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食品中罗丹明B(玫瑰红)的现场快速检测及实验室检测方法
发布时间:2013-02-28        浏览次数:258        返回列表
Cleanert AL-N P/N:AL5006-N;Venusil MP C18 P/N:VA951505-0
1 实验材料
1.1 固相萃取柱:Cleanert AL-N,500mg/6ml

1.2 色谱柱Venusil MP C18,4.6mm X 150mm(5μm)

2 现场快速检测

2.1 辣椒粉  取辣椒粉一小勺(约5g)放入小烧杯中,加入约40ml含20%丙酮的正己烷,摇动或搅拌2分钟,静置,待样品杯上方澄清后,慢慢倒入小柱中,下端接一废液杯,视颜色深浅倒入2-5ml,注意不要倒入太多,保证小柱的中下部仍为白色, 此时,含罗丹明B的样品在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带,条带边缘清晰,粉红色随含量的增加而加深和加宽,不含罗丹明B的样品提取液不会出现粉红色条带,只会出现黄红色的界面不清晰的宽带,然后用含20%丙酮的正己烷20ml慢慢倒入小柱,粉红色的条带不下移,但更清晰,其余的黄红色带下移,可大部分被洗脱出,即可判断为含罗丹明B的可疑样品。

2.2 辣椒油  取辣椒油一小勺(约2g)放入小烧杯中,加入约10ml正己烷,混匀。按2.1项操作。

2.3 判定  初步判断为含罗丹明B的可疑样品需送实验室中进行液相色谱确证检验。

3实验室验证方法

3.1.仪器

3.2.提取和纯化

3.2.1 辣椒粉:取辣椒粉1g,加入20ml含20%丙酮的正己烷,震摇10分钟,静置或过滤使分离出上层清液,残渣加入10ml含20%丙酮的正己烷重复提取一次,合并2次提取液,混匀,用滴管将上清液加入氧化铝小柱(1.1)中,视颜色深浅决定上柱量,保证上完样的小柱中下部仍为白色,含罗丹明B的样品提取液在柱上部会出现鲜亮的粉红色的荧光条带,且粉红条带随含量的增加而加深和加宽,不含罗丹明B的样品提取液不会出现粉红色条带,只会出现黄红色的不清晰的宽带,用含20%丙酮的正己烷洗小柱,粉红色的条带不下移,但更清晰,其余的黄红色带下移可大部分被洗脱出,可判断为含罗丹明B的可疑样品,待洗柱的流出液无色时,滴入5-10ml甲醇,将罗丹明B色带洗下并收集,用甲醇定容后,注入高效液相色谱仪进行确认。 

3.2.2.辣椒油:称取辣椒油1g,加入10ml含20%丙酮的正己烷,混合均匀后滴入氧化铝小柱(1.1)中,按照3.2.1项中“用滴管将上清液加入氧化铝小柱……注入高效液相色谱仪进行确认”进行操作。

3.2.3.其它食品:对于使用了红辣椒油(粉)调味的食品(如红油豆制品、红油鱼干等)称取10-20g,用20%丙酮的正己烷洗下红油(粉),或将样品与洗脱液搅成匀浆将罗丹明B溶解提取出,将样品液静置或离心,分出有机相,根据水分的多少加入适量无水硫酸钠脱水,按照3.2.1项中“用滴管将上清液加入氧化铝小柱……注入高效液相色谱仪进行确认”进行操作。含量少的样品因粉红色条带太窄和颜色较淡肉眼看不清楚,仍可采用上述办法,进一步用20%丙酮的正己烷洗涤小柱至流出液无色时,滴入5-10ml甲醇,将罗丹明B色带洗下并收集,经浓缩后,注入高效液相色谱仪进行确证检验。

3.3 液相色谱条件

3.3.1 色谱柱:MP C18 4.6mm X 15cm(5μm)  进样 5ul
3.3.2 流动相:75%甲醇水溶液 1ml/min
3.3.3 检测器: 紫外/可见光(UV/VIS)检测器;波长:550nm
3.3.4 定性定量:罗丹明B标准溶液保留时间定性,外标法定量。
3.4 结果计算
    Y = C×V/M
Y——样品中罗丹明B的含量(mg/kg)
C——从标准曲线上查得的罗丹明B的浓度(ug/ml)
V——测试样品总定容体积(ml)
M——样品的称样量(g)
4.5 注意事项:①使用C18柱的性能有差异,流动相浓度应略作调整。②在本法所给分离条件下,样品基质在罗丹明B附近无干扰峰,其他许多红色偶氮染料均可在罗丹明B之后出峰,注意调整这些干扰峰与罗丹明B分离度,干扰的成分为:苏丹橙G、对位红、苏丹红7B、苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ。