一．维生素
1、 一次进样同时分析维生素A乙酸酯、D3、E乙酸酯
参照方法：GB/T 17817-2010、GB/T 17818-2010、GB/T 17812-2008
样品：维生素A乙酸酯、D3、E乙酸酯对照品，某品牌鲤鱼用1%复合预混料
样品处理：按照标准第二法—甲醇提取
仪器：LC-10F 高效液相色谱仪
色谱柱：Venusil® XBP C18(L)，4.6 mm×150 mm，5μm
流动相：甲醇：水=95：5；流速：1.0mL/min
柱温：25℃；进样量：20μL
波长(nm): 维生素A乙酸酯：326；维生素D3：264；维生素E乙酸酯：280
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维生素A乙酸酯
维生素D3
维生素E乙酸酯
采用波长梯度一次进样可同时检测维生素A乙酸酯、D3、E乙酸酯
波长梯度设置：
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时间(min)
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0-7.5
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7.5-16
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16-26
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波长 (nm)
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326
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264
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280
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维生素A乙酸酯、D3、E乙酸酯混合标准品
某品牌鲤鱼用1%复合预混料
2、 一次进样同时分析维生素A、D3、E
样品：某品牌肉鸡用复合多维素，
样品处理：参照国标中第一法即皂化法，色谱条件同上，
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时间(min)
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0-6
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6-12.5
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12.5-18
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波长 (nm)
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326
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264
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280
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波长梯度：
维生素A、D3、E提取后稀释100倍后液相色谱图
优异的重现性
3、 维生素B1、B2、B6
参照方法：GB/T 14700-2002、GB/T 14701-2002、GB/T 14702-2002
样品：维生素B1、B2、B6标准品
仪器：LC-10F 高效液相色谱仪
色谱柱：Venusil® XBP C18(L)，4.6mm×150 mm，5μm
流动相：
在已装入约700mL去离子水的1000mlL容量瓶中，加入50mg EDTA，精确到0.001g，1.1g庚烷磺酸钠精确到0.001g，待全部溶解后加入25mL冰乙酸、三乙胺调节该溶液pH 3，过0.45μm滤膜。取该溶液860mL与140mL甲醇混合。
流速：1.0mL/min；柱温：25℃；
进样量：20μL；
波长(nm)：维生素B1：246 ；维生素B2：267；维生素B6：280
混合维生素B1、B2、B6：280
维生素B1的液相色谱图
维生素B2
维生素B6
维生素B1、B2、B6混标
4、 维生素B12
参照方法：GB/T 17819-1999
样品：维生素B12标准品
仪器：LC-10F高效液相色谱仪
色谱柱：Venusil® XBP C18（L），4.6 mm×150mm，5μm；
流动相：3%磷酸水溶液-乙腈=13：35;流速：1.0mL/min；
柱温：25℃；进样量：20μL；波长：361nm
维生素B12
5、 维生素K3
参照方法：GB/T 18872-2002
样品：维生素K3标准品
仪器：LC-10F高效液相色谱仪
色谱柱：Venusil® XBP C18（L） 4.6 mm×150mm，5μm；
流动相：甲醇：水=75：25；流速：1mL/min；柱温：25℃；
进样量：20μL；波长：251nm
维生素K3
二、氨基酸
仪器：LC-10F高效液相色谱仪
饲料样品水解：参照GB/T 18246-2000
样品衍生：准确量取样品溶液200μL，置1.5mL塑料离心管中，准确加入20μL正亮氨酸内标溶液，混匀，用氮吹仪上吹干后，加220μL 0.1mol/L盐酸溶解，加入三乙胺乙腈溶液100µL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µL，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400µL，振摇后放置10分钟，取下层溶液，用0.45µm小滤器过滤。另准确量取混合氨基酸标准溶液200µL，置一1.5ml塑料离心管中，准确加入20μL正亮氨酸内标溶液，混匀，加入三乙胺乙腈溶液100µL，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µL，混匀，室温放置1小时，然后加入正己烷400µL，振摇后放置10分钟，取下层溶液，用0.45µm小滤器过滤，进样分析。
色谱柱：Venusil®AA氨基酸分析专用柱（100Å，4.6mm×250mm，5μm）
检测波长：254 nm；柱温：40℃
流动相A：称取15.2g无水醋酸钠，加水1850mL，溶解后用冰醋酸调pH至6.5，然后加乙腈140mL，混匀，用0.45µm滤膜过滤。流动相B：80%（V/V）乙腈溶液
进样量：稀释5倍，10µL进样
流速：1mL/min，梯度洗脱
梯度程序
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时间(分)
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0
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12
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22
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38
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38.1
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43
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43.1
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50
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B%
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0
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8
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22
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36
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100
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100
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0
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0
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17种氨基酸混合标样
出峰顺序为：天门冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Gly）、丝氨酸（Ser）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）、精氨酸（Arg）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、脯氨酸（Pro）、酪氨酸（Tyr）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、异亮氨酸（Iie）、亮氨酸（Leu）、苯丙氨酸（Phe）、赖氨酸（Lyr）。
（豆粕）水解氨基酸色谱图
（鱼粉）水解氨基酸色谱图