奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC-UV和HPLC-MS/MS法） [复制链接]

y`$qcEw  
北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。 GQ?FUFuIoW  
本文采用Cleanert<sup>®</sup> MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil<sup>®</sup> HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。 d~_5Jx  
a!6r&<s=E  
1 实验部分 @I
1*b>X~<  
KXx;~HtO  
1.1 仪器、试剂与材料 }8l+Jd3"  
高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。 K!(WcoA&2i  
双氰胺标准品（CAS： 461-58-5；FW=84.08），Cleanert<sup>®</sup> MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil<sup>®</sup> HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。 XFs7kTY  
1.2 实验步骤 (&)uWjq `  
提取、净化：称取1g试样于50mL具塞离心管中，加入2mL水溶解后，加乙腈定容至10mL，超声10min，8000r/min离心5min，取2mL上清液加入Cleanert^® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料，涡旋0.5min，8000r/min离心5min，取上清液过0.22µm滤膜，待测。 D`Vb3aNB=L  
1.3　实验条件 %r6_['T  
1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）： jQz^)8)B  
色谱柱：Venusil<sup>®</sup> HILIC（5μm，100Å，4.6*250mm）； :#sBNy  
流动相： 10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10: 90； tjV63`LD  
波长：220nm；进样量：10µl；柱温：30℃；流速：1mL/min。 &q4~WRnzJk  
1.3.2 LC-MS/MS法： HW_2!t_R  
（1）色谱条件： y#Nrq9r:  
色谱柱：Venusil^® HILIC（ 5μm，100Å，2.1*150mm）； }Dcpe M?  
流动相： 0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）：乙腈=10:90；进样量：10µL；柱温：30℃；流速：0.2 mL/min。 ^cW{%R>XY  
（2）质谱条件： N{RHbSa(  
质谱仪：API 4000+；离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；CAD：8.00；CUR：10.00；GS1：60.00；GS2：50.00；IS：5500.00；TEM：500.00。 tIBEja^l  

药物名称	监测离子对	DP	EP	CE	CXP
双氰胺	85.1/68.1	71	10	41	6
	85.1/43.1	71	10	41	6

t':*~b{V@7  
;$!0pxL)s  
e6jdSn  
T3)m{gv0`  
2.结果与讨论 |`wJ {-  
$1Z3yb^  
2.1 高效液相色谱法： XxB%  
:/Y4I)'  
2.1.1线性关系和检出限 }LIf]YK  
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液； I.6#>=  
分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为0.1µg/mL，0.5µg/mL，1.0µg/mL，2.0µg/mL，5.0µg/mL和10.0µg/mL的标准溶液，按照上述色谱条件，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表2：

名称	保留时间	线性方程	相关系数	最低定量限（S/N=10）
双氰胺	4.92min	Y=116.44X+3.2699	0.9997	0.1µg/ml

'
i/"D8  
CS"k0V44}  
2.1.2检测方法稳定性考察 y(K:,CI  
选用10.0µg/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表3：

标号	保留时间/ min	峰面积
1	4.930	1061.7
2	4.933	1072.2
3	4.930	1064.4
4	4.929	1079.7
5	4.930	1067.3
6	4.934	1073.6
RSD，%	0.04	0.62

P!~&Ei  
2.1.3准确度和精密度 &
19z|Id  
选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表4

平行1，%	平行2，%	平行3，%	平均值，%	RSD，%
98.6	88.4	89.8	92.3	5.99

^dhtc% W>  
7 Uu  
W9SEYkg  
2.2 LC-MS/MS法 zpxyX|  
2.2.1线性关系和检出限 *UG=dl#F#  
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，作为标准贮备液。 K)8 m?sf/  
分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL和500ng/mL的标准溶液，按照上述液质方法，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见下表5：

名称	保留时间	线性方程	相关系数	最低定量限（S/N=10）
双氰胺	3.15min	Y=8777.2X+7435.9	0.9993	5ng/mL

<_Po/a!c3  
2.2.2 检测方法稳定性考察 dNs<`2
m  
选用50.0ng/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表6：

标号	保留时间，min	峰面积
1	3.29	382950
2	3.30	387950
3	3.25	382840
4	3.31	399820
5	3.30	378580
6	3.30	383810
RSD，%	0.65	1.92

} xzb
g  
;V~~lcD&Y`  
2.2.3准确度和精密度 _{?/4ZhA\+  
选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液，双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化，故判断该方法无基质效应的影响。

平行1	平行2	平行3	平均值	RSD
84.6%	80.7%	90.2%	85.2%	5.61%