【注意】
TU7'J 放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
'eX ' 药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。
S+2(f> Z 4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
[sb[Z:
【配制方法】
hG:|9Sol, 在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
lPJ\-/>$z 5.10mol/L乙酸酰溶液
6(e>P) 【配制方法】
9$m|'$p3sG 把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。
BX^tR1 6.10%过硫酸铵溶液
-S+zmo8 【配制方法】
y|q3Wa 把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
:Lug7bUVD 7.BCIP溶液
*cnNuT 【配制方法】
1>&]R= 把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
C{bgkzr 8.2×BES缓冲盐溶液
n\.V qe 【配制方法】
3<zp 用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na
2HPO
4,室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。
%9RF 9.1mol/L CaCl
2溶液
T${Q.zHY[! 【配制方法】
7fX<511( 在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl
2·6H
2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
"2T#M
O/ 【注意】
.eP.& 制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
FjI`uP 10.2.5mol/L CaCl
2溶液
t>B;w14 【配制方法】
BFJnV.0M! 在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl
2·6H
2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
r{%qf; 11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液
#`X?=/q 【配制方法】
a+T.^koY 用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
X/M4!L}\ 【注意】
9lDhIqx0~ DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
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G9!sf 12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
=k:,qft2 【配制方法】
klR|6u]% 把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。
M>8A\;" r s?R:+ 比色杯光径为1cm时,吸光度=εM