[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一：
sDL@e33Yb  
mojD  
c%%r  
?9hw]Q6r}  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） /*\pm!]._^  
6UOV,`:m+  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 ~=qJSb  
+Gv{Apd"  
流  速：1.0 mL/min fZ!fwg$  
)2t!= ua  
波  长：242 nm Ln/6]CMl  
2K?~)q&t*  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） C%P)_)--V  
OL+dx`Y  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 ;4XvlcGo  
=*EIe z*.x  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） #D8Z~U,-  
`CCuwe<v  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A eeI aH >  
mEi+Tj zp  
柱  温：30℃ 1 o<l;:  
~AbnksR  
a& >(*PQ  
OO%<~H  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） !N5+.E0j  
Uh.XL=wY  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 emZ^d/A  
L #'N  
附件二 qGndh  
m5KB#\  
RG(m:N  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS  ESOuDD2<  
$YDZtS&h  
色谱条件： `?{Hs+4P5  
oo\0X  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ]a% *$TF  
<}pwFl8C)  
进样口：250℃，不分流进样 W(*:8}m,p  
')#E,Y%Hq  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） G'XlsyaWrb  
v _B
u  
进样量：1μL D={|&:`L e  
zypZ3g{vz  
流速：1 mL/min -
tT{h4  
JJ56d)37.  
质谱条件： !B?/6XRUx  
sSOI5W3A  
接口温度：280℃ r&"}zyL  
H;,cUb  
电离方式：EI +8
[h&  
 qB@]$  
电离能量：70eV HhNH"b&  
E?z 3&C  
溶剂延迟：7min EBw}/y{Kt  
8NeP7.U<w  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 \ ;Hj,z\  
OdRXNk:k-j  

@Qruc\_   序号 X a<siA{	+ls *04   保留时间/min &[S)zR=?	I"sKlMD   中文名称 F8b*Mt}p	f (D?g   英文缩写 t47 f$gq	#:' P3)&   SIM离子 s_`wLQ7e
*XtZ;os]   1 IeN!nK-	zb9 d{e   8.265 Zpu>T2Tp	dqF--)Nb   邻苯二甲酸二甲酯 <YJU?G:@	lZn <v'y   DMP ;PS[VdV	?`FI!3j   163、77 (''`Ce
IK%j+UB   2 (5G^"Srw	;AG5WPI   9.135 evszfCH'J	O 6A:0yM4   邻苯二甲酸二乙酯 y@_4OkR@	'iL['4~.   DEP }"xC1<]	@+xkd(RfN   149、177 #j;&g1
X8*q[@$   3 =<33( 	`9$?g| rB   10.888 ulVHsWg	qe\j$Cjy   邻苯二甲酸二异丁酯 ^s24f?3	h! )(R<   DIBP I98wMV8	u,'c:RMV   149、223 Vxk0oIk`
1bvL   4 %`gqV9a	7G PBn}{W   11.637 ,,,5pCi\	c{&sf y   邻苯二甲酸二丁酯 U8.DPRa	."=Bx2   DBP EI/_=.d	WlG/7$   149、223 TrHBbyqk
Na[bCt   5 rsiG]o=8	v`nodI   11.979 PBkKn3P3	Y$%Ze]~   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 BcA:M\dK%	3O$Q>.0w/   DMEP ].`i`.T	T2^@x9   59、149、193 6(X(f;MEl
q[**i[+%   6 x!gu&AA< *	~eE2!/%9   12.72 *G 2p;n=2	=d&   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 ocGqXDg3	I@7^H48\   BMPP oB#KR1 >%7	PzNk:O   149、251 Gpo(Zf?
wHAoO#`wn5   7 &0+;E-_	o.*8$$   13.044 OpW4@le_r	bb}|"m.   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 z~# .Ey	\U\ W Q   DEEP h2QoBGL5	iOYC1QFi?   45、72 N\1 EWi
Y`eU WCD   8 W|XW2`3p	P-[6'mw`   13.41 G6]W'Kk	c5Fl:=h   邻苯二甲酸二戊酯 'M8wjU	}TfZ7~o[   DPP 4BF \-lq~	4}-{sS}MP   149、237 <vS3[(
+OEqDXR+_   9 X^Dklqqy	AIN Fv;   15.552 <yt|!p-tS	<yNu/B.M   邻苯二甲酸二己酯 MuI>ZoNF	OQ*BPmS-    DHXP ,/%@:Fh4	NQ&\t[R[   104、149、76 Gn?NY}.S
AT{rg/oSf   10 _ZMAlC*$G	#OMFv.   15.694 'r0kX||	|$:y8H'J   邻苯二甲酸丁基苄基酯 /}kG$~	gfr+`4H>v   BBP {9 .sW/	d8C44q+ds   149、91 G2y `yg
*}h#'+   11 % |^V)	nRHxbE}::   17.153 7.y35y	`i5\(cdl   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 M/a40uK	<ebC]2j8cK   DBEP ,^1B"#0{C<	1:;S6 {oQ   149、223 j"r7M|Z+V
:|a$[g5   12 {!&^VXZIT	e'|IRhr   17.81 L\zyBfK}	y>>)Yo&|   邻苯二甲酸二环己酯 tGJJ|mle>	_0|@B8!J?   DCHP ]E$bK	k$|g) [RE   149、167 w<u@L
{>Hn:jW<.   13 R|92T*h	5+2qx)FZ   18.056 #^tnRfS"	?{P$|:ha   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 {55f{5y3 c	l.(|&U~   DEHP FNs$k=*8	%)Z,?DzZ   149、167 bYmk5fpRG
Yr\quinLL   14 b`JS&E	lbGPy'h<rt   20.444 I Bko"|e@	$$SJLV    邻苯二甲酸二正辛酯 4TyzD%pOw	?B@3A) a   DNOP DliDBArxZ	:S}ZF$ $j%   149、279 e&E7_
Ups0Xg&{   15 rCsC}2O	)T?BO   22.98 &/:c?F?l	`Y+R9bd   邻苯二甲酸二壬酯 q(WGvl^r	$=#Lf[|f=   DNP qx9;"Ut	O_GHvLO=   57、149、71 8kr$w$=q

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 L<[%tvV  
8;"HM5+  
附件三 ) S,f I  
GVld]ioycG  
nIf~ds&TT  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 dd:vQOF;  
^!*nhs%  
7,"y!\  
h8hyQd$!  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 ^50\c$  
$nr=4'yZ  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 2U @:.S'K  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% >9<YQ(  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% 6 l7iX]  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% @ )Nw>/;o  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% vOo-
jUKs  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% %\T#Ik~3  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% ^J'O8G$  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% VI]~uTV  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% = OzpI  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% {9vMc  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% `6<Qb=  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% F },kfCFF  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% M[P1hFuna  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% ssAGWP  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% f.0HIc  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% Tnas$=J  
)}u?ftu\  
1n[wk'}qf4  
   WW-}c;cnK  
c3WF!~1r  
E85TCS1  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 &~'i,v|E  
l
T~WP)  
KN&|&51p}  
aSI%!Vg.  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 R G~GVf  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% v^ v \6uEP  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% )u0/s'  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% yqR]9"a  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% wOLV?Vk  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% u|k_OUTq  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% :B\$7+$v  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% h iK}&  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% ux,eY  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% \tY7Ga%c  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% l}k'ZX4  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% ):A.A,skf  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% `cIeqp  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% =k ; X}/  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% Ps;4]=c  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27%  *I}_g4  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 ?A 5;"  
m;u:_4  
(abtCuZ8z  
,Aq |IH3j  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 qK&h$;~*y  
%D+NrL(  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 f5#VU7=1F2  
R^6^{q  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 *Di ;Gf@  
xx[l #+:c  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 _RG2I)P  
?qczMck_  
"'U]4Z%q!  
7iH%1f  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 =b#,OXQ  
V%n7h&\%  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， M7\Ki Qd  
-!:h]
 
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 DVjsz  
Y j*Y*LB~  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 5t[7taLX\  
fZrB!\Q  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 .7MLgC;  
!i?aRI/6  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 17B `  
[fr!J?/@  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 h v/+  
=FXq=x%9+  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 rJ fO/WK  

GF[onfQY7  
i
bo{!>m  
9M{z@H/  
|c,,*^  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： &' E(
 
jt9fcw  
;G!JKg  
rbfP6t:c3  
1、样品提取方法： wJ 0KI[p(S  
-'ff0l  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 BWRM gN'.  
GZ xG!r-  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 VHwAO:+-  
PL*Mz(&bf  
/Z':wu\  
AunX[X9  
2、固相萃取方法： >J4Tk1//b  
nj
hDr
wN  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： q6R``  
H]i.\ 2z  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； 'MF|(`  
`;X~$uS  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； :9nqQJ+~  
'+%<\.$  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； - >H4!FS  
F},#%_4  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 $G\IzK  
!PAuMj)P  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 8c h^e[U`  
6}q
8%[l|  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 1o Z!Up0  
?QbxC,& i  
`]T#uP<u  
h?D>Dfeg%  
补充说明： y;$ !J  
Ra!Br6  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 0]~'}  
Szb#:C  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 DI)!x {"  
pWm==Ds|  
JNx;/6'd,  
YqEB%Y~N+  
-ld1o+'`v!  
VJoobu1h  
u|T
g*B  

~2L]K4Z^  
gY/p\kwsj  
(kFg2kG  
U^~jB= =]  
}}q_QD_  
d>-k-X-[  
%kXg|9Bx!  
/s|4aro  
2J1YrHj3  
;%V)lP"o  
tO8<N'TD  
En:/{~9{F  
m6iQB\ \  
J{qpGRQNa  
E(/M?>t-  
5* 3T+OK  
"4[8pZO/  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS )D>= \Me  
CTh!|mG  
色谱条件： 9f7T.}HM  
MzX4/*ba  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm vAH`tPi>  
#s]'2O  
进样口：250℃，不分流进样 Ubf@"B  
<WCTJ!Z  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） @?YO_</  
Y24H` s1u/  
进样量：1μL 9zs!rlzQ  
1Bh d-  
流速：1 mL/min
0kOl,%Ey  
~]LkQQ'  
{Xw6p  
H\!p%Y  
质谱条件： h qT6]*  
>uR0Xs;V  
接口温度：280℃ BfOQ/k))  
CYFi_6MFl  
电离方式：EI q"C(`S.@  
@B#\3WN
t  
电离能量：70eV K0xka[x=(  
*}<Uh'?  
溶剂延迟：7min ]qpLaBD  
56`Tna,t  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 lC8Z@wkjO  
p'f8?jt  
3Z%~WE;I  
iKM!>Fi
 

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

QCAoL.v  
d+o.J",E  
Rl{e<>O\^  
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