HPLC法:
色谱条件:
色谱柱:Venusil® HILIC 5μm 100Å 4.6*250mm (P/N:VH952505-0);
流动相:A:10mmol/L乙酸铵(pH=4.0);
B:乙腈;
A:B=10:90;
检测波长:220nm;
进样量:10μL;
柱温:30℃;
流速:1mL/min。
实验结果:
线性关系和检出限
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液;
分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为0.1μg/mL,0.5μg/mL,1.0μg/mL,2.0μg/mL,5.0μg/mL和10.0μg/mL的标准溶液,按照上述色谱条件,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见下表:
名称 | 保留时间 | 线性方程 | 相关系数 | 最低定量限(S/N=10) |
双氰胺 | 4.92min | Y=116.44X+3.2699 | 0.9997 | 0.1μg/mL |
图1 1 μg/mL双氰胺标准溶液谱图
LC-MS/MS法:
色谱条件:
色谱柱:Venusil® HILIC 5μm 100Å 2.1*150mm(P/N:VH951502-0);
流动相:A:0.5mmol/L乙酸铵(pH=4.0)
B:乙腈
A:B=10:90
进样量:10μL;
柱温:30℃;
流速:0.2 mL/min。
质谱条件
质谱仪:API 4000+;
离子源:电喷雾离子源;
扫描方式:正离子扫描;
检测方式:多反应监测;
CAD:8.00;
CUR:10.00;
GS1:60.00;
GS2:50.00;
IS:5500.00;
TEM:500.00。
药物名称 | 监测离子对 | DP | EP | CE | CXP |
双氰胺 | 85/68 | 71 | 10 | 41 | 6 |
85/43 | 71 | 10 | 41 | 6 |
实验结果
线性关系和检出限
准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液;
分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为5ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和500ng/mL的标准溶液,按照上述液质方法,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见下表:
名称 | 保留时间 | 线性方程 | 相关系数 | 最低定量限(S/N=10) |
双氰胺 | 3.15min | Y=8777.2X+7435.9 | 0.9993 | 5ng/mL |