材料
1．1 SPE柱：Cleanert C18,100mg/6ml
1．2环磷酰胺内标液：取环磷酰胺对照品0.2g于100mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，得浓度为2mg·mL-1的内标溶液，于冰箱4℃ 保存。
2．血样处理：取0.5mL血清样品，加入内标12.5uL，待过柱净化。
3．净化：
1）柱活化：依次用2mL乙腈，再用2mL生理盐水活化小柱
2）上样：把处理好的样品过柱
3）淋洗：待血样完全流出后，先用1mL生理盐水冲洗，再用1mL 5%乙腈进一步冲洗杂质，待淋洗液完全流出后，加压将柱抽干
4）洗脱：用0.5mL乙腈洗脱，收集洗脱液，取20μL进样测定。
4．结果
表1 异环磷酰胺回收率及精密度测定结果（n=5）
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加入浓度（μg·mL-1）
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提取回收率（%）
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方法回收率（%）
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RSD（%）
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日内
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日间
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100
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92.0±1.8
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101.2±3.5
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1.1
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50
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93.6±5.6
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107.2±1.5
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2.9
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5
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89.3±1.3
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95.3±4.3
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2.2
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色谱图见图1。保留时间：异环磷酰胺11.6min；环磷酰胺12.8min，峰形良好，无杂质峰干扰。
色谱条件
色谱柱：Zorbox-ODS C18 (4.6mm×250mm,5μm)
流动相：乙腈-水（25：75）
流速1mL·min-1；检测波长200nm，进样量为20μL；柱温：室温
图1异环磷酰胺及内标（空白血清添加）