr(j60s  
KcPI,.4{  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 C[c^zn  
ku*H*o~  
附件二 Yl\p*j"Fid  
>n(Ga9E  
V =9
  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS D2N<a=#  
x%]5Q/|Ur  
色谱条件： )y#~eYn  
veq.48E]  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm |i
~Ab!*8n  
09_5niaz[  
进样口：250℃，不分流进样 $C.;GUEQ  
kklM"Av  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） +CaA%u  
{3H)c
^Q  
进样量：1μL \ )'`F; P  
L`6 R  
流速：1 mL/min 0Z,a3)jcc  
Nk ~"f5q7  
质谱条件： kKlcK_b;  
*wu:fb2[(  
接口温度：280℃ +#@)C?G,TF  
WUfPLY_c(  
电离方式：EI b,r{wrLe)  
I/vQP+w O  
电离能量：70eV qy\Z2k  
41oXOB  
溶剂延迟：7min 1Vi3/JM@
 

H7Y :l0b  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 X1Vj"4'wT  
'OjsV

$_  

"x~su?KiA   序号 FzM<0FJRX	`~;`q   保留时间/min )0UXTyw^	AdGDs+at,   中文名称 .d;|iwl	x3tos!Y   英文缩写 h*B7UzCg	0/TP`3$X#"   SIM离子 Wz&[cj
/#-zI#iK   1 /Dj-@7.C/	yBkcYHT   8.265 W'! I+nh	6^NL>|?   邻苯二甲酸二甲酯 v7b+	hEMS   DMP EV[ BB;eb	~@d4p|K   163、77 7RCVqc "
&6&$vF65c   2 bPA1>p7	lXi p%6c7   9.135 D!rD-e	cpu|tK.t   邻苯二甲酸二乙酯 0,1)Sg*	u85?f   DEP 9)J)r\	HY,VJxR[   149、177 I>:.fHvUC
Dpkc9~z   3 1?{w~cF}	N >k,"=N/   10.888 zv~b-Tp	YzYj/,?r   邻苯二甲酸二异丁酯 %:Y'+!bX	uZ+vYF^   DIBP YLid2aF	tNYCyw{K   149、223 ~i=5NUE
 J>^KQ   4 ;w^{PZBg	aKw7m={   11.637 tV9K 5ON	9`5qVM1O{   邻苯二甲酸二丁酯 z[De?8=)	|Whkq /Zg   DBP @1+({u#B	h}f l:J1C   149、223 v>p}f"$`
Oo8"s+G   5 `Y.Q{5Y	'U'Y[*m@   11.979 0j(/N	S$1dXXT   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 qo5WZ be	TaE&8;H#N   DMEP <jHo2U8/"s	R,KoymXP   59、149、193 <ZgbmRY8
vIL q5iR   6 Q R<q[@)F	zTQTmO   12.72 i\z,)xp	H:>i:\J/M9   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 gdkQ h_\	^E349c-|   BMPP M5>cYVG	qL?`l;+   149、251 jizp\%W+
qH1&tW$   7 /a:sWmxMT	Bp>Z?"hTe   13.044 aHdXlmL	(h3f$    邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 @0{vA\	PBo;lg`   DEEP SZ'2/#R>	+P5\N,,7R   45、72 # '&&&_Hu3
}cPH}[$zF   8 =Mby;wQ?|	>q!:*   13.41 Y"dUxv1Ap	H0P:t(<Gt   邻苯二甲酸二戊酯 7i@vj7K	={ ]tklND   DPP "gCqb;^	h:3^FV&#   149、237 V[RsSZx =
pX LXkF?   9 IB%Hv]	kx.8VUoM V   15.552 |ycN)zuE	P3op1/Np   邻苯二甲酸二己酯 t8_i[Hw6D	t[=teB v<   DHXP (D~NW*,9	&(/QJ`*8   104、149、76 U%u%_{ -
jk9/EmV*r   10 Qt (4N!j	OkfnxknZ|   15.694 T'${*NVn	/pYp,ak   邻苯二甲酸丁基苄基酯 c6~<vV'}	0jmPj   BBP uB>OS1=	|@Sj:^cJD   149、91 ]aI 
0$:jZ/._   11 ~tB#Q6`nB	)m<C mYr2   17.153 +(/' b'*	1^AG/w   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 "pTU&He	4H_Q Q6   DBEP Jm[_X	XkEE55#>|   149、223 6YF<GF{
<RJ+f-   12 V(P 1{g	<m0m8p"G   17.81 bBgy L yg	p@[n(?duC.   邻苯二甲酸二环己酯 FJ{6_=@D	"w{$d&+?ag   DCHP .tA=5QY,	3T~DeqAyw   149、167 9\!= i
?eDZ-u9)   13 tu6<>	3*#$:waGd   18.056 'RZ0,SK'	\] 0+J   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 58t~? 2E	@T] G5|\ok   DEHP C=(~[Y	{m/KD 'b_   149、167 11RqP:zg
u3\_![Jt?   14 IwR=@Ne8	R'qBG(?i   20.444 zz #IY'dwT	0s6eF+bs   邻苯二甲酸二正辛酯 :=\`P	F41gMg   DNOP 'y7<!uo?	e?WI=Og   149、279 syk,e4:oA
,irc= 0M(   15 r@b a1*y0	|T{ZDJ+   22.98 ZK8DziO	*2Q x69`   邻苯二甲酸二壬酯 ;V^I>-fnm	F2v9XMi   DNP n;k B_i*l	CN7q qd   57、149、71 >2tosxH M

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 yh  
$Z{ap  
附件三 xnuu#@f  
%j.B/U$  
FN$sST  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 N(6Q`zs  
d@$]/=%  
_~l*p"PL<  
qG]G0|f  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 '`)r< lYN,  
;JD /4:  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 wWI1%#__|o  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82%
G~VukW<e  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% Rk8oshS+2  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% N!{waPbPi  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% h1(GzL%i_  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% Xi:y35q  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% DNyU]+\L[l  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% Qy!;RaA3T  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% V6CRl&ZKO  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% hmG^l4B.T  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% rIhe}1  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% c+bOp 05o-  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% hgmo b"o  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% Ltrw)H}  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% "c2{n,  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% "/~KB~bB  
zir?13N7  
!=B=1th4  
   -NL=^O$G  
Ae3=o8p  
6EY W:o  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 U3rpmml  
U+7!Vpq  
I;rh(FMV  
-_p@I+B  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 @S#Ls="G  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% C
[2LP$6*/  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% yh{Wuz=T  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% -xMM}r y  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% 1Uf8ef1,  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% s3+6Z~g'B  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% P d)<Iw^<
 
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% z3|)WS^  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% |p"4cG?)  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% 6" PwOEt  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% \r^*4P,,  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% F]k$O$)0  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% O({vHqN>  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% 9<Kc9Z  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% #M5[T N!  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% dt=5 Pnf[y  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 k<.VR"I p  
2
nv-/%]  
\+I+Lrj%  

V+MhS3VD  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 \*x=q20  
w@Gk#  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 +ug[TV  
1Yb9ILX[J  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 W*D]. |  
AfOq?V  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 Q{))+'s2h  
R$xkcg2(  
ZP olE_P
7  
J&jNO Nu?  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 DZ9qIc}Y  
eODprFkt}
 
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， =P"Sm r  
raPUx_$PH  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 >=Z@)PAe  
d{LQr}_o$$  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 95G* i;E  
s`$px2Gw  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 N>A*N,+  
I@f">&^  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 5_mb+A n,  
32flOi:  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 /?; 8F  
| ZI~#V  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 Rp2~d  

@un+y9m[C  
!!H"B('m  
x3Y)l1gh  
4=MjyH|[Jx  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： l-l7jq]R  
Jk6}hUH,  
P <+0sh  
$[n:IDa*@1  
1、样品提取方法： ]p3f54!  
%dFJ'[jDL  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 n]ba1t8ZA  
O'mcN*  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 !}#> ky!t  
/[.V(K D  
j)?M  
|'nQvn:{  
2、固相萃取方法： f\]?,
 
$Es\ld  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： 5@w6pda  
d_@ E4i  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； Z8#nu  
N}?|ik
 
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； rexv)!J  
u2 s  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； _;j1g%  
-tj#BEC[H(  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 3^7+fxYWo  
q]?qeF[  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 23gN;eD+m6  
$hhXsu=  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 >3!~U.AA'x  
{A0jkU  
"iSY;y o  
{-4+=7Sg1  
补充说明： A9xeOy8e  
4Zbn8GpC  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 "\o#YC  
1-y8Hy_a2  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 7Eyi~jes  
 0s;~9>  
UR'[?  
=8]`-(  
K#OL/2^ 5  
{)qr3-EM#  
:rb;*nY!  
rUKg<]&@  
/9_%NR[  
XM\\ Imw  
6_`Bo%  
+ ?)7l  
UwUHB~<oE  
BH'*I yv  
W`x.qumN
 
{ F<0e^*  
Q"I(3 tp9[  
xgxfPcI  
"6d0j)YO  
:E-$:\V0}k  
Fv]6an.  
'xta/@Sq  
L;0 NR(b!  
P;.roD9  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS Md4Q.8  
))
AxU!*.  
色谱条件： )n)AmNpq   
}<~(9_+  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm C&yZ`[K  
+d#8/S*  
进样口：250℃，不分流进样 ^B1Ft5F`b  
B:X%k/{  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 4 xqzdR_  
yf&_l^!  
进样量：1μL >TglX t+  
\FfqIc9;  
流速：1 mL/min 2T}>9X  
adu6`2*$  
9{4oz<U  
vv&< 7[  
质谱条件： SW %}S*h  
U
F^[?M =  
接口温度：280℃ /ojx$Um  
=8#.=J[/  
电离方式：EI }F0<8L6%  
LZ_0=Xx%  
电离能量：70eV K"VcPDK  
_BA; H+M  
溶剂延迟：7min i$%Bo/Y   
vGlVr.)  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 /d}"s.3p  
q=->) &D%  
@Q,Q"c2  
"G%</G8M  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

2`riI*fQ  
YX-~?Pl  
F^bY]\-5  
YyxU/UnhG