一．实验目的
本文使用天津博纳艾杰尔科技有限公司的Cleanert® PEP-2固相萃取柱、Venusil® MP C18色谱柱和Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪，遵照中华人民共和国国家标准《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定（GB/T 20752-2006）》提供的方法，检测猪肉中的4种硝基呋喃类代谢物残留。
二．实验方法
2.1.样品信息
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2.2.样品称取和脱脂
称取猪肉样品2g（精确到0.01g），置于50m棕色离心管中，加入15ml甲醇-水混合溶液（v:v=2：1），均质1min，再用5ml甲醇-水混合溶液洗涤刀头，二者合并8000r/min离心5min，吸取上清液倒掉。
注：为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响，可加入同位素内标，采用内标法定量检测。
2.3.水解和衍生（注意避光）
向棕色离心管中加入20ml 0.2mol/l的盐酸溶液，涡旋1min使之混合均匀，之后加入0.3ml浓度为0.05mol/L的2-硝基苯甲醛，混匀，于37℃温水中避光衍生16小时。
2.4.净化处理
将衍生后的样品冷却至室温，加入5ml 0.1mol/l的磷酸氢二钾，并用1 mol/l的氢氧化钠溶液调PH约为7.4，混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2ml/min的流速过Cleanert® PEP-2小柱（规格为60mg/3ml，用5ml甲醇、5ml水活化），并用10ml的水洗涤固相萃取小柱，然后负压抽干柱子15min。用5ml乙酸乙酯洗脱于20ml棕色瓶中（此过程可在Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪上完成，仪器方法见附录B）。洗脱液于40℃下氮气吹干。
用样品定容溶液（10ml乙腈，0.3ml的乙酸用水稀释至100ml）定容至1ml，充分溶解，并用0.22µm滤膜过滤。
2.5.检测方法
色谱柱：Venusil® MP C18（2.1×150mm，5µm，100Å）
质谱仪：API 4000+
流动相：A:0.1%甲酸的水溶液 B:0.1%甲酸的乙腈溶液
表1 梯度洗脱条件
|
时间（min）
|
A（%）
|
B（%）
|
|
0
|
80
|
20
|
|
1
|
80
|
20
|
|
3
|
50
|
50
|
|
7
|
25
|
75
|
|
7.1
|
5
|
95
|
|
10
|
5
|
95
|
|
10.1
|
80
|
20
|
|
16
|
80
|
20
|
流速：0.2mL/min
进样体积：5μL
离子源：电喷雾（ESI），正离子模式
扫描方式：多反应监测（MRM）
表2 质谱仪离子源参数
|
Source/Gas
|
|
|
Collision Gas(CAD)
|
6
|
|
Curtain Gas(CUR)
|
15
|
|
Ion Source Gas 1(GS 1)
|
50
|
|
Ion Source Gas 2(GS 2)
|
50
|
|
Ion Spray Voltage(IS)
|
5500
|
|
Temperature(TEM)
|
600
|
|
Interface Heater(ihe)
|
On
|
表3 4种硝基呋喃待测物母离子和子离子参数表
|
物质名称
|
保留时间（min）
|
监测离子对
|
DP
|
EP
|
CE
|
CXP
|
|
SEM
|
8.10
|
209.1/166.1
|
51
|
10
|
17
|
10
|
|
209.1/192.1
|
51
|
10
|
17
|
10
|
||
|
AHD
|
8.30
|
249.2/134.1
|
61
|
10
|
20
|
10
|
|
249.2/104.1
|
66
|
10
|
31
|
10
|
||
|
AOZ
|
8.89
|
236.2/134.1
|
61
|
10
|
20
|
10
|
|
236.2/104.1
|
56
|
10
|
31
|
10
|
||
|
AMOZ
|
3.12
|
335.3/291.2
|
46
|
10
|
19
|
10
|
|
335.5/128.1
|
46
|
10
|
19
|
10
|
三．实验结果
0.5ppb猪肉基质加标回收实验结果：
表4 猪肉中0.5ppb加标回收实验结果
|
名称
|
1（%）
|
2（%）
|
3（%）
|
平均回收率（%）
|
RSD（%）
|
|
AMOZ
|
109.43
|
97.84
|
109.75
|
105.67
|
6.42
|
|
SEM
|
91.81
|
88.91
|
88.22
|
89.65
|
2.12
|
|
AHD
|
80.68
|
82.11
|
77.25
|
80.01
|
3.12
|
|
AOZ
|
83.94
|
80.70
|
80.85
|
81.83
|
0.02
|
四、实验结论
Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计，用其进行硝基呋喃代谢物的前处理操作，全净化过程可在避光条件下进行，保证检测结果的准确性和重现性。Cleanert® PEP-2固相萃取柱和Venusil® MP C18色谱柱完全可以满足国标对于硝基呋喃代谢物的检测要求，结果准确可靠，重现性好。
五、订货信息
表5 实验仪器及耗材
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产品名称
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规格
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订货信息
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Qdaura 卓睿™全自动固相萃取
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4通道24位
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SPE-40
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Cleanert® PEP-2固相萃取柱
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60mg/3ml，50支/包
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PE0603-2
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Venusil® MP C18液相色谱柱
|
2.1×150mm，5µm，100Å
|
VA951502-0
|
附录A
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图1 4种硝基呋喃代谢物总离子图
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图2 SEM（209/166）质谱图
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图3 AOZ（236/134）质谱图
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图4 AHD（249/134）质谱图
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图5 AMOZ（335/291）质谱图
附录B
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图6 卓睿全自动固相萃取仪自动净化方法