[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： AZy~Q9Kc  

zh^jWu  
HTUYvU*-  
JMirz~%ib  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） kj{rk^x  
7O8V1Tt  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 cXb @H#  
nE]~E xr  
流  速：1.0 mL/min z"6ZDC6
 
z
-KrQx2  
波  长：242 nm ( }]37  
O+G~Qp0b>  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） r#_7]_
3  
-yX

.Jv  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 M&uzOK+  
KWFyw>*)  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） $.oOG"u0]  
lZ}izl  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A xK$}QZ)  
>$2E1HW.  
柱  温：30℃ 9aTL22U?  
 qovQ9O  
N1PECLS?  
a*V9_Px$&  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） V?=TVI*k  
DYX-5~;!  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ?RDO] I>  
.%_)*NUZ  
附件二 9x(}F<L  
/M:H9Z8!  
h77IWo6%  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS @YCv  
i-,'.w  
色谱条件： h`lmC]X_  
:Dayv6g  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm C%]."R cMC  
Q3,=~}ZNK  
进样口：250℃，不分流进样 {
S*!B  
6|^0_6_  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） q`[K3p   
r4
?b0&Xq  
进样量：1μL )\0q_a  
b_=8!Q.:  
流速：1 mL/min Fu%X  
.T$D^?G!D  
质谱条件： > :Ze4}(  
JKy#j g:#  
接口温度：280℃ 6IP$n($2  
`(DJs-xD  
电离方式：EI NR4Jn ?l{  
`G?qY8  
电离能量：70eV w!`Umll2  
bRPO:lAy  
溶剂延迟：7min 1b3(  
-@M3Dwsi3  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 [w+Q^\%bN  
hz\WZ^  

 \[#t<dD   序号 6I|A-h	gyu6YD8L   保留时间/min }1QF+Cf	G 7-!`-Nk   中文名称 usOx=^?=	'fY9a(Xt.   英文缩写 nP A@h	^M[P-#X_   SIM离子 keCRvlZ4
(lWq[0^N   1 *%A}x 	jv&+<j`r   8.265 ^^}Hs-{T	3-x%wD .   邻苯二甲酸二甲酯 r@$ w*%	IZNOW X|Z;   DMP >K:u?YD[	LmLGki$w   163、77 @Icq1zb] y
EzT`,#b   2 ]U_ ec*a	a!,r46>$H   9.135 !I8f#'p	.<&s%{EW   邻苯二甲酸二乙酯 r>n" 51*	sYn[uPefj   DEP gv.6h{Ut	IVjU`ij   149、177 YT-=;uK^S
";NRzY   3 ?6N3tk-2	-_0?_Cb   10.888 ocQWQ 	(K{ 5fC   邻苯二甲酸二异丁酯 4<S'	A o/vp-e   DIBP -4 Ux,9 &	E`;;&V q-   149、223 |%7cdMC
pV\YG B+   4 x4kWLy7Sz	h0|}TV^UJ   11.637 ]N)DS+V/	t;q7t!sC]   邻苯二甲酸二丁酯 v! hY	ocRdbmS   DBP GHc/Zc"iX	Qst$S}n   149、223 Qs 2.ef?
FiAY\4   5 ,XKCz ]8V	_k66Mkd#b   11.979 1+kE!2b;b	v({N:ya   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 HM[klH]s=	<O~WB   DMEP s<QkDERMX	P1>AOH2yG   59、149、193 PA;6$vqX
_s.;eHp,   6 QfjN"25_	/s:fW+C   12.72 ,YYVj{~2	J%C#V}z7E   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 Ucw yxXI	[/M^[p   BMPP | tQ iFC	>x1p%^cA;=   149、251 ^ZD BO/
">81J5qgd   7 TJ8E"t*)	oPKr* `'   13.044 D#A~Nbc	Scm36sT{   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 -D^A:}$	^i)hm   DEEP nwt C:*}	hG~reVNf   45、72 DmVP
J~B 7PW   8 iJxQB\x	6C4'BCYW(   13.41 j;_c+w!P	9~rUkHD   邻苯二甲酸二戊酯 ./j, Z$|	:4) Qt   DPP \k`n[{	UX<Qcjm$e   149、237 H +}"q $
!{n<K:x1   9 9jp:k><\(c	9%ii '{   15.552 b6t}{_7	N$Y" c*   邻苯二甲酸二己酯 HIGq%m=-x	vQF vtwd   DHXP >U1R.B7f	1[*U YcD   104、149、76 %8a C1x
&`Y!;@K9W#   10 y5= `ap	W$JebW<z(   15.694 .*=]gZ$IE	%zC[KE*~   邻苯二甲酸丁基苄基酯 JXiZB 8}	F}J-gZl   BBP \u` )kJ5o1	IC/(R! Crj   149、91 z;]CmR@Ki
fLN!EDq   11 ir>]r<Zl	~KjJ\b)R   17.153 R U"/2i	ZU'!iU|8   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 =?@Q-(bp	uPyVF-i   DBEP ,+/zH'U}	F%.xuL W   149、223 0LVE@qEL
v#w_eqg   12 )qM|3],	sOC&Q&eg   17.81 n.$(}A	V/y=6wUiSl   邻苯二甲酸二环己酯 &4kM8 Qh	+WF.wP?y   DCHP c4|so= 	XZO<dh ZX:   149、167 5Rs?CVVb
oNSz&)LP   13 A_Gp&acs$	6QptKXu7   18.056 2$Y3[$	1 '%-y   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 m-#d8sD2C	C$0ITw   DEHP {kv 4g \a;	:4b- sg#   149、167 A'w2GC{.
ZW`HDrP`   14 mRNHq3	!G@V<'F   20.444 WIhIEU7/	4" rb&$E    邻苯二甲酸二正辛酯 fLf#2EA	R|d^M&K,   DNOP mCZF5r	mRix0XBI~   149、279 o)$Q]N##
Es ZnGuY   15 %<bG%V(	,sQ0atk7ma   22.98 #xJGuYdv	W@uH!n>k   邻苯二甲酸二壬酯 ;JD3tM<	\i;~~;D   DNP yPxG`w'	SYW=L   57、149、71 D``NQ`>A

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 PCES&|*rf  
ZF`ckWT:-N  
附件三 !~RD>N&n  
2n@"|\uHD  
_Q7)FK  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 
ve>8vw2  
uW[<?sFG  
2.|
Y  
2;q6~Y,  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 b)df V=  
j\W+wnAgk  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 4u /?..L.  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% `]fY9ZDKs  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% Kyv$yf9  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% /423!g0 Q  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% V{(ve#y7`{  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% hLBX,r)u  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% 0C0iAp  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% k8w8I$QEM  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% l'$AmuGj  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% B:Msn)C~  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% \<V{6#Q=  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% 3vmZB2QG  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% '|Cs !Zl  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% U JY`P4(  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% Nqy',N  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% C S+6!F]  
oE)tK1>;H  
vlx wt~  
   F5:4 B]ZF  
EzwYqw  
USJ4qv+-  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 'GS1"rkW<5  
K4snpuhC  
C KBLM2D  
kfM}j
  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 L*Xn!d%  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% w[UPoG #Uh  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% _LxV)   
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% WQ|d;[E  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% ]nEN3RJ  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% fZ 17  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% --dGN.*xb4  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% &:nWZ!D  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% \b1I<4(  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% f)vD2_E  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% ^{zwIH2I]  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% +[zrU`!@  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94%  / e!/  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% vpMNulXb,  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% w-HgC  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% U-Fr[1I6p  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 dY
r#  
3:=XU9p)x  
+d'h20  
t-E'foYfr`  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 ~CM{?{z;  
9)4N2=  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 _k j51=  

/?_{DMt  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 @
pG\5Jnf  
3\'.1p  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 5`z{A  
x]
{h$yI  
B2,! 0Re  
U2Ur N?T  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 WrD20Q$9Q  
cAiIbh>c  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， gVI*`$  
]T*{M  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 Gpgi@ Uf  
7'&Xg_  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 4bJ3uIP#  
ZRX>SyM
 
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 f?{Y<M~]  
fx}R7GN2  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 JRo{z{!O6  
kB8
l`| I  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 2?"9NQvz  
I#,,h4C  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 fkI< RgM  

9FP6Z[4  
GLcf'$l  
]\v'1m"  
!?DPI)  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： 38L8AJqD  
U-QK   
H~i+:X=I  
SuB;Nb7r`  
1、样品提取方法： y"#o9"&>&  
94=Wy -  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 ?SK
1*; i  
J/ >Y mi,  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 "a6[Fq
Ts  
]OL O~2
j  
ts`c_hH,1'  
)s5Q4m !  
2、固相萃取方法： KhIg  
wwE`YY  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： X,y0J  
62TWqQ!9d  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； ]&w8"q  
h}r.(MVt  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； }G}2Y (  
J:Lw
O  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； D]X&Va  
@c,Qj$\1  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 7.U CX"  
6?8x[l*5M  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 1?+%*uoPX  
Tk1U  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 bz$)@gLc  
~Psv[b=]  
wX?<o  
!.\-l2f  
补充说明： ]CLt Km  
R8"qDj  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 d4(!9O.\  
CEOD$nYc  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 22`N(_  
(A<'{J#5,  
 8AX+s\N  
!`UHr]HJ  
Xwer QwO=  
aC
9PlKI  
rEWPVT  
!Eof7LUE  
?n]e5R(cj  
{1jywb }  
^KK9T5H  
 GNv5yWQ@  
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nX+*L}d/  
e>oE{_e  
N$jI&SI?}  
TF@HwF"#  
&M," %w!  
K7x,>  
cZ" Ut  
\E'Nk$V3  
lRn6Zh  
dwc$?Bg,5  
,x+_/kqx  
_+,2b:D:  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS OpwZTy}1}  
O=1 uF  
色谱条件： }9=\#Le~\  
(8s]2\/Ar  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm 4\q7.X+^  
0EM`,?i .Q  
进样口：250℃，不分流进样 jlER_I]  
vi6EI wZG  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 2 G_*Pqc  
zQ {g~x  
进样量：1μL Be2@9  
Z`"UT#^SI  
流速：1 mL/min Fm-W@  
 z$-/yT"M  
ok'0Byo  
> Q@ *o  
质谱条件： ;lX:EU  
Xk]5*C]6<  
接口温度：280℃ z}C#+VhQ`  
AXPUJ?V  
电离方式：EI ADv a@P  
6{lWUr  
电离能量：70eV AV d  
tO[+O=d  
溶剂延迟：7min U%k e5uwP  
f!LZT!y  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 AF3t#)q  
CdaB.xk  
o=`
9JKB~  
&-b=gnT   

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

ycE<7W  
6op\g].P  
CqX%V":2  
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