[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： #%"
TU,[+  
Qmx~_  
jdf)bO(9#  
(kyo?3  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） E*CQG;^=N  
8z8SwWS?  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 @b\_696.  
8A u<\~p  
流  速：1.0 mL/min ]m#M wN$  
vP)~j1  
波  长：242 nm Xb:BIp!e  
KXA)i5z  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） y&=19A#  
KM(9&1/  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 Nz3%}6F:  
t:sq*d  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） n,:.]3v%  
4J 51i*`  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A ZMMo6;  
O:=|b]t  
柱  温：30℃ n$|c{2]=  
69j~?w)^  

1H,tP|s  
8u'O`j  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） .F$|j1y  
Cq*}b4^;  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 %V(N U_o  
l
HKf#|  
附件二 l/png:  
K%(XgXb(</  
%t~SOkx  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS QSF"8Uk  
t`Y!"l  
色谱条件： $' (QTEM  
%/y`<l Jz(  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm sp=OT-Pfp  
wMz-U- z  
进样口：250℃，不分流进样 /BMtcCPG!  
|As2"1_f  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） hI
|/>4<  
gwSN>oj &  
进样量：1μL O GJ=VQA  
JBR[; z M  
流速：1 mL/min z wL3,!t  
B(j02<-  
质谱条件： G HD^%)T5^  
V43nws"4  
接口温度：280℃ }B y)
y;~  
6*ZU}xT  
电离方式：EI )YuRjBcp,"  
[2Iau1<@  
电离能量：70eV 9Z&?R++?  
;}LJh8_  
溶剂延迟：7min <^xfcYx\  
EMLx?JnP  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 )8;{nqoC  
wG+=}1X  

( vKI1^,   序号 `)6>nPr7P	1!!\+ c2*   保留时间/min [OzzL\)3l	;1v=||V   中文名称 r@iASITX	Zd[ OWF   英文缩写 =+<d1W`>0	qI h #~   SIM离子 ,t1vb3
X8b|]Nr   1 yyP'Z~0	`B:"6nW6   8.265  qaG#;	^P?vkO"pB?   邻苯二甲酸二甲酯 D K6?E\<	@*(4dt:V   DMP _9@ >;]	&Jy)U   163、77 *V1J4 u
3F+Jdr'   2 !^y y0`k6	!tXZ%BP.u   9.135 S&(^<gwl	?WpenUWk   邻苯二甲酸二乙酯 tmJgm5v	B$vr'U    DEP {6G?[ `&ca	BqH]-'1G   149、177 o.7{O,v
,v9f~qh   3 -$2kO`|p	(Yb[)m>fQ}   10.888 } JiSmi6o	wJ+Aw   邻苯二甲酸二异丁酯 en*d/>OVJ	:6{`~=   DIBP ^U[D4UM	"xJ 0 vlw   149、223  \e3`/D
xiblPF_n3   4 K(}AX+rIg	r|Z5Xc   11.637 Dnf *7)X	}J:+{4Yn   邻苯二甲酸二丁酯 M<PIeKIEB	. #lsic8]   DBP ! k3e\v|	F[ ajOb8   149、223 5q9s,r_
Isy'{-H   5 jHXwOJq %	4(6b(]G'#   11.979 /S5|wNu	=OIw*L8C"I   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 &k-Vcrcz	eW5SFY.   DMEP .itw04Uru	RrUBpqA   59、149、193 _iNq"8>2
u:0aM}9A   6 bR@p<;G|	^B8b%'\   12.72 >pUtwIP	L(&&26Y   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 {G?N E	H":oNpfb   BMPP %^RN#_ro(3	oudxm[/U   149、251 f^W; A"+
lg^Z*&(   7 ,v"YqD+GC5	;*MLRXq   13.044 3Z1CWzq(	(+0v<uR^D   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 h$2</J"	`nu''B H   DEEP 7 qS""f7	lnjXDoVb<   45、72 uA< n
FYpzQ6s~   8 fb~ytl<	c24dSNJg,   13.41 -Fe?R*-g	-Ps!LI{@   邻苯二甲酸二戊酯 9w7n1k.	YpVD2.jy   DPP MDn ua	~x1$h#Cx'   149、237 X 4~y7
k 5'Vy8q   9 sBT2j~jhJ	VY7[)   15.552 8}O lL,fP	'a@/vx&J   邻苯二甲酸二己酯 AP?R"%	Z 2V.3   DHXP n FHUy9q	rZ}:Z'`   104、149、76 }C"%p8=HM
7x|9n   10 |\pj;XU	rr],DGg+B]   15.694 Bu~]ey1	7rc0yB   邻苯二甲酸丁基苄基酯 O:;w3u7;u	$]/{[@5   BBP [Kg+^N%+	qZ}^;)a^   149、91 @e.C "@G
cJ=6r :   11 RLjc&WhzXu	C_}]`[   17.153 {3mRq"e	Ko< :Z)PS   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 e'NJnPO	w,.TTTad   DBEP Qz1E 2yJ	Q->sV$^=T   149、223 AO4U}?
V~3a!-m\   12 $bR~+C	m+[Ux{$   17.81 ITI)soa~	oJz^|dW   邻苯二甲酸二环己酯 WSB0~+	+7.',@8_V   DCHP A?P_DA	904}Jh,   149、167 ^jZbo{
eq;uO6[   13 qo bc<-	q>+k@>bk@   18.056 aEeodA<(	H<,gU`&R   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 '\iCP1>+S	E ~<J C"]   DEHP )Ql%r?(F+	`X&gE,Ii   149、167 M .mf w#*
%Q|Atgp   14 [{,1=AB	,k3FRes3   20.444 +CNv l	K be C"mi   邻苯二甲酸二正辛酯 Y76gJ[yjn	S)@j6(HC4   DNOP Nj/ x. X	=T7.~W   149、279 tKXI k9e
1$h,m63)   15 dSHDWu&	U]rRQ d/:;   22.98 G  01ON0	"" EQE>d   邻苯二甲酸二壬酯 =?8@#]G+	"#g}ve,   DNP r<$y=B	|Y.?_lC   57、149、71 %BQ` MZ

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 Ez=Olbk  
h2""9aP!  
附件三 u-5{U -^_  
6f*CvW  
A$:U'ZG_  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 $H>W|9Kg,  
fx>4  
~O&:C{9=  
Ak"m 85B  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 }d}Ke_Q0  
EA]U50L(  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 Y#P%6Fy  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% <;Zmjeb+#  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% Q|?L*Pq2I  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% >_"an~Ss  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% s{\8om'-  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% xBi' X  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% &H/'rd0M  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% 4-H+vNG{%  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% \B,@`dw  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% XXcl{1Kp!@  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% %oa-WmWm  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% s/ qYa])  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% ;m{1_1  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% RF4vtQC=  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% Nk VK  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% 9YQb&  
_w+:Dv~*a  
aPfO$b:  
   Ed,~1GanY  
6x[}g  
]kRfB:4ED  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 A) %/[GD2  
q#ClnG*  
T?soJ]A  
+wvWwie  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 A8fOQ  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% }{qZ[/JwqN  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% YY((V@| K  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% 6?mibvK  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% k_q
d|  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% ]kG"ubHV?h  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% Ins`l  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% KRLQ #,9  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% }Qc@m9;bH  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% 7 60Y$/Wz  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% FLCexlv^  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% z^q0/'  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% *@r/5pM2}  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% B5VKs,g  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% !/*\}\'4  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% ?|C2*?hZ+  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 2 yz _  
dAj$1Ke  
e+K^Aq  
/qw.p#  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 5F"jkd+  
Xn ;AZu^'R  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 =vhm}  
0m ? )ROaJ  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 3R VR  
L /^I*p,  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 qIqM{#' ^  
`9.r`&T6K  
u W3!Yg@  
1aABzB ^  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 dcT80sOC  
7=, ;h  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， ^sg,\zD 'X  
>-{Hyx  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 #cLBQJq  
A.w:h;7  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 uRe'%?W  
W`*r>`krVJ  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 7vj2 `+r.  
Ld-_,-n  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 BDZ?Ez\Sg  
$xdy&  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 dcWD(-  
$7A8/#  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 $]2vv
r  

BM6 J  
o'uv5asdb  
=~7%R.U([e  
8Df(|>mK  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： /<J&ZoeJB  
7soiy A  
'1o1=iJN@$  
Cq-d,  
1、样品提取方法：
j9sK P]w  
qT U(]O1  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 xUp[)B6?:  
H[K(Tt4<&  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 ~hJ/&,vH!  
\M@9#bd  
pWU3
?U  
 pt`^4}  
2、固相萃取方法： aFZu5-=x  
$}{u6*u.,  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： @@
!Mt~\  
Cfizh@<  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； Y}'8`.  
y;0k |C
 
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； HwE1cOT  
w"-'  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； /7EeM{,~  
V}leEf2'  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 Kp_L\'.I5$  
.EOHkhn  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 oD5VE  

Yl65|=ne  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 9.bMA<X  
p1dqDgF*  
2r+@s
g  
!&~8j7{  
补充说明： PI"&-lXI-m  
bLx70 $  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 $Cr? }'a  
x;RjLI4h  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 # ;,b4O7@  
b";w\H  
b"Hg4i)  
8G?{S.%.  
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_7SOl.5ZE  
ojO<sT:by  
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EP#3+BsH  
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![os5H.b#q  
x|l[fdm5  
/jih;J|  
Y5fwmH,a-  
$L>tV='  
oDul ?%  
XA}!  
G"0YCi#I|  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS zN JK+_O=  
[;II2[5 ,  
色谱条件： 9mkt.>$  
qsX
K4`  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm m\|I.BUG  
A-r-^S0\  
进样口：250℃，不分流进样 |lAu6d !  
TTpK8cC  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） ]N}80*Rl  
%CJgJ,p
k>  
进样量：1μL *@|d7aiO  
ZP5.?A-=C  
流速：1 mL/min 5$0@f`sj  
k!Nl#.j  
f.cIhZF  
6 ?FF!x  
质谱条件： #`)zD"CO  
z8FeL5.(  
接口温度：280℃ 2i`N26On  
z(L
\I  
电离方式：EI !fUrDOM0E  
R4v)}`x  
电离能量：70eV T<kyxbjR  
?XO$9J  
溶剂延迟：7min fM,U|  
?LAKH$t  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 QWG?^T fi  
pn?c6KvO  
f@lRa>Z(Fm  
NY(c4fzl  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

!Ziq^o.  
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