[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： )6^b\`  
bP(V#6IJ8  
U FC.!t-Z  
;x|4Tm  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） eW0:&*.vMj  
DTAEfs!ZW  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 E!C~*l]wJx  
6pxj9@X+  
流  速：1.0 mL/min 8!S="_  
Z!^iPB0~D  
波  长：242 nm T[~ak"M  
SI8mr`gJ  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） p+#uPY1#  
,hYUxh45  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 qwiM.b5  
z*I
=  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） p`T7Y\\#!  
li$(oA2  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A !pQQkZol  
E{(7]Wri  
柱  温：30℃ lJ:B9n3OzT  
Aum&U){yY  
j@&F[r  
X j.6A,}^  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） ?R#-
gvX%  
&3:-(:<U  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 qVx4 t"%L>  
4pduzO'I  
附件二 ovvR{MTc  
\h!%U*!7{  
B#OnooJI  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS .Wc<(pfa  
AVF(YD<U  
色谱条件： -r@fLkwg  
ZUyG }6)J  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm aY@]mMz\
 
?#YheML?  
进样口：250℃，不分流进样 X ^8@T  
r'/&{?Je/  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） rofj&{w  
I!eu|_cF  
进样量：1μL = >CADT
U  
MdXOH$ps  
流速：1 mL/min E:vgG|??  
C# zYZ JZ  
质谱条件： PL} Wu=  
>x?x3#SX  
接口温度：280℃ 3PkVMX
 
*.%z  
电离方式：EI #zmt x0  

_E %!5u  
电离能量：70eV .A6D&-&z  
A 1Ru&fd!  
溶剂延迟：7min j(~e{HZ
 
T.(C`/VM  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 .;\uh$c  
^>Vl@cW0uz  

gmqA 5W~y   序号 aT4I sPA?_	n'To:   保留时间/min Tw,|ZA4XH	IM$ d~C   中文名称 f rokl5L@	/HH_Zi0?N|   英文缩写 ?[]jJ	w5 #;Lm   SIM离子 e?7y$H-
@Q7^caG   1 i#NtiZ.t=	d\R "?Sg   8.265  wh#IQ.E-	O=eU38n:5u   邻苯二甲酸二甲酯 { e$@i	1+"d-`'Z2O   DMP TS`m&N{i")	Lf:#koaC   163、77 Y3#8]Z_"}O
62kA(F0e,   2 ]heVR&bQ	L8f_^ *,   9.135 belBdxa{"	*%\Xw*\0   邻苯二甲酸二乙酯 G({5LjgW	Zx`/88!x[   DEP ?9 W2ax-4	@Z7s3b   149、177 3''Uxlo\
1d842pt   3 0C3Y = F	_RS CyV   10.888 *v: .]_;	+;*4.}   邻苯二甲酸二异丁酯 KU Mk:5 c	Bk@EQdn   DIBP ({$rb-	c>! ^\   149、223 qP zxP @4
l>hvWK[ ?I   4 U7e2NES	S\GxLW@x   11.637 2T@?&N^OD	ixoN#'y<"   邻苯二甲酸二丁酯 T[g(S0dz	8o).q}>&   DBP G,1g~h%I$	tWQ$`<h   149、223 xJFcW+
q$`>[&I~)   5 ~at:\h4:	N0ef5J JM`   11.979 TZ}y%iU:mB	tDMNpl   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 glBS|b$\:	&^Gp   DMEP Lzcea+*uw	7mtg   59、149、193 mrr -jo
+% K~HYN   6 lnF{5zc	aY6F4,7/B   12.72 #u +~ ^M	k)W&ZY   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 oa`7ClzD	vF/wV'Kk   BMPP )CgH|z:=b	Yb1Q6[!   149、251 t6lwKK
QZ*gR#K]Sz   7 ru 4M=D	{<?8Y   13.044 e*U6^Xex	''3I0X*!   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 $g/h=w@	Rz[3cN)?q   DEEP c] t@3m	.t/@d(R   45、72 r4<aEj;l
"F6gV;{Bt   8 /?($W|9+l	E+#<WK-   13.41 i'4.w?OZ	K1Uq`TJ   邻苯二甲酸二戊酯 qZ&~&f|>e	c?u*,d) G   DPP  bLAHVi<.	0bT[05 .   149、237 }m~MN4 l
x5mg<y2`Ng   9 JXYZ5&[	?Rx(@   15.552 mbGma	\ "$$c   邻苯二甲酸二己酯 dK4rrO	nGkS S _X   DHXP ,0q1Id	O6R)>Y4   104、149、76 qul#)HI
pB 8D   10 [49Cvde^	. : Wf>:   15.694 ,=P&{38\q	dm4Q'u   邻苯二甲酸丁基苄基酯 &>,;ye>A	,X4+i8Yc   BBP ]P0%S@]	rPaJ<>Kz   149、91 ^v'kEsE^*
Rql/@j`JX   11 eU1F7LS	y2jv84 M   17.153 djdTh +>28	z1J) ./BO   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 I2[Z0G@&=	?+t;\    DBEP \sNgs#{7E7	Lh[0B.g<   149、223 [bhKL5l
MB)<@.A0   12 D$}hoM1	4Zbn8GpC   17.81 Jt8;ddz	[7I:Dm   邻苯二甲酸二环己酯  /a1uG]Mt	]o] VS   DCHP k4q":}M	>=N-P<%   149、167 YiZk|K_
UT3Fi@   13 edL2ax	s{^B98d+W   18.056 beOMln+R	d|R-K7 ~~   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 hV@ N-u^	)c11_1;   DEHP $#rkvG_w	c0o]O[   149、167 $NR[U+
(utP@d^   14 ]njNSn	3(oMASf   20.444 n$2oM5<	MFROAVPZ5   邻苯二甲酸二正辛酯 VzXVy)d	{m*lt3 $k   DNOP yP7b))AW9	XncX2E4E   149、279 @RPQ1da
,marNG   15 \lG)J0	)jXKPL j   22.98 )Lz =[e	c1E{J<pZ   邻苯二甲酸二壬酯 xxs +=.2	VWzQXo   DNP Ye]K 74M.	E G+/2o+W   57、149、71 ,Z @I"&H

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 P$)g=/td1  
N^Re  
附件三 ScPVjqG2{  
XjX  
/ ;]5X  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 + ?1GscJ  
dr q3=2  
Or
Y[  
wKV4-uyr  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 "LMj,qZ1!  
zG!nqSDG  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 ZCiCZ)oc  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% JxAQ,oOO  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% Ui{%q@  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% Cy/&KWLenf  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% }pc9uvmIJ  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% EE/mxN(<  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% gEASYIQ  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% <Au2e  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% I`>U#x*  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% sE1cvAw9l  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% $Y$9]G":  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% 5{Cz!ut;tE  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% k3\N.@\  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% 2[E wN!IZ  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% K*6"c.D  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% \-<BUG]=  
|<%!9Z  
R>' %}|v/  
   t=_^$M,yr  
!Sq<_TO  
%>_[
b,  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 m 2H4V+M+  
a6p0_-MF  
yzK;  
gY}In+S  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 Lx"GBEkt7  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% sJHVnMA  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% z2=bbm:  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% 'K[ml ?_  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% mvn- QP~"  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% X2w)J?pv  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% wmVmGa R  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% ?d')#WnC  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% ?_Qe45 @  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% lu=a e<M  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% ~Xi@#s
~  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% ?Uql30A  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% @]uqC~a^  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% T(|'.&a  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 5F kdGF  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% zs$r>rlO  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 Dc>)js|"  
m4P=,=%  
bO mM~pD  
+FVcrL@  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 L{CHAVkV  
Js#c9l{{  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 _5YL !v&  
|-aj$u%~  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 a m 
zw  
LA@}{hU  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 IKr7"`  
c`}X2u]k  
1W!n"3#  
7ER 2h*  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 835Upj>  
KE&}*Nf[  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， q |^O  
XZ&v3ul  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 _Lb& 2PAG  
'> Q$5R1  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 U[D<%7f  
8)!;[G|  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 MX0B$yc$  
\
veL5  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 i?/?{p$#a-  
8!SiTOzR?  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 i|^6s87"N2  
sK? -@  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 |u;PU`
^-z  

;?8_G%va  
:/Q  
_~piZmkG$  
qMLD)rL  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： <4P4u*/o  
CbwJd5tk  
 CCL  
zxC#0@qX07  
1、样品提取方法： MBqt&_?K  
Y*H|?uNF
 
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 4A_[PM  
X22[tqg;&  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 R}q>O5O  
\lZf<f  
|j#C|V%kV  
yIDD@j=l  
2、固相萃取方法： iZaI_\"__  
f]JM /  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： }M3fmAP}  
/J:bWr  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； ?q;Fp  
?i06f,-  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； WXmn1^"kK}  
Y0_),OaY  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； O'W0q;rT  
= Wu *+paQ  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 )*,5"CO  
.R9IL-3fO  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 wyQzM6:,yX  
Pri`K/  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 -mRA#  
>&p0d 0  
e{v=MxO=S  
E5N{j4\F  
补充说明： aOiR l,  
CJXg@\\/  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 a\:VREKj,  
CBD6bl|A  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 A^2Uzmzl?  
,ML[Wr'2  
(<Th=Fns?  
=pznu+,  
{M?vBgR\B  
YNBHBK4;  
j$TwL;  
jh.@-  
!xKJE:4/,m  
mnID3=JF  
;_(PVo  
'vbc#_;  
gn{=%`[  
033T>qY  
wO>L#"X^v  
)kJH5/  
EOoZoVdzx  
P &)1Rka  
)){xlFA}  
=D^TK-H  
Oc&),ru2l  
?/JBt /b  
w#^U45y1v  
D0;tcm.$  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS YGsS4ia*4i  
E:nt)Ef,  
色谱条件： oY`qInM_  
s{/qS3=  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ,PWj_}|L[  
XtBMp=7Oa  
进样口：250℃，不分流进样 tLc El'Eo  
w5]l1}rl  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） #Nte^
E4  
,2WH/"  
进样量：1μL w 7tC|^#G  
UqX1E  
流速：1 mL/min za, 2 r^  
~SVQ;U)-  
j$eCe<.3  
0->/`/xm  
质谱条件： 
a'[)9:  
<q7s`,rG  
接口温度：280℃ Tkrx7Cs(  
[:i sZG*  
电离方式：EI E:Y:X~vy  
/v&`!nKu  
电离能量：70eV  EW5]!%  
z1vni'%J  
溶剂延迟：7min |B1Af  
YnxU
(v'\  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 4H7Oh*P\j  
aZ/yCS7  
#x|VfN5f  
A xR\ned  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

*U2Ck<"]  
95% :AQLV  
OT"lP(,  
RDJ82{