一. 试剂配制
1. 氢氧化钠溶液（0.2mol/L）：称取氢氧化钠0.8g，加水100mL溶解，即得。
2. 二硫代二丙酸溶液:称取二硫代二丙酸200mg，加0.2mol/L氢氧化钠溶液10mL溶解，即得。
3. 水解溶液：取浓盐酸50mL，加水定容至100mL。
4. 三乙胺乙腈溶液：取三乙胺1瓶，加乙腈8.6mL，混匀。
5. 异硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液：取异硫氰酸苯酯1支，加乙腈2mL，混匀。
6. 流动相A： 称取8.2g无水醋酸钠，加水900mL溶解，用醋酸调pH至6.5，然后加 水至1000mL，加乙腈75ml，滤过。 流动相B: 乙腈/水＝4/1 7. 内标溶液: 称取正亮氨酸内标10mg，加0.1mol/L盐酸溶解10mL使溶解。
二. 操作
（1）供试品溶液的制备 准确称取样品适量（约含总氨基酸50mg）（W1）,加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至50mL，作为供试品溶液。
（2）氨基酸标准溶液 准确称取胱氨酸约10.0 mg（W2），加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至100mL，作为氨基酸对照溶液。
（3）水解衍生 准确量取供试品溶液和氨基酸标准溶液各200μL，分别置一水解管中，准确加入正亮氨酸内标溶液20μL，加二硫代二丙酸溶液 100μL，加水解溶液0.5mL，110℃ 水解24小时，真空干燥或用氮气吹干除去盐酸，往每个水解管中分别加入水200μL，加三乙胺乙腈溶液100μL，振摇使溶解，加异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μ ，混匀，室温放置1小时,加入400μL正己烷，放置10分钟，取下层溶液，用水稀释5倍，滤过，作为上机分析溶液。
(4) 色谱条件： 色谱柱：Venusil-AA氨基酸分析柱 100Å，4.6mm×250mm，5μm 检测波长：254nm 柱温：40℃ 进样体积：10mL 流速：1.0mL/min
洗脱梯度：
|
时间(min)
|
B
|
时间(min)
|
B
|
时间(min)
|
B
|
时间(min)
|
B
|
时间(min)
|
B
|
|
(%)
|
(%)
|
(%)
|
(%)
|
(%)
|
|||||