1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇? je$H}D
WrwbLl E
保存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色，这样的酚容易降解DNA，一般不可以使用。为了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性。 pRjE uOc
*H/)S 5
2.如何将不同构型的质粒DNA区别开? NUiv"tAY
ksU& q%1
由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同，cccDNA的泳动速度最快，通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。 c%G~HOE=B
J qLPJUr
3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么? zfU j%N
]p( e
s,[
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 hHMp=8J7
c;b<z|}z
4.用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子? kazgI>"Q8
l;z+E_sQ
用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl或NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。 >PWDo
}+NlY D:qF
5.在提取RNA时经常使用异硫氰酸胍，有什么作用? IH=% %AS
*
bcemH8f
RNA是一种极易降解的核酸分子。高浓度强变性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏，使RNA从细胞中释放出来。同时高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的RNA酶失活，使释放出的RNA不被降解。 ]R"n+LnI:=
->
'q
6.蛋白印迹中封闭液的作用? on\ahk, y]
Ip,0C8T`Q
封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位，以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。 (aq^\#9btO
!E/%H v1
7.DNA通常保存在什么缓冲液中? wGpw+O
`ucr;P
采用TE缓冲液，Tris-HCl的缓冲系统，加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性，对DNA起到保护作用。 L_ YY,
0>?78QL9<
8.在酶切反应缓冲液中为什么加入BSA? "IsDL^)A9
Ll 6|Wh X
通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。 r \]iw v
\c$! C8z
9.简单的克隆载体必需包括什么? xyTjK.N
h Ap<$7
复制起点;选择标记：主要是抗性基因;多克隆位点：便于外源DNA的插入。 8MPXrc,9-
j _*#"}Lcp
10.用酚抽提细胞DNA时，有什么作用? !j?2HlIK+
q\g|K3V
)
使蛋白质变性。 \{[Gdj`
E=
Z .v
11.在分离DNA时，要使用EDTA，为什么? Q}M%
\v
?_9A`LC*
EDTA是金属离子螯合剂，螯合二价离子，抑制核酸酶的活性。 %P2GQS-N
W7lR 54%|
12.在分离DNA过程中，造成DNA分子断裂的因素有哪些? h7|#7 d
/L8Q[`;.
核酸酶降解;化学降解;物理剪切。 "RH pj3 si
Os MU>v }m
13.使用离心机应注意什么? ^#T@NN0T
O9#8% p%
)
首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管，使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守，发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。 -s5j^U{h|
Fy^=LrH=D
14.分子生物学实验室常用的灭菌方法有哪些? | N%?7PZ(
B8){
高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学药剂消毒、过滤除菌。 ?6;9r[ p
,%>]
15.使用移液器有哪些注意事项? ,Jm2|WKH
kjVUG >e>
垂直吸液、慢吸慢放;选择合适的量程范围，不能超过量程使用;选择与移液器匹配的枪头，安装枪头时不要用力太猛;移液器每日用完后，应旋到最大刻度。 Hd*e9;z
微博帐号登录
内容互通，快速登录
QQ帐号登录
