研究背景：目前市售和美发厅使用的染发剂主要属于苯胺类化学染发剂（又称永久性染发剂），其中含有若干种苯胺染料有毒物质，如对苯二胺及其衍生物等。染发时有毒物质通过发髓、皮肤或呼吸等多种方式进入人体内参加血液循环，一旦进入体内很难排出，在体内蓄积，极易引发皮肤过敏反应或致毒。近年来，苯胺类染发剂的致毒事件在国内外屡有报道。1979年出版的《IARC专题论文集》1~20卷将迄今人们使用的苯胺类染发剂中10多种苯胺类化学染料成分都已列入致人癌症的目录中，但是2006年1月1日起实施的中华人民共和国卫生部印发《染发剂原料名单（试行）》中还包括了7种《IARC专题论文集》中列入致癌名录的苯胺类染料，分别是：p-苯二按、m-苯二胺、N-苯基对苯二胺，2,5-二氨基甲苯、2,5-二氨基苯甲醚、p-苯二酚，m-苯二酚。本文采用反相HPLC-UV法对包括这7中苯胺类染料的8种染料进行了分析，采用耐碱的Durashell C18色谱柱，等度洗脱，8种苯胺类染料获得了良好的分离效果，分离度大于1.5，适用于染发剂中苯胺类染料的同时检测。
一、样品处理
称取p-苯二胺，p-氨基苯酚， 2,5-二胺甲苯，对苯二酚，m-氨基苯酚， o-苯二胺，间苯二酚，p-甲氨基苯酚等8种染料组分各约0.5g，各加入0.1g亚硫酸钠加95%乙醇使之溶解，并在100ml容量瓶中定容至刻度（如使用甲苯2,5-二胺硫酸盐和p-甲氨基苯酚硫酸盐为标准品，应用水溶解）
二、检测
色谱柱：Durashell C18, 4.6×150mm, 5μm, 100 Å（订货号DC952505-0）
流动相：三乙醇胺10ml加至980ml水中，加入磷酸使溶液pH=7.7，加水至1L，取此溶液950ml与乙腈50ml混合组成含5%乙腈的磷酸缓冲溶液，作为流动相。
流速： 1.0 ml/min；柱温：20℃；检测波长：280nm；进样量：2μL
三、结果与讨论
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8种混合样品色谱图
1：p-苯二胺，2：p-氨基苯酚，3： 2,5-二胺甲苯，4：对苯二酚，
5：m-氨基苯酚，6：o-苯二胺，7：间苯二酚，8：p-甲氨基苯酚
由色谱数据及色谱图，可以得到如下结论：
1）8种苯胺类染料一次获得良好的分离，分离度大于1.5，适用于染发剂中苯胺类染料的检测。
2）苯胺类染发剂属于弱碱性化合物，选用pH7.7的流动相，使化合物解离程度差别增大，可获得良好的分离。
3）流动相中pH7.7的缓冲盐比例为95%，有机相乙腈为5%，普通反相色谱柱在此条件下寿命很短，本实验选用博纳艾杰尔科技的Durashell C18色谱柱，该色谱柱经过表面碳杂化，可耐受pH12和高水相，经过本实验100次进样，仍然获得了良好的分离。
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