[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： l7^^MnkC  
$6wSqH?q  
Q*ELMib  
*P`wuXn}  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） {x,)OgK!{  
^IuhHP  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 FVrB#Hw~  
]7W!f 2@  
流  速：1.0 mL/min B47I?~{  
jw
E=  
波  长：242 nm 2h51zG#qd  
"ufSHrZv  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） Bt@?l]Y  
[=jZP,b&),  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 Y"8@\73(R  
q5e(~@(z<`  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） V > )/z|[  
3R%JmLM+R9  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A #?S"y:  
xJ/)*?@+  
柱  温：30℃  ]aF;  
Posz|u<x  
q9ra  
R~a9}&  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） hv#$Zo<  
t6 +W  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 d]sqj\Q57  
_p:n\9k  
附件二 #|je m   
Yu" Q  
M.y!J  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS up['<Kt+a  
# lqH/>`>  
色谱条件： I>nYI|o1  
{"~[F2qR  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm n[!QrEeR},  
j~\FDcG*ed  
进样口：250℃，不分流进样 46)[F0,$r  
/2T  W?a  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） "2C}Pr,p8  
|Tmug X7  
进样量：1μL PO'K?hVS^w  
}03 ?eWk/y  
流速：1 mL/min :,p3&2I  
9.dZA9l@g  
质谱条件： n7ZJ< ~wl  
)ZLj2H<  
接口温度：280℃ R$}Hv  
z<A8S=s6n  
电离方式：EI 9b-4BON{P  
kd& ~_=Q  
电离能量：70eV |iSwG=&  
#+"D?  
溶剂延迟：7min 1M_6X7PH  
P%[{
'u  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 rwwyYIlEg  
bTYR=^9  

5K|`RzZ`B$   序号 DeN2P	2I= 4l    保留时间/min L)H/t6}i	vvG*DGL)qL   中文名称 o|s|Wmx>u	>#;>6q9_   英文缩写 |t58n{V.O	9PR?'X;4   SIM离子 6I5LZ^/G9
:{#w-oC>6P   1 .Jc<Gg	gF|u%_y-qt   8.265 [Al}GM	Kl :x?"g)   邻苯二甲酸二甲酯 P[gYENQ 	@ql S #(   DMP $_W kI^	{=T 9_c   163、77 !X<dN..
-pm%F8{T]   2 |il P>b	9h0Y">}`b   9.135 M:.0]'[s5	.]K{8[:hq   邻苯二甲酸二乙酯 7NQEnAl	Pb l#ieZM   DEP G Y+li{	%"BJW   149、177 aJ$({ZN\#
-5#cfi4^*   3 IQQ QB	E{{Kzr2$   10.888 :HkXsZ	b>L?0p$ej   邻苯二甲酸二异丁酯 #X qnH	F $1f8U8   DIBP R0YWe	dK>sHUu   149、223 j?1wP6/NP
4O Fv#$[   4 4|;Ys-Q	o2!wz8   11.637 @W-0ybv	q1 Mt5O}   邻苯二甲酸二丁酯 fNz(z\	f4$sH/ 2#v   DBP N9 h|_ax	v[V7$.%5Q   149、223 bj AI7B8As
hbEqb{#}@   5 Iw?*y.z|	FC WF$'cO   11.979 sDAP '&	q;*'V9#   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 yzZzaYv "/	suE8"v!sk   DMEP Y>atJ	:{4C2qK>   59、149、193 }Xfg~% 6
N;,zPWa   6 h(R7y@mp\0	0U:X[2|)   12.72 WrcmC$ff	VrLp5?Bh   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 X)6G:cD	:5$ErI   BMPP x;`Gn_	U;TS7A3   149、251 VcXr!4 M
bcjh3WP   7 8_w6 % md	H\n6t-l   13.044 $GU s\	0^Vw^] w   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 rir,|y,	F):kF_ho   DEEP -T1R}ew*t	TCzlu# w   45、72 xi.?@Lff
Lg,ObVt!   8 I4w``""c	z1,#ma}.   13.41 tj00xYY	]e5aHpgR=   邻苯二甲酸二戊酯 n} !')r	^/Yk*Ny   DPP Z ]ZU K	\8a014   149、237 :4X,5X7tW=
gMq;   9 j+/EG^*/	"FGgem%9   15.552 W0U|XX!&	]>sMu]biH   邻苯二甲酸二己酯 4T&Jlu?:	B1i'Mzm-4   DHXP P:XX8&#	<bv9 X?U   104、149、76 =PLy^%
f'S0"   10 V-i:t,*lk(	!$o9:[B   15.694 FW<YN;	oX/#Mct{s   邻苯二甲酸丁基苄基酯 ( G"/C7q	%o0.8qVJi   BBP (W`=`]!	."v&?o Ck]   149、91 Yg`z4U'6~
>Gxu8,_;   11 =G<S!qW	Hn(L0#Oqy   17.153 ;0++):30V	3sGe#s%   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 b;sjw5cm_	o #&;,9   DBEP <?iwi[S	"Mmvf'N   149、223 o%A @ OY
Lpdp'9>I   12 8>K2[cPD	ve /Q6j{   17.81 5lC"10	v 1O* Q   邻苯二甲酸二环己酯 =X2 E F	,Tyh._sa   DCHP E$rn^keM	s?5(E}   149、167 3&-BO%i
M(S:&GOU   13 yHhBUpIo	o$YL\ <qp   18.056 @QMMtfe Lj	r/fLm8+   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 ? S>"yAoe	q!9SANTx   DEHP }0|,*BkI m	X552 7`?e   149、167 7 rOziKZ"
gz-}nCSi   14 Q'&oSPXSDd	}i./,   20.444 gEMxK2MNXj	kb]PWOz   邻苯二甲酸二正辛酯 $uF}GP_)	tpO%)*   DNOP W rQe'ny	9" KEHf!   149、279 h W6og)x
!jGe_xB}~   15 +hI:5(_	DpH+lpC   22.98 )HQ':ZE$	eW,{E)x:   邻苯二甲酸二壬酯 GKTt!MK	M?l/_!QB   DNP >zF k} /	^3"~ T   57、149、71 =?]H`T:

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 K/LoHWy+n*  
$@L}/MO  
附件三 CA ,0Fe3  
,m.IhnCV\  
Y&`nB,'  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 2;=xHt  
54, (;  
_cH 7lO[  
"# BI"  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 G2}e@L0  
\LpR7D  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 cp
>1b8l6?  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% ]J7.d$7T  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% J M,ndl  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% ^5sO;vf  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% "?UBW5nM#  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% '{?7\+o.x  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% 89 [5a  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% TxD,A0  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% Ej]:j8^W  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% d/O~"d  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% ;5bzXW#U  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% U2 u\Q1  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% #ONad0T;  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% VM1`:1Z:$  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% ?W*{%my  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% {WE1^&Vk-}  
_qq> 43  
0Y_?
r$M  
   LX [_6  
5,I|beM  
F%t_9S,)O  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 Uq:WW1=kh  
J4yL"iMt  
dr|>P*  
R Obo4  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 x)Y?kVw21"  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% O_zW/#  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% DChqcdx~~  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% 7$;#- l  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% U9<AL.  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% 03ol6y )C  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% WH >=*\  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% 5r&bk`  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% s+tPHftp  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% `fnU p-  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% l}bAwJ?  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% D*%?0  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% lm;Dy*|<  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% i/C`]1R/  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% `!udU, |N  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% [!~=m  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 NfgXOLthM  
7Q .Su  
\H] |5fp*  
"Oxr}^% i  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 Cy~IB [  
uC'-: t#  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 U%q)T61  
E2e"A I.h  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 ='7m$,{(Q[  
|9E:S  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 W5R/Ub@g  
V}E['fzBFV  
Rh'z;Gyr  
AiqKf=  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 pS?D~0Nb  
|~9rak,  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， NLsF6BX/-  
H
Sruue8  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 #qd!_oN  
Es=G' au  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 <&eJIz=  
zw<<st Bp  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 ?q!4RE M  
`xM*cJTZ  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 <$A,|m  
'6D"QDZB  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 A rE~6X  
^!tX+`,6^  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 0+mR y57  

)P?0YC  
>07i"a  
{^ BZ#)m|  
uv5NqL&  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： A46dtFD{  
yfwR``F  
2K3j3|T  
"z6p= B"?3  
1、样品提取方法： nzO-\`40  
U4Zx1ieCKH  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 EAh|$~X  
.R)Ho4CE  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 q-1vtbn  
K7$Q.  
Mu.tq~b >  
SA"4|#3>7  
2、固相萃取方法： ;S
rzka2  
?r$&O*;  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： ,S}wOjb@  
B|>eKI  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； 1[Q~&Q C  
M(} T\R  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； r-hb]!t  
DI :  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； "NV~lJS%  
e9F+R@8  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 ;A?86o'?  
2N&S__  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 hC!8-uBK5<  
S2V+%Z _J  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 9+'*  
.V{y9e+  
"2 qivJ  
E7U.>8C  
补充说明： k|rbh. Q  
Ix.Y_}  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 $mst\]&;  
%xwtG:IKEV  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 Nj}-"R\u  
SuJ4)f;'0  
?_@Mg\Hc
 
?[hk
h8|  
0'II6,:  
6$\' dkufQ  
O`'r:&#W  
),U>AiF]  
gP>`DPgb^  
Q1u/QA:z7  
{Nny.@P)H  
+jGSD@32>  
oC1Nfc+  
K_[B@( Xl  
b&E9xD/;r  
PuGc{kt  
y:ad%,. C  
h!q_''*;  
e)A-.SRiO$  
.Arcsg   
QeNN*@ ='i  
8(|lP58~  
SVJt= M  
mq6 TwM  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS Ic')L*i7O  
['jr+gIfQ  
色谱条件： (,OF<<OH  
T3,}CK#O  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm `Y_G*b.Rm  
B<\HK:%{  
进样口：250℃，不分流进样 8T?D#,/   
9
>9,  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 2KtK.2;7  
<rx tdI"3  
进样量：1μL `!Yd$=*c_&  
'Y0h w  
流速：1 mL/min Y.kgJ #2  
d9up! k  
b|e1HCH  
K[ yP{01  
质谱条件： -9Dr;2\  
+ZOK
fX  
接口温度：280℃ 7=/iFv[  
[&g"Z"  
电离方式：EI /DjsnU~3  
}?o4MiLB  
电离能量：70eV XFYa+]B2q  
1tLEKSo+  
溶剂延迟：7min zU0SlRFu  
f >.^7.is  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 uq;yR[w"  
?J,,RK.  
o2'Wu:Y"  
Q6wa-Y,  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

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