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QuEChERS-高效液相色谱法同时检测动物组织中的克球酚、地克珠利和磺胺类药物残留量 [复制链接]

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离线jlhaina

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只看楼主正序阅读使用道具楼主发表于: 2023-07-15

1．材料
PSA吸附剂：Cleanert PSA
C18吸附剂：Cleanert C18
中性氧化铝吸附剂：层析用（用前于600℃马弗炉烘烤）
2．样品处理
试样粉碎并混合均匀，准确称取5g（精确至0.01 g），置于50mL离心管中，加入14mL乙腈+氯仿（10+1）溶液，1.0mL10%硫酸钠溶液，均质提取。以5000转/分钟离心5分钟。准确吸取10mL提取液氮吹或浓缩至近干，用乙腈+氯仿（10+1）溶液定容至2 mL，根据样品基质情况，分别选择并称入适量C18、PSA、氧化铝吸附剂，涡混2分钟进行分散型固相萃取净化，5000转/分钟离心3分钟。准确移取1.0mL上清液于另一15mL离心管中，N₂吹干，用1.0mL乙腈+水（12+88）溶液涡混溶解残渣，过0.45μm滤膜，进样。
3．色谱条件
色谱柱：Venusil ASB C18 (5μm,3.9*150mm)
流动相：A：乙腈； B：冰乙酸+水（3+1000）
采用梯度洗脱，如表1
流速：1.0 mL/min；进样量：20μL；
柱温：40℃；检测波长：270 nm。

表1 梯度洗脱程序

时间/min A % B % 梯度曲线

0.00          12           88              线性
8.50          12           88              线性
8.51          35           65              线性
15.00         35           65              线性
15.01         60           40              线性
20.00         60           40              线性
20.01         12           88              线性
25.00         12           88              线性

4．结果
4.1 线行范围和方法检测限
由于不同样品即使在相同的添加水平下，回收率也不可能完全相同，所以方法检测限会略有差别，但7种化合物检测限至少能分别达到：克球酚：0.05mg/kg、磺胺类：0.05 mg/kg、地克珠利：0.10mg/kg。
4.2 回收率和方法精密度
用空白样品加标方法进行回收率和精密度实验。分别对空白鸡肉和空白鸡肝进行三个不同水平的加标，每个水平平行测定6次，计算回收率和相对标准偏差。当添加水平在 0.10mg/kg～1.0mg/kg范围内，回收率均可在65%～100%之间，相对标准偏差 1%～10%之间。鸡肉和鸡肝的加标回收谱图分别见图1和图2。
5．讨论
原QuEChERS方法应用于农残检测，称取15g果蔬样品，振荡提取，取提取液直接进行下一步净化；改进后的方法应用于兽残检测时，称取5g动物组织样品，采用均质提取，提取效率更高，然后从提取液中取10mL，旋蒸至近干，用提取溶剂溶解残渣定容至2mL，再进行下一步净化，比直接取提取液净化富集了更多的目标物，使方法检测限理论上可以提高5倍。
原QuEChERS方法用PSA去除果蔬中的脂肪酸、色素，而动物组织中含有大量蛋白和脂肪，所以净化过程中同时考虑C18和中性氧化铝吸附剂，采用混合型分散固相萃取净化，各种吸附剂的用量针对不同的样品基质进行调整，一般在100～250mg之间。在回收率方面，C18和中性氧化铝对地克珠利吸附性较强，使其回收率降低；而对其它6种兽药化合物基本没有吸附。PSA对7种化合物均有不同程度吸附。实际检测中，可根据基质情况和目标化合物性质选择合适的吸附剂及其用量。