[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： 9PAp*`J@kr  
Exr 7vL  
x_K%  
f<wgZM  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） &; \v_5N6  
5[_8N{QC;  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 |BW,pT  
"tM/`:Qp  
流  速：1.0 mL/min ydQ
S"]\g  
sd53 _sV  
波  长：242 nm >U?Bka!  
5H+k_U  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） s~ A8/YoU}  
:N*T2mP  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 yipD5,TC  
f)Q]{cb6  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） Hs=N0Sk]j  
"R@N|Qx'  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A $?AA"Nz  
ROS"V V<  
柱  温：30℃ Wx$q: $h@q  
%aBJ+V F  
zK4 8vo  
,M.!z@  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） RS `9?c:  
68<Z\WP  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 )9L pX  
nIQ&gbfO  
附件二 _b_?9b-)D  
6w"( y~c1  
p^igscPF6  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS r<X4ER  
Np<&#s[dQ  
色谱条件： ]TBtLU3  
%8bzs?QI  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm w;c#drY7S  
,<$YVXe/  
进样口：250℃，不分流进样 7"F|6JP"$c  
&{zwM |Q@?  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） =_8 UZk.  
_{e&@d  
进样量：1μL jby~AJf%  
TBZ-17+  
流速：1 mL/min Y
H[XRUa  
atY*8I|  
质谱条件： i2$*}Cu   
96c"I;\GXX  
接口温度：280℃ NEA_Plt  
R N@^j  
电离方式：EI *4t-e0]j@w  
h40'@u^W  
电离能量：70eV wf?u(3
/%  
wUoiXi09  
溶剂延迟：7min ;o[rQ6+  
%zzYleJ!]  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 ~.Cv DJy  
&vkjmiAS  

)JhT1j Qc   序号 LL(|$}yW	A&zS'toU   保留时间/min rrqQCn9	8 #}D :(   中文名称 bsS:"/?>	+f|BiW   英文缩写 M.q=p[	 :A1:   SIM离子 `aC){& AP(
u #w29Pm   1 'Ft0Ry<OL	-i yyn^|   8.265 PYbVy<xc	Y2o?gug   邻苯二甲酸二甲酯 MjlP+; !	3)\8%Ox   DMP &boOtl^	\"X!2   163、77 g!rQ4#4
|&RU/a   2 ILGMMA_2	0*f)=Q'   9.135 MF5[lK9e	17%Mw@+   邻苯二甲酸二乙酯 F(>Np2oi6	RoPRQCE   DEP _852H$H\	5IE#\FITO|   149、177 EJMM9(DQ7
-| $@- fY;   3 >qnko9V	Z^3 rLCa   10.888 +$ 'Zf0U	gb[5&>(#   邻苯二甲酸二异丁酯 %O|iE M	9+Np4i@   DIBP }T(D7|^R	dm\F   149、223 ?1~`*LE
0yk]o5a++   4 d[iQ`YW5	D}-/c"':}   11.637 2=*H 8'k	Z%gh3   邻苯二甲酸二丁酯 *IB4[6	dn&s*   DBP -M\<nx	><4< yj1   149、223 pJ>P[
VMZMG$C   5 W"scV@HKu	ibcRU y0%   11.979 10Q ]67	x>K Or,f   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 %UrueMEO	\ #F   DMEP '@v\{ l	VD*6g%p   59、149、193 h,:m~0gmj
K-)] 1BG   6 FjH v 	au(D66VO   12.72 l'rja.\	/KaZH R.   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 9.M4o[	>h9IM$2   BMPP _yx>TE2e	|3b^~?S   149、251 i^&~?2
,8uqdk-D   7 %wg-=;d4	\:'/'^=#|   13.044 {<p?2E	x+:UN' "r   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 XEp{VC@=	%XDc,AR[   DEEP #Y`~(K47	~$cV:O7   45、72 "Yv_B3p 
3 3x{CY15   8 [T d4K.c	{SPq$B_VR   13.41 IB"w&sBy	. B9iLI   邻苯二甲酸二戊酯 ]L $\ #	AaOuL,l   DPP *8Xh(` Mj7	I\{ 1u   149、237 @7]yl&LZ
Gbr=+AT   9 C.yQ=\U2	ColV8oVnU   15.552 jh%Eq+#S	nbD*x|   邻苯二甲酸二己酯 4{U T!WIi	dO<ERY   DHXP w!-gJmX>	pYZmz   104、149、76 -hGk?_Nqa/
/tx]5`#@7]   10 \O3m9,a 	ifMRryN4   15.694 BQE|8g'&T	*eTqVG.   邻苯二甲酸丁基苄基酯 JW83Tp8[8	)Pa'UGY   BBP FF`T\&u	,*TmIPNK   149、91 L2[($ l
WtsFz*`)y   11 (&Kk7<#`	+<Nn~1   17.153 9IdA%RM~mH	T@H^BGs   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 aB2FC$z	V# }!-Xj   DBEP x}wG: K	htO+z7   149、223 /Y:sLGQLD
kf\PioD8   12 .Bl\Z	S1T"Z{$   17.81 wyH[x!QX	)J o:pkM   邻苯二甲酸二环己酯 rK8lBy:<	rm'SOJVA   DCHP ydEoC$?0	}`@vF|2L   149、167 MVpGWTH@F
pHGYQ;:L   13 mX"oW_EK	8L=HW G!1   18.056 o+iiSTJEe	LG9+GszX 2   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 *}qWj_ RT	)bL'[h   DEHP GRIti9GD	H\"sgoJ   149、167 Ux!p8
%bn jgy   14 8mrUotjS	y3Q sv   20.444 J 7$5s	./Zk`-OBT   邻苯二甲酸二正辛酯 U[-o> W#	q'F+OQb1   DNOP #$07:UJ	e\l7Iu   149、279 `wEb<H
H[$ "+&q   15 =z69e%.	U(g:zae   22.98 :U%W% 	s};{ZAtE   邻苯二甲酸二壬酯 }2.`N%[	S`0(*A[W*   DNP $|@@Qk/T	'9J/T57]e   57、149、71 }rw 8PZ9

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 7HYwLG:\~  
b@hqz!)l`  
附件三 ~((O8@ }J  
BnF^u5kv%  
U8$27jq  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 c'\dFb9a  
J\=*#*rJ1  
)MT}+ai  
5~DJWi,  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 4
s9LB  
]7c=PC  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 gf\oC> N  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% 6j|{`Zd)G  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% 2y1Sne=<Kb  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% ,|/f`Pl  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% Q\0'lQJdy  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% t sRdvFFq  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% ?+8\.a!  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% `uTmw^pZX  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% +LJ73 !  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% <%mRSv  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% RPbZ(.  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% xD=csJ'(  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% JK ]PRDyD  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% /g.U&oI]D  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% K@ %].:  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% ^=*;X;7  
@PIp*[7oC  
EhBKj |y  
   $Y gue5{c  
x|29L7i  
(QiAisE  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 bs1Rvx1:J%  
^/k*h J{  
.o}v#W+st  
W(/h Vt  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 x$(f7?s] 1  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% EB|}fz  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% PmM3]xVzd  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% 3T0"" !Q  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% {+b7sA3
 
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% m~ee/&T  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% J9S>yLQK  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% )}O8?d`  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% g< .qUBPKX  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% %vi83%$'4  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% lU8Hd|@-  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% ;i+#fQO7Q  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% \xoP)Ub>  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% z*
)T%p  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% "C`Ub  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% 7Hu3>4<  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 #>a\>iKQ2q  
i7CX65&b  
s-NX 
o  
+i6GHBn~J  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 s2a{>II6  
&.F4b~A7  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 p .%]Q*8  
p0]=QH  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 Q@=Q0  
0RzEY!9g+  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 !OZy7  
IM*y|UHt  
6dHOf,zjm  
R- X5K-  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 P|`8}|}a  
@b\$yB@z  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， >[f?vrz  
H;is  /  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 I]|Pq  
&/Z /Y ]  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 `
b&%Hm  
VO5#
Qgen  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 Mc lkEfn  
{L971W_L  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 Xfc-UP|}  
j a[Et/r  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 PN%zIk bo  
@)+ AaC#-  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 *tFHM &a  

\/Ij7nD`l%  
cj(X
2L  
9)yG.9d1  
;1LG&h,K  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： :z~!p~  
-fux2?8M  
dB`b9)Tk0z  
98<zCSe\]  
1、样品提取方法： %\yK5V5  
W#45a.v  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 ~_}4jnC  
^I./L)0=}  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 ' PL_~  
t~~r-V":  
&z0iLa4q)  
/'NUZ9  
2、固相萃取方法： *cy.*@d  
dAwS<5!  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： U;>B7X;`E4  
;<VR2U`  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； /W``LK>;?  
?P
YNE  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； XNK 43fkB.  
{!g?d<*  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； qY# m*R  
vFR 1UP
F  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 i~(#S8U4d  
`$f\ 
%  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 5 7'q;I  
;;D% l^m+  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 rK*hTjVn  
%+ /f'6
kR  
DIL)7K4  
ngtuYASc  
补充说明： UeFtzty,a  
&8R-C[A  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 JkRGtYq  
hnH)Jy;>  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 /5Gnb.zN)  
[N' r3  
y}3 `~a
 
<FMuWHY  
Yb,G^+;  
+]aD^N9['  
P}w^9=;S  
6%Cna0x:&  
RXCygPT   
7z0;FW3>9  
z.Ve#~\  
Y6[]wUJ  
DVeF(Y3&  
=qVAvo'  
Z:}2F^6  
]"7El;2z  
:W1tIB  
~"hAb2  
u]++&~i  
aO;Q%]VL'  
%.r5E2'  
=V4_DJ(&  
RdpQJ)3F  
Ij,?G*  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ;z=C^'  
R;I-IZS:  
色谱条件： $y |6<  
2QQYXJ^  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm Vu8-Cy>Q?  
5v03<m0`y  
进样口：250℃，不分流进样 )^a#Xn3z  
~$`YzK^*X  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） T<~[vjA  
YSUH*i/%  
进样量：1μL NNrZb?  
m&vYZ3vK[  
流速：1 mL/min LfSUY  
\:^n-D*fX  
_ r)hr7
 
?ew]i'9(  
质谱条件：  x a,LV  
|?b"my$g$  
接口温度：280℃ K&oO+G^f  
aQuy*\$$  
电离方式：EI mT$tAwzTC{  
&BR?;LD  
电离能量：70eV mTbPzZ4  
+N!{(R:"v}  
溶剂延迟：7min +u.L6GcB  
0w&1wee(  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 +t6m>IBu  
<C xet~x  
]d(}b>gR~(  
2%H(a)  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

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