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[食品触材]空气、食品接触面(餐具,饮具,器皿表面)微生物检验方法、检验标准 [复制链接]

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只看楼主 倒序阅读 使用道具 楼主  发表于: 2013-05-24
空气食品接触面微生物检验方法检验标准 9 Aq\1QC  
目的 ;FO( mL(  
检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标,生产区域环境当中病原微生物的监控,达到规定标准,以控制食品成品的质量 \9`76*X6 c  
0mi$_Ld+  
参照标准 I*hzlE  
中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB159791995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.12000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、 出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。 ^M~Z_CQL2  
<% GfF![v  
采样与检测方法 ?:+sjHzXT  
3.1空气的采样与测试方法 O"V;otlC  
3.1.1样品采集: ?{rpzrc!*  
(1)取样频率: p`/c&}  
a)车间转换不同卫生要求的产品时,在加工前进行采样,以便了解车间卫生清扫消毒情况。 C q)Cwc[H  
b)全厂统一放长假后,车间生产前,进行采样。 S?<hs,  
c)产品检验结果超内控标准时,应及时对车间进行采样,如有检验不合格点,整改后再进行采样检验。  KGJ *h  
d)实验性新产品,按客户规定频率采样检验。 B!1Bg9D  
e)正常生产状态的采样,每周一次。 2uLBk<m5c  
2)采样方法 L%;[tu(*  
在动态下进行,室内面积不超过30 m2,在对角线上设里、中、外点,里、外点位置距墙1 m;室内面积超过30 m2,设东、西、南、北、中点,周围4点距墙1 m。采样时,将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度),并避开空调、门窗等空气流通处,打开平皿盖,使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测,送检时间不得超过6h,若样品保存于04℃条件时,送检时间不得超过24h ]\m >N]P]  
3.1.2菌落培养: `!Yd$=*c_&  
1)在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃ 培养24 h,取出检查有无污染,将污染培养基剔除。 JA~q}C7A7o  
2)将已采集样品的培养基在6 h内送实验室,细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果,计数平板上细菌菌落数。 (7Ln~J*  
3)菌落计算: x;{Hd;<YF  
a) 记录平均菌落数,用/来报告结果。用肉眼直接计数,标记或在菌落计数器上点计,然后用510倍放大镜检查,不可遗漏。 a:Nf +t  
b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。 )H(i)$I  
3.2工作台(机械器具)表面与工人手表面采样与测试方法: 9oYE  
3.2.1样品采集: _L +j6N.h1  
(1)取样频率: V*DDU]0k  
a)车间转换不同卫生要求的产品时,在加工前进行擦拭检验,以便了解车间卫生清扫消毒情况。 N\|BaZ%>|  
b)全厂统一放长假后,车间生产前,进行全面擦拭检验。 g(9kc<`3'D  
c)产品检验结果超内控标准时,应及时对车间可疑处进行擦拭,如有检验不合格点,整改后再进行擦拭检验。 rp+]f\] h  
d)实验新产品,按客户规定擦拭频率擦拭检验。 `~z[Hj=2  
e)对工作表面消毒产生怀疑时,进行擦拭检验。 `NTtw;%Y  
f)正常生产状态的擦拭,每周一次。 9c%CCZ  
2) 采样方法: o".,JnbX l  
  a) 工作台(机械器具):用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面(取与食品直接接触或有一定影响的表面)取25cm2的面积,在其内涂抹10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。 P*H0Hwn;  
b) 工人手:被检人五指并拢,用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面,从指尖到指端来回涂擦10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。 ?T.=y m  
3)采样注意事项: }%z%}V@(&  
擦拭时棉签要随时转动,保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间 Oet+$ b  
3.2.2细菌·大肠菌群的检测培养: .xuzu#-  
样液稀释:将放有棉棒的试管充分振摇。此液为110稀释液。如污染严重,可十倍递增稀释,吸取1ml 110样液加9ml无菌生理盐水中,混匀,此液为1100稀释液。 TQmrL  
3.2.2.1 细菌总数: IxS%V31  
1)以无菌操作,选择12个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿(平行样),将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿,每皿约15ml,充分混合。 %1:caa@_p  
2)待琼脂凝固后,将平皿翻转,置36℃±1℃ 培养48 h后计数。 wMj #. Jh  
3)结果报告:报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数 EwX{i}j_V  
3.2.2.2大肠菌群: Eh ";irE  
1)平板法: jeJgDAUv  
a) 以无菌操作,选择12个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿(平行样),将已融化冷至45℃左右的去氧胆酸盐琼脂培养基倾入平皿,每皿约15ml,充分混合。待琼脂凝固后,再覆盖一层培养基,约3-5 ml gK9d `5  
b) 待琼脂凝固后,将平皿翻转,置36℃±1℃ 培养24h后计数。 "I)zi]vk  
c) 结果计算: 以平板上出现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得出。 J (?qk  
d) 结果报告:报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数 Wz s=BNm9  
2)试管法: sqtz^K ROM  
a) 以无菌操作,选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到BGLB肉汤培养基中,每个稀释度接种三管。 =uH2+9.  
b) BGLB肉汤管于36℃±1℃培养48±2h。记录所有BGLB肉汤管的产气管数。 ;6Yg}L  
c) 结果报告:按BGLB肉汤管产气管数,查MPN表报告每25cm2食品接触面中或每只手的大肠菌群值。 'v~'NWfd  
3.2.3金黄色葡萄球菌检测 )ZpI%M?)  
1)定性检测 PY.K_(D  
a)  1ml稀释液注入灭菌的平皿内,倾注15-20mlB-P培养基,(或是吸取0.1稀释液,用L棒涂布于表面干燥的B-P琼脂平板),放进36±1℃的恒温箱内培养48±2小时。 B5;%R01A  
b) 从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验。 % S^hqC  
c)  结果报告:B-P琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性,即报告手(工器具)上有金黄色葡萄球菌存在。 UxTLr-db^  
2)定量检测 -[L\:'Gp5  
a)  以无菌操作,选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到含10﹪氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基中,每个稀释度接种三管。 G+8)a$?v  
b)  置肉汤管于36±1℃的恒温箱内培养48小时。划线接种于表面干燥的B-P琼脂平板,置36℃±1℃ 培养4548小时。 S} m=|3%y  
c)  B-P琼脂平板上,挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基,36℃±1℃培养2024小时。 @|anu&Hm  
d)  取肉汤培养物做血浆凝固酶试验,记录试验结果。 1'E=R0`pA  
e)  报告结果:根据凝固酶试验结果,查MPN表报告每25 cm2食品接触面中或每只手的金黄色葡萄球菌值。 XIl <rN@-  
3.3工厂环境中病原体的检测计划与方法 u?Ffqt9'  
检测计划:为了保证食品安全,工厂应该对生产环境中的病原微生物进行检测和评估,检测项目包括李斯特菌,沙门氏菌等病原体微生物,化验室应该按照一定的计划对生产场所环境中的病原体进行检测,其中包括地面、下水道、排水沟、墙壁、天花板、设备框架、运输的支架,冷藏装置、速冻机、传送带、设备的螺丝、维修工具等部位。当某个点检测到病员微生物时,应该对环境中的相似点加大检测频率;在把所有的预定点检测完后,应该对环境中的病原微生物的存在状况进行全面评估,在下一次环境检测循环过程中加强检测容易出现病原体的环境点,达到持续改进的目的。 kw#X,h P  
检测频率: 每月两次,每次每个区域至少选取5个检测点,分别进行检测。 k<< x}=  
3.3.1环境李斯特菌的检测方法(3MTM  PetrifilmTM 环境李斯特菌的测试片) D;p I!S<#  
3.3.1.1 用涂抹棒,海绵或者其他采样设备收集环境样本。 p3=Py7iz  
3.3.1.2 将收集的样本添加10毫升灭菌的缓冲蛋白胨水,将样本与缓冲蛋白胨混合1分钟,将样品置于室温(20-30℃1小时,最久不超过1.5小时,以修复损伤的李斯特菌。 V+E8{| dYL  
3.3.1.3 将测试片放在平坦处,掀起上层膜。 kW/G=_6  
3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升样品到下层膜中央,将上层膜缓慢盖下,以免产生气泡。 b)d;eS  
3.3.1.5 轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上,不要压,扭转或者滑动压板。提起压板等至少十分钟,以使胶体凝固。 A(FnU:  
3.3.1.6 将测试片透明面朝上,可叠放至十片,在37℃±1℃培养26-30小时,可以用标准菌落记数器或者其他光学放大器判读,不要记数圆形轮廓上的菌落,因为他们不受选择性培养基的影响。 <w2h@ea  
3.3.1.7 对于定性检测,根据紫红色菌落是否存在,结果记为检出或者未检出。 ybBmg'198  
3.3.2环境中沙门氏菌的检测方法 !Km[Qw k-  
3.3.2.1采样地点: 选取采样点时因尽量选取微生物容易滋生的地方
[YOH'i&X  
Hl$W+e|tj  
冷冻车间
XY"b90  
FD车间
ot}erC2~  
东区初加工
G2` z?);1b  
传递窗口表面、排水沟、 pfN(Ae Pt  
排水沟出口、墙壁、地面
:K| H/kht  
卸料间
0S{23L4C  
墙壁、墙角、地面、天花板、 RjW wsC~B  
物料车表面
CF bNv9GZj  
东区精加工
fL*7u\m:  
地面、墙壁、墙角、排水沟、 f.6>6%l  
排水沟出口、速动机链条、天花板
M$K%e  
暂存间
^j}C]cq{Xg  
墙壁、地面、天花板、墙角、墙缝
B;9,Qbb  
西区初加工
Bu:%trlgV  
传递窗口表面、地面、墙壁、 u BEw YQB  
排水沟、排水沟出口
ob7'''i  
挑选间
<F 9-$_m  
墙壁、地面、天花板、墙角、垫板
j<^!"_G]*?  
西区精加工
I}8e"#  
地面、墙壁、墙角、排水沟、排水沟出口、速动机链条、天花板
iYXD }l;r  
包装室
yy3r h(ea  
墙壁、地面、天花板、金探传送带表面、落地料存放处
s$fM,l:!  
3.3.2.2 操作步骤 #0AyC.\  
3.3.2.2.1采样应在生产开始后进行,用已浸润过的棉拭在选定的被测表面旋转涂抹约100cm2的面积,然后将棉拭放回涂抹试管并盖紧。         v H HgZ  
3.3.2.2.2将样品带回实验室,每5个点混合成一个样品, 登记编号,按照SN0170-92标准及时检测,若有阳性结果出现,应逐步对所混合的每个点分别检测。 WuK<?1meN  
物体表面涂抹菌落总数计算方式:物体表面细菌总数(cfu/c㎡)=平皿上菌落的平均数*采样液稀释倍数/采样面积(cm2 pm O9mWq   
根椐GB159792002《一次性卫生用品卫生标准》的标准,生产环境卫生指标 6J;!p/C8E  
1 装配与包装车间空气中细菌菌落总数应≤2 500 cfu/m3 6mcb'hy  
2 工作台表面细菌菌落总数应≤20 cfu/cm2 SK}jhm "y  
3. 工人手表面细菌菌落总数应≤300 cfu/只手,并不得检出致病菌。 KS_+R@3Z  
人员和环境卫生检测方法 ~<k>07  
一、        空气采样及检验方法  JE O$v|X  
1培养基:普通营养琼脂平板,按GB4789.283.7条配制 hNc8uV{r=  
2采样(空气沉降法) E$%v);u  
2.1布点:面积小于30平方米的车间,设一对角线,在线上取3点,即中心一点,两端在距墙1米处各取一点;面积大于30平方米的车间,设东、西、南、北、中5个点,其中东、西、南、北点均距墙1米。 Lv+{@)  
2.2采样高度:与地面垂直高度80-150厘米。 {/no YB<;  
2.3采样方法;用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。 :s_o'8z7L  
3培养:于37℃培养24小时。 o?ug`m"  
4检测频率:每周 "nr?WcA  
空气质量标准: e\~nqKCb  
生车间、熟车间、成品车间:低于100 'n h^;  
半成品库、成品库:低于10 W$]qo| 2P  
二、设备的采样与检验方法 9{(q[C5m  
根据生产过程所要求的重点卫生部位,实验室对其进行涂抹采样,进行细菌总数检验。 "PMJh3q  
1采样方法 `Fcr`[  
1.1涂抹法(适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面) 9O &]!ga  
取经过灭菌的铝片框(框内面积为50平方厘米)放在需检查的部位上,用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分,擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中,此液每毫升代表5平方厘米。 T}J)n5U}\  
1.2贴纸法(适用于表面不平坦的设备和工器具接处面) Qz=e'H  
将无菌规格纸(5×5厘米,纸质要薄而软)用无菌生理盐水泡湿后,于需测部分分别贴上两张,两张纸面积共50平方厘米,然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中,此液每毫升代表5平方厘米。 Fr50hrtkU  
2检验方法 oM1C/=8   
2.1细菌总数的检验 !]?kvf-3e  
将上述样液充分振摇,根据卫生情况,相应地做10倍递增稀释,选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养,培养基用普通营养琼脂,每个稀释度作2个平皿,每个平皿注入1毫升样液,于37℃培养24小时后计菌落数。 1 jLQij  
结果计算 .|CoueH  
表面细菌总数(cfu/cm2=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2 t"9r`0>  
2.2致病菌的检验 y%9Hu  
沙门氏菌,参照GB4789.4进行 L{1[:a)']B  
金黄色葡球菌,参照GB7918.5进行 ``]NB=N}{1  
4.检验合格标准:细菌总数10100∕cm2 ]N\D^`iQ  
5.关键点:细菌总数≤10∕cm2 N,8.W"fV  
一般区域:细菌总数≤100∕cm2 >`[+24e  
三、人员手表面细菌污染情况的检验 ^} Y}Iz  
1.        采样方法:用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部,反复两次,涂擦的时候棉拭子要相应地转动,擦完后,将手接触部分剪去,将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。 h'GOO(  
2.        检验方法:同工器具表面细菌总数检验方法。 JoG(Nk]  
3.        结果计算:每只手表面的细菌总数(cfu/只手)=平皿上菌落的平均数× 样液稀释倍数 OrL4G `O  
四、消毒液药效的微生物学鉴定法 o:*$G~. k  
1采样对象:正常使用的消毒液,和已知配制好备用的消毒液 n'j}u  
2采样及检验方法 #}Xsi&:XU  
在无菌条件下,用无菌吸管吸取1毫升样液,加入9毫升稀释液中混匀,对于醇类与酚类消毒剂,稀释液用普通营养肉汤即可;对于含氯消毒剂、含碘消毒剂,需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠,对洗必泰、季铵盐类消毒剂,需在肉汤中加入3%W/V)土温800.3%卵磷脂;对醛类消毒剂,需在肉汤中加入0.3%甘氨酸;对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂,需在肉汤中加入(W/V)土温80,以中和被检样液中的残效作用, }G^'y8U  
将注入了样液的稀释液充分摇匀,取1毫升注入平皿,随之倒入普通营养琼脂,待琼脂凝固后,翻转平皿,将平皿于37℃条件下培养24小时后计平板上生长的菌落数。 A42!%>PB  
3结果分析 <gFisc/#r  
平板上有菌生长,表明被检样液中有残存活菌,若每个平板菌落数在10个以下,仍可用于消毒,若每个平板菌落数超过10个,说明每毫升被检样液含菌量已超过100个,即不宜在用于消毒。 {,(iL8,^  
该公式是一个经验公式.它的理论模式依据是:100CM2的面积上10MIN降落的菌落数, 2qVoe}F  
等于1升空气中所含的细菌总数.系数50000基于上述假说和单位换算而来. ,_<|e\>~  
细菌总数(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT 1D!MXYgm1b  
    5/10T:实际放置了5MIN; YRv96|c,  
    100/A:A单一培养皿面积; Wi,)a{  
    1000:1M3=1000L,换算成m3 MZWv#;.]  
1、空气细菌落菌数单位既然是cfu/m3,那采样时应该还要记录放置平皿的高度。 \P"Ol\@  
2、食品安全管理体系中罐头行业有个标准如下: Z.x]6  
   落下菌数      空气污染程度      评价 9:=:P>  
   30以下          清洁           安全 rQ2TPX<?a  
   3050               中等清洁       DWCf+4  
   5070               低等清洁        应加注意 3J/l>1[  
   70100             高度污染        对空气要进行消毒 _2}~Vqb+  
   100以上       严重污染        禁止加工 \I<R.4 9oW  
3、是否可根据企业相应的加工产品微生物指标进行自行制定? |B'4wF>  
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