,%"!8T 十八种天然氨基酸和三种非天然氨基酸:
十八种天然氨基酸:Asp,Glu,Ser,Gly,His,Arg,Thr,Ala,Pro,Tyr,Val,Met,Cys-Cys, Ile,Leu,Nle,Phe,Trp,Lys.
86Hg?!<i. 3}aKok"k 三种非天然氨基酸:Pal,Nal,Cpa
|y9(qcKn$ 氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生(PITC柱前衍生氨基酸
分析方法)
K&ZN!VN/p 氨基酸标准溶液含有17种天然氨基酸。
\]C_ul' 样品溶液含有十七种天然氨基酸和三种非天然氨基酸。
/T_{k. 准确量取样品溶液200μl,置1.5ml塑料离心管中,准确加入20μl正亮氨酸内标溶液,混匀,用氮吹仪上吹干后,加220μl 0.1mol/L盐酸溶解,加入三乙胺乙腈溶液100µl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷400µl,振摇后放置10分钟,取下层溶液,用0.45µm小滤器过滤。
(P!r^87
另准确量取混合氨基酸标准溶液200µl,置一1.5ml塑料离心管中,准确加入20μl正亮氨酸内标溶液,混匀,加入三乙胺乙腈溶液100µl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷400µl,振摇后放置10分钟,取下层溶液,用0.45µm小滤器过滤。
|w5m2Z 色谱条件: :o~]FVf 色谱柱:Agela Venusil AA柱,100Å,4.6×250mm,5µm(订货号:AA952505-0)
)
>;7"v 流动相A:称取15.2g无水醋酸钠,加水1850mL,溶解后用冰醋酸调pH至6.5,然后加乙腈140mL,混匀,用0.45µm滤膜过滤。
'9{`Czc(Gb 流动相B:80%(V/V)乙腈溶液。
)]}G8A 洗脱梯度:
g(_xo\ vtq$@#?~ b 图1 氨基酸标准溶液(十七种天然氨基酸+正亮氨酸)
`j1oxJm 图2 氨基酸标准溶液(十七种然氨基酸+正亮氨酸+三种非天然氨基酸)