一、操作步骤
1、样品的处理
（1）可乐型饮料
样品超声脱气5min，取脱气试样通过微孔滤膜，弃去初滤液，取后5mL滤液作HPLC分析用。
（2）咖啡及其制品
称取2g已经粉碎，且小于30目的均匀样品或液体样品放入150mL烧杯中，先加2-3mL超纯水，再加50mL三氯甲烷，摇匀，在超声处理机上萃取1min（30s两次），静置30min，分层。将萃取液倾入另一150mL烧杯。在样品中再加50mL三氯甲烷，重复上述萃取步骤，弃去样品，合并两次萃取液，加入少许无水硫酸钠和5mL饱氯化钠，过滤，滤入100mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100mL，最后取10mL滤液经微孔滤膜过滤，弃去初滤液5mL，保留后5mL滤液作HPLC分析用。
2、色谱条件
色谱柱：Venusil XBP-C18-2 4.6*250mm 5um 100A
流动相：甲醇：水=40:60
流速：1mL/min
检测波长：286nm
柱温30℃
进样量：10uL
3、标准曲线的绘制
用甲醇配制成咖啡因浓度分别为0ug/ml、20ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、150ug/ml的标准系列，然后分别进样10uL于286nm测量峰面积，作峰面积-咖啡因浓度的标准曲线。
4、样品测定
从试样中吸取可乐饮料10ul或咖啡及其制品10ul进样，于286nm处测定其峰面积，然后根据标准曲线得出试样的峰面积相当于咖啡因的浓度C(ug/ml)。同时做试剂空白。
二、实验结果
1、标准品实验图谱
标准品1000ppm色谱图峰面积：（15386.4）
标准品200ppm色谱图（峰面积：3457.5）
标准品100ppm色谱图（峰面积：1879.95）
标准品50ppm色谱图（峰面积：966.1）
标准品20ppm色谱图（峰面积：399.8）
2、样品实验图谱
可乐-品牌1色谱图（峰面积：1687.95）
可口-品牌2色谱图（峰面积：1684.7）
咖啡样品色谱图（峰面积：12639.1）
空白甲醇色谱图
三、实验数据
1、标准曲线的建立
根据标准品作图，标准曲线为：y=0.0659x-17.338 R2=0.9996
可乐型饮料中咖啡因含量（mg/mL）=c
咖啡中咖啡因含量（mg/100g）=c*V*100/m*1000
C：由标准曲线求得试样稀释液中咖啡因的浓度，ug/mL
V：试样定容体积，mL
m：试样质量，g
2、样品中咖啡因含量
根据上式计算出可乐饮料中和咖啡中咖啡因含量如下：
可乐-品牌1中咖啡因含量：93.9（mg/mL）
可乐-品牌2中咖啡因含量：93.7（mg/mL）
咖啡中咖啡因含量：4077.9（mg/100g）