158阅读
0回复

HPLC法测定十八种天然氨基酸和三种非天然氨基酸 [复制链接]

上一主题下一主题查看指定楼层

离线jlhaina

侠客

发帖: 118

世科币: 239

威望: 123

贡献值: 200

银元: 0

只看楼主倒序阅读使用道具楼主发表于: 2023-07-15

关键词：氨基酸

十八种天然氨基酸和三种非天然氨基酸：

十八种天然氨基酸：Asp,Glu,Ser,Gly,His,Arg,Thr,Ala,Pro,Tyr,Val,Met,Cys-Cys, Ile,Leu,Nle,Phe,Trp,Lys.

三种非天然氨基酸：Pal，Nal，Cpa
氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生（PITC柱前衍生氨基酸分析方法）
氨基酸标准溶液含有17种天然氨基酸。
样品溶液含有十七种天然氨基酸和三种非天然氨基酸。
准确量取样品溶液200μl，置1.5ml塑料离心管中，准确加入20μl正亮氨酸内标溶液，混匀，用氮吹仪上吹干后，加220μl 0.1mol/L盐酸溶解，加入三乙胺乙腈溶液100µl，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400µl，振摇后放置10分钟，取下层溶液，用0.45µm小滤器过滤。
另准确量取混合氨基酸标准溶液200µl，置一1.5ml塑料离心管中，准确加入20μl正亮氨酸内标溶液，混匀，加入三乙胺乙腈溶液100µl，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400µl，振摇后放置10分钟，取下层溶液，用0.45µm小滤器过滤。
色谱条件：
色谱柱：Agela Venusil AA柱，100Å，4.6×250mm，5µm(订货号:AA952505-0)
流动相A：称取15.2g无水醋酸钠，加水1850mL，溶解后用冰醋酸调pH至6.5，然后加乙腈140mL，混匀，用0.45µm滤膜过滤。
流动相B：80%（V/V）乙腈溶液。
洗脱梯度：