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[实验室管理]生化实验室15大常识 [复制链接]

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离线alex
 

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只看楼主 倒序阅读 使用道具 楼主  发表于: 2023-07-08
关键词: 实验室
  1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇? Mt7X<?GZm  
[4V|UvKz  
保存在冰箱中的酚,容易被空气氧化而变成粉红色,这样的酚容易降解DNA,一般不可以使用。为了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫,不仅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。 zD#+[XI]K  
,=XS%g}l4  
2.如何将不同构型的质粒DNA区别开? <E(-QJ  
&L[8Mju6  
由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同,cccDNA的泳动速度最快,通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。 $yR{ZFo  
`"bRjC"f]  
3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么? Q>+_W2~]  
k^vmRe<lk  
异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 $7k04e@ ]  
 hE?GO,  
4.用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子? '&o> %V  
~ jrU#<'G9  
用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl或NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀。 5 "Xo R)  
cR@}   
5.在提取RNA时经常使用异硫氰酸胍,有什么作用? D-;43>yi<  
rO2PbF3  
RNA是一种极易降解的核酸分子。高浓度强变性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏,使RNA从细胞中释放出来。同时高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的RNA酶失活,使释放出的RNA不被降解。 BM}a?nnoc  
8i+jFSZ$  
6.蛋白印迹中封闭液的作用? ,\">ovV33  
F^[Rwzv>c  
封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位,以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。 U1@ P/  
"nS{ ;:  
7.DNA通常保存在什么缓冲液中? k@X As  
|@uhq>&  
采用TE缓冲液,Tris-HCl的缓冲系统,加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性,对DNA起到保护作用。 ?_`P;}4#  
7B>cmi  
8.在酶切反应缓冲液中为什么加入BSA? r4qV}-E  
O#ajoE  
通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。 jYssz4)tp  
3R96;d;  
9.简单的克隆载体必需包括什么? +/ d8d  
k-p7Y@`+a  
复制起点;选择标记:主要是抗性基因;多克隆位点:便于外源DNA的插入。 F;l<>|vG  
eT \Q  
10.用酚抽提细胞DNA时,有什么作用? 1+[|pXT}  
)HiTYV)]'  
使蛋白质变性。 ~ .=HN}E  
X_ yU"U  
11.在分离DNA时,要使用EDTA,为什么? (B4 A$t  
#8HXR3L5=!  
EDTA是金属离子螯合剂,螯合二价离子,抑制核酸酶的活性。 :9< r(22  
YZ+g<HXB  
12.在分离DNA过程中,造成DNA分子断裂的因素有哪些? [~0q )  
eNskuG|1  
核酸酶降解;化学降解;物理剪切。 m eWq9:z  
CzbNG^+  
13.使用离心机应注意什么? 'Z9F0l"Nr  
f@g  
首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管,使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守,发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。 (pg9cM]NA  
W.<<azi  
14.分子生物实验室常用的灭菌方法有哪些? 6S&YL  
gWPa8q<b  
高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学药剂消毒、过滤除菌。 T`;M!-)2  
?^Ux+mVE  
15.使用移液器有哪些注意事项? _ RYZyw   
]vErF=[U,  
垂直吸液、慢吸慢放;选择合适的量程范围,不能超过量程使用;选择与移液器匹配的枪头,安装枪头时不要用力太猛;移液器每日用完后,应旋到最大刻度。 mAa]E t.  
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