bV~z}V& 北京时间1月25日凌晨消息,
新西兰牛奶中发现了
有害物质——
双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。虽然国际
标准未对
食品中的双氰胺限量,但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
<NVSF6` 本文采用Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil
® HILIC液相色谱柱,建立了
奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理
方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。
ap7ZT7KW c-dOb.v0 1 实验部分 Z^'i16 M
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yp 1.1 仪器、试剂与材料 3a_=e
B 高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。
<EHgPlQn 双氰胺标准品(CAS: 461-58-5;FW=84.08),Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管,Venusil
® HILIC液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,实验用水为超纯水。
X5V8w4NN 1.2 实验步骤 &YU;
K& 提取、净化:称取1g试样于50mL具塞离心管中,加入2mL水溶解后,加乙腈定容至10mL,超声10min,8000r/min离心5min,取2mL上清液加入Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料,涡旋0.5min,8000r/min离心5min,取上清液过0.22µm滤膜,待测。
{ !;I4W%! 1.3 实验条件 YH
5jvvOI 1.3.1高效液相色谱法(HPLC法): Vo@gxC, 色谱柱:Venusil
® HILIC(5μm,100Å,4.6*250mm);
i 1{Lx) 流动相: 10mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10: 90;
LMF@-j% 波长:220nm;进样量:10µl;柱温:30℃;流速:1mL/min。
:nYnTo` 1.3.2 LC-MS/MS法: AD** 4E
(1)色谱条件:
3kc.U 色谱柱:Venusil
® HILIC( 5μm,100Å,2.1*150mm);
zFn!>Tqe 流动相: 0.5mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10:90;进样量:10µL;柱温:30℃;流速:0.2 mL/min。
K
TQy pv (2)质谱条件:
)$.::[pNA 质谱仪:API 4000+;离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;
检测方式:多反应监测;CAD:8.00;CUR:10.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;TEM:500.00。
表1双氰胺质谱信息
D #`o wd
4]Z0; a___SYl
'K 注:带“____”的监测离子对为定量离子对。
~g6`Cp` ,k,RXgQ 2.结果与讨论 O@Ro_sPG( $CXMeY{tOo 2.1 高效液相色谱法: ]WO0v`xh lVw77bZ 2.1.1线性关系和检出限 C`++r> 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液;
,"@Tm01os 分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为0.1µg/mL,0.5µg/mL,1.0µg/mL,2.0µg/mL,5.0µg/mL和10.0µg/mL的标准溶液,按照上述色谱条件,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表2:
表2 双氰胺线性方程和定量限(HPLC法)
U)PN
Y |3a1hCxt 2.1.2检测方法稳定性考察 qId-v =L 选用10.0µg/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表3:
表3 检测方法定性和定量稳定性考察考察(HPLC法)
B*zR/?U^ (D?%(f 
2.1.3准确度和精密度 0c$0<2D% 选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表4
表4 10µg/g添加回收实验结果(HPLC法)
n0nvp@?7bJ YV6@SXy 8@}R_GZc 2.2 LC-MS/MS法 o
~_ wx 2.2.1线性关系和检出限 hZ#ydI| 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液。
)t$<FP 分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为5ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和500ng/mL的标准溶液,按照上述液质方法,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见下表5:
表5 双氰胺线性方程和定量限(LC-MS/MS法)
&sbKN[x M 2.2.2 检测方法稳定性考察 <3 b|Sk:T 选用50.0ng/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表6:
表6 检测方法定性和定量稳定性考察考察(LC-MS/MS法)
iEA$`LhO\A :75$e%'A 2.2.3准确度和精密度 DaA9fJ7a
选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液,双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化,故判断该方法无基质效应的影响。
表7 100ng/g添加回收实验结果