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奶粉中双氰胺的检测方法(HPLC-UV和HPLC-MS/MS法) [复制链接]

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离线jlhaina
 

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只看楼主 倒序阅读 使用道具 楼主  发表于: 2023-07-15
DiB~Ovh|  
北京时间1月25日凌晨消息,新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量,但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。 }+L!r53g6  
本文采用Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil® HILIC液相色谱柱,建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。 P}%0YJ$6  
*aXZON ym  
1 实验部分 eB:OvOol*^  
C*}TY)8  
1.1 仪器、试剂与材料 P&/PCSf  
高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。 Lc|5&<8ZG1  
双氰胺标准品(CAS: 461-58-5;FW=84.08),Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管,Venusil® HILIC液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,实验用水为超纯水。
3U&Qo nCV  
1.2 实验步骤 4]N`pD5  
提取、净化:称取1g试样于50mL具塞离心管中,加入2mL水溶解后,加乙腈定容至10mL,超声10min,8000r/min离心5min,取2mL上清液加入Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料,涡旋0.5min,8000r/min离心5min,取上清液过0.22µm滤膜,待测。 A# W%ud4  
1.3 实验条件 wSp1ChS k  
1.3.1高效液相色谱法(HPLC法): E'=~< &  
色谱柱:Venusil® HILIC(5μm,100Å,4.6*250mm); 4WnB{9 i`I  
流动相: 10mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10: 90; 4 uv'l3  
波长:220nm;进样量:10µl;柱温:30℃;流速:1mL/min。 br"p D -}  
1.3.2 LC-MS/MS法: Tx35~Z`0  
(1)色谱条件: or/Y"\-!  
色谱柱:Venusil® HILIC( 5μm,100Å,2.1*150mm); rr2'bf<]  
流动相: 0.5mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10:90;进样量:10µL;柱温:30℃;流速:0.2 mL/min。 65RWaz;|  
(2)质谱条件: -p`hevRr  
质谱仪:API 4000+;离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测;CAD:8.00;CUR:10.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;TEM:500.00。
表1双氰胺质谱信息
i% k`/X;  
药物名称监测离子对DPEPCECXP
双氰胺85.1/68.17110416
85.1/43.17110416
|_a E~_  
.l5y !?  
注:带“____”的监测离子对为定量离子对。
zt!mx{l'  
fR!'i):u  
2.结果与讨论 0R<@*  
L~Epd.,Dt  
2.1 高效液相色谱法: \?h +  
I-4csw<Qy  
2.1.1线性关系和检出限 }Gr5TDiV0\  
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液; +ww paR`  
分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为0.1µg/mL,0.5µg/mL,1.0µg/mL,2.0µg/mL,5.0µg/mL和10.0µg/mL的标准溶液,按照上述色谱条件,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表2:
表2 双氰胺线性方程和定量限(HPLC法)
名称保留时间线性方程相关系数最低定量限(S/N=10)
双氰胺4.92minY=116.44X+3.26990.99970.1µg/ml
P~iu|j  
,g@U *06  
2.1.2检测方法稳定性考察 #z-6mRB  
选用10.0µg/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表3:
表3 检测方法定性和定量稳定性考察考察(HPLC法)
标号保留时间/ min峰面积
14.9301061.7
24.9331072.2
34.9301064.4
44.9291079.7
54.9301067.3
64.9341073.6
RSD,%0.040.62
y _>HQs,:  
cIK-VmO  
2.1.3准确度和精密度 h" Yi'  
选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表4
表4 10µg/g添加回收实验结果(HPLC法)
平行1,%平行2,%平行3,%平均值,%RSD,%
98.688.489.892.35.99
NtkEb :  
=B4mi.;@i  
&9, 6<bToP  
2.2 LC-MS/MS fBS;~;l  
2.2.1线性关系和检出限 ;VeC(^-eh6  
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液。 [m?eSq6e2b  
分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为5ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和500ng/mL的标准溶液,按照上述液质方法,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见下表5:
表5 双氰胺线性方程和定量限(LC-MS/MS法)
名称保留时间线性方程相关系数最低定量限(S/N=10)
双氰胺3.15minY=8777.2X+7435.90.99935ng/mL
`n Y!nh6!  
2.2.2 检测方法稳定性考察 ]L^X}[SH  
选用50.0ng/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表6:
表6 检测方法定性和定量稳定性考察考察(LC-MS/MS法)
标号保留时间,min峰面积
13.29382950
23.30387950
33.25382840
43.31399820
53.30378580
63.30383810
RSD,%0.651.92
BOrfKtG\  
Ms=x~o'  
2.2.3准确度和精密度 R,x\VX!|  
选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液,双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化,故判断该方法无基质效应的影响。
表7 100ng/g添加回收实验结果
平行1平行2平行3平均值RSD
84.6%80.7%90.2%85.2%5.61%
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