【注意】
<|2_1[,sl 放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
iOJgZuP 药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。
F5MWxAS,> 4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
*g=*}2 【配制方法】
zM@iG]?kc 在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
8
L|C&Ymj 5.10mol/L乙酸酰溶液
}XXE
hO
O 【配制方法】
Pu9.Uwx 把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。
Jhj]rsGk 6.10%过硫酸铵溶液
vW4f 3(/ 【配制方法】
F(XWnfUv 把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
AVcZ.+? 7.BCIP溶液
Br yMq ! 【配制方法】
db4&?55Q 把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
P{qn@: 8.2×BES缓冲盐溶液
nB:Bw8U"Q 【配制方法】
#|e<l1 F 用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na
2HPO
4,室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。
?.Kl/8ml 9.1mol/L CaCl
2溶液
lO) B/N& 【配制方法】
&G"]v]V 在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl
2·6H
2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
.9ROa#7U;n 【注意】
e1IuobT 制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
Fj&vWj`* 10.2.5mol/L CaCl
2溶液
~j4=PT 【配制方法】
0SDCo\ 在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl
2·6H
2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
?Z!KV= 11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液
'+eP%Y[W% 【配制方法】
/J6CSk 用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
J\{)qJ*jp 【注意】
+amvQ];?Q8 DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
NKGCz|-
9 12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
[Ytia#Vv 【配制方法】
6%'{Cq1DE 把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。
K)14v;@ &B.r&K& 比色杯光径为1cm时,吸光度=εM