天津博纳艾杰尔科技有限公司

苯并芘（BaP），又称3，4-苯并芘，是一种常见的高活性间接致癌物，是目前世界公认的三大强致癌物质之一，照中国国家GB2716-2005《食用植物油卫生标准》要求，在食用植物油类产品中苯并芘的安全限量为不超过10微克/千克。

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Cleanert BaP苯并芘专用固相萃取柱
  Venusil PAH多环芳烃专用色谱柱
  GBT 22509-2008 动植物油脂苯并芘的测定反相高效液相色谱法

检测方法1

本方法参考GBT 22509-2008国标方法：动植物油脂 苯并（a）芘的测定 反相高效液相色谱法。如有任何产品或技术咨询问题，请拨打客服热线400-600-8099

相关技术差异为：

①对仪器设备作了改动；

②氧化铝层析柱采用商品化Cleanert BaP固相萃取柱；

③将洗脱溶剂改为采用色谱纯的正己烷；

④待测液定容体积改为300μL，采用仪器自动进样，进样量为20μL；

⑤采用外标法定量计算。



一、实验原理

用正己烷溶解油脂样品，上样到CleanertBaP固相萃取柱，去除脂肪酸等，再用正己烷洗脱苯并（a）芘，采用反相高效液相色谱法分离，荧光检测器检测。

二、试剂与材料

2.1CleanertBaP固相萃取柱，22g/60mL（P/N: BaP2260）：100-200目，brockmann活度Ⅳ级，在室温下避光保存，天津博纳艾杰尔科技有限公司；

Venusil ASB-C18，250mm×4.6mm×5.0μm（P/N：VS952505-0）

2.2色谱纯正己烷；

2.3 苯并（a）芘标准储备液：称取10mg标准品于10mL容量瓶中，用正己烷定容，配制的标准储备液浓度为1000mg/L；

3.4 标准工作液：用正己烷稀释标准储备液，稀释的浓度为10μg/L。

三、仪器和设备
3.1 旋转蒸发仪，大于150mL的鸡心瓶或圆底旋蒸瓶；

3.2 氮吹仪；

3.3 涡旋混合器；

3.4 2ml进样瓶；

3.5 250μL进样瓶玻璃内插管；

3.6 高效液相色谱仪，配自动进样器，荧光检测器。

四、样品前处理

4.1称取约0.300g的油样，用5mL正己烷溶解涡旋混合器上充分混匀。

4.2活化：用约30mL正己烷将氧化铝柱预先活化，活化过程直到氧化铝柱末端正己烷自然滴下约5mL为止。

在正己烷滴出的过程中，柱体上部要不断添加正己烷，千万注意不能让正己烷低于柱子的上筛板，避免空气进入柱子！将滴出的约5mL正己烷去除，不予收集。

4.3上样：将溶解好的油样添加到预活化好的氧化铝柱子中，注意操作过程中上筛板不能干涸。

4.4洗脱：添加80mL正己烷，用150mL的旋蒸瓶接收，直到80mL的正己烷完全自然滴出。如果苯并芘回收率不高，可以增加正己烷的洗脱体积，最多可至120mL。

操作过程中不需要加压或抽真空加快流速，让正己烷在重力作用下自然洗脱。

4.5将洗脱液在45℃水浴中旋转蒸发至干，如果仍然有油滴无法蒸干，说明净化不完全，需要向油滴中添加80mL的正己烷制得新样，取一根新柱重复上述净化过程；

4.6用总计10mL的正己烷分三次淋洗旋蒸瓶，合并淋洗液到氮吹管中，氮气吹干。添加300μL的正己烷到氮吹管中，在涡旋混合器上充分混匀。注意氮吹过程避免气流过大，造成液体溅出；涡旋过程避免正己烷蒸发。

4.7将上述300μL的正己烷转移至2mL进样瓶内插管中，进样分析。

五、色谱条件

   色谱柱：Venusil ASB-C18，250mm×4.6mm，5.0μm；

流动相:乙腈：水 =88：12；

流速：1.0mL/min；

进样量：20μL；

荧光检测器：发射波长406nm，激发波长384nm。

六、实验结果和讨论：

6.1结果：

本方法的采用Cleanert BaP固相萃取柱用于某植物油苯并（a）芘的净化处理于5ug/kg添加水平可获得99.49%回收率，采用Venusil ASB-C18所得到的图谱见图1～3。

图1、 5μg/L苯并（a）芘的标准样品的色谱图

图2、某植物油的实际样品色谱图

图3、某植物油加标量为5μg/Kg的标准样品色谱图

表1、苯并芘的回收率

图3、某植物油加标量为5μg/Kg的标准样品色谱图

6.2.3 油脂的取样量不宜超过0.3g，否则容易造成净化不完全的现象。
6.2.4 最后定容体积为300μL，避免了国标里的定容体积（100μL）过小，
不便于操作的问题。