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食品中罗丹明B（玫瑰红）的现场快速检测及实验室检测方法 [复制链接]

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只看楼主倒序阅读使用道具楼主发表于: 2023-07-15

关键词：食品染料检测

1 实验材料
1.1 固相萃取柱：Cleanert AL-N，500mg/6ml

1.2 色谱柱：Venusil MP C18，4.6mm X 150mm（5μm）
2 现场快速检测

2.1 辣椒粉  取辣椒粉一小勺（约5g）放入小烧杯中，加入约40ml含20%丙酮的正己烷，摇动或搅拌2分钟，静置，待样品杯上方澄清后，慢慢倒入小柱中，下端接一废液杯，视颜色深浅倒入2-5ml，注意不要倒入太多，保证小柱的中下部仍为白色，此时，含罗丹明B的样品在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带，条带边缘清晰，粉红色随含量的增加而加深和加宽，不含罗丹明B的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的界面不清晰的宽带，然后用含20%丙酮的正己烷20ml慢慢倒入小柱，粉红色的条带不下移，但更清晰，其余的黄红色带下移，可大部分被洗脱出，即可判断为含罗丹明B的可疑样品。
2.2 辣椒油  取辣椒油一小勺（约2g）放入小烧杯中，加入约10ml正己烷，混匀。按2.1项操作。

2.3 判定  初步判断为含罗丹明B的可疑样品需送实验室中进行液相色谱确证检验。

3实验室验证方法

3.1．仪器
3.2．提取和纯化

3.2.1 辣椒粉：取辣椒粉1g，加入20ml含20%丙酮的正己烷，震摇10分钟，静置或过滤使分离出上层清液，残渣加入10ml含20%丙酮的正己烷重复提取一次，合并2次提取液，混匀，用滴管将上清液加入氧化铝小柱（1.1）中，视颜色深浅决定上柱量，保证上完样的小柱中下部仍为白色，含罗丹明B的样品提取液在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带，且粉红条带随含量的增加而加深和加宽，不含罗丹明B的样品提取液不会出现粉红色条带，只会出现黄红色的不清晰的宽带，用含20%丙酮的正己烷洗小柱，粉红色的条带不下移，但更清晰，其余的黄红色带下移可大部分被洗脱出，可判断为含罗丹明B的可疑样品，待洗柱的流出液无色时，滴入5-10ml甲醇，将罗丹明B色带洗下并收集，用甲醇定容后，注入高效液相色谱仪进行确认。

3.2.2．辣椒油：称取辣椒油1g，加入10ml含20%丙酮的正己烷，混合均匀后滴入氧化铝小柱（1.1）中，按照3.2.1项中“用滴管将上清液加入氧化铝小柱……注入高效液相色谱仪进行确认”进行操作。

3.2.3.其它食品：对于使用了红辣椒油（粉）调味的食品（如红油豆制品、红油鱼干等）称取10-20g，用20%丙酮的正己烷洗下红油（粉），或将样品与洗脱液搅成匀浆将罗丹明B溶解提取出，将样品液静置或离心，分出有机相，根据水分的多少加入适量无水硫酸钠脱水，按照3.2.1项中“用滴管将上清液加入氧化铝小柱……注入高效液相色谱仪进行确认”进行操作。含量少的样品因粉红色条带太窄和颜色较淡肉眼看不清楚，仍可采用上述办法，进一步用20%丙酮的正己烷洗涤小柱至流出液无色时，滴入5-10ml甲醇，将罗丹明B色带洗下并收集，经浓缩后，注入高效液相色谱仪进行确证检验。

3.3 液相色谱条件
3.3.1 色谱柱：MP C18 4.6mm X 15cm（5μm）  进样 5ul
3.3.2 流动相：75%甲醇水溶液 1ml/min
3.3.3 检测器: 紫外/可见光（UV/VIS）检测器；波长：550nm
3.3.4 定性定量：罗丹明B标准溶液保留时间定性，外标法定量。
3.4 结果计算
    Y = C×V/M
Y——样品中罗丹明B的含量（mg/kg）
C——从标准曲线上查得的罗丹明B的浓度（ug/ml）
V——测试样品总定容体积（ml）
M——样品的称样量（g）
4.5 注意事项：①使用C18柱的性能有差异，流动相浓度应略作调整。②在本法所给分离条件下，样品基质在罗丹明B附近无干扰峰，其他许多红色偶氮染料均可在罗丹明B之后出峰，注意调整这些干扰峰与罗丹明B分离度，干扰的成分为：苏丹橙G、对位红、苏丹红7B、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ。