v0;dk( O -p^S 包括：
qA25P< 1. Venusil ASB-C18或ASB-C8色谱柱或XBP-C8色谱柱（4.6*250mm,5μm,150Å）任选1支
k>E/)9%ep2 2. 混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支/盒，3盒
/CbM-jf 以上2项均为科技部“十一五”国家支撑计划成果
9IacZ 3.
三聚氰胺标准品1瓶（250mg，≥99.5%）
6HpiG` 4. 真空固相萃取装置（12位）
sE^= ]N 5. 0.22μm，13mm Nylon针式过滤器过滤 200个/包
Of<Vr.m{R 6. 三聚氰胺
分析方法手册1份
}|c-i.0= 7. 庚烷磺酸钠（10g/瓶），高纯甲醇、乙睛
<*ME&c gh4 QKt{XB6Y * 试剂规格请以签订合同时为准，博纳艾杰尔科技拥有最终解释权。
)hfI,9I~ 1 固相萃取(SPE)柱的选择：
M,DwBEF? 三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子和反相两种吸附机理，并具有以下优点：
r +i=P_p 1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高
检测的灵敏度。
n55s7wzM 2) 批次重复性好。
G"*ch$: 3) 回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
iE"+-z\U 2 样品前处理步骤：
QG;V\2T2[ 2.1标准样品配制：
#pWeMt' 取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液，使用时，以合适溶液稀释至所要的浓度。
SbD B [O% 2.2提取：
A04E <nr 称取饲料/奶粉样品5g (或牛奶10mL)，加入50mL 1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2mL 2%乙酸铅溶液，超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中，8000rpm/min离心10min，取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX)，同时处理多个样品，需要用真空固相萃取装置（12位），可达到方便、快速、高通量分析样品的目的。
` it 2.3净化(PCX小柱，60mg/3mL) ：
! u=A9i! 1) 活化及平衡：3mL甲醇，3mL水
|j !U/n.%w 2) 上样：加入提取液3mL
7\EY&KI"0 3) 淋洗：3mL水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。
?;CMsO*q 4) 洗脱：5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。
I_iXu ;UX 5) 浓缩：50℃，氮气吹干，20%甲醇/水定容至1mL。
nb #)$
l lVo}D
FZ ^,6c9Dx y 2.4检测：HPLC-UV检测方法
)|E
617g Ks\\2$Cm7 三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照
美国食品药品监督管理局（
FDA）的三聚氰胺
检测方法和
中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法，采用艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列和Venusil XBP色谱柱，均能得到良好的结果，分析色谱图如下：1、 三聚氰胺的FDA检测方法
n>?eTlO3 色谱柱：Venusil ASB C8 4.6×250mm
m"RSDM!
缓冲液：10mM柠檬酸，10mM辛烷磺酸钠，调pH为3.0。
7s}E q~ 流动相：缓冲液：乙腈= 85：15
Q;y)6+VU4 进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10μL，
9UE)4*5 进样前用0.22μm针式过滤器过滤
4O:y
?D /e 流 速：1.0mL / min
]lZ g }7h 柱 温：40 ℃
Fu[< zA^ 波 长：240nm
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P#Z% 2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法
84A:Rd'k3) （1）色谱柱：Venusil ASB-C18 4.6×250mm
EC lx+tz;` 缓冲液：10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
$tB `dDj 流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15
\% |%C 进样量：样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL，进10uL
UM:]Qba In 进样前用 0.22μm针式过滤器过滤
vq :?a 流 速：1.0mL/min
/Csk"IfuO 柱 温：40℃
TW-^C ;
1 RVs!; 波 长：240nm
!3`X Gg （2）色谱柱：Venusil XBP-C8 4.6×250mm缓冲液：10mM柠檬酸，10mM庚烷磺酸钠
m2
[]`Ir^@ 流动相：缓冲液：乙腈=85：15进样量：样品用缓冲溶液溶解成约0.1mg/ml，进10μL
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S
2 7 进样前用0.22μm针式过滤器过滤流速：1.0mL/min
^~^=$ fz 柱温：20℃波长：240nm
uc aa; zj Rt＜10minLC-MS参考方法
Qt>Bvu Q 由于HPLC-UV方法中，流动相添加了离子对试剂，限制了液质联用方法的使用；但不用离子对试剂色谱方法，三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差，没有良好的保留与分离。源于此
问题，博纳艾杰尔科技公司自主开发了新的方法，采用博纳艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列亲水色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离，参考方法如下：
X 4\V4_ 缓冲液：10mM NH4AC流动相：缓冲液：ACN=95：5
kgd
dq 流 速：1.0mL/min进样量：先用70%ACN溶解成约1mg/mL，用ACN稀释成0.1mg/mL，进10μL
|h &
q 进样前用0.22μm针式过滤器过滤柱温：40℃
? (M$r\\ 波长：240nm
(_AU)
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