转基因食品检测 [复制链接]

转基因检测既是对转入的特定基因进行检测，通过引物将特定的启动子和终止子合成，并在之后检测中表现出来，所使用的方法通常是凝胶PCR、RTPCR、LAMP、NASBA等等。

1.转基因食品的定义

　　转基因食品(GeneticallyModifiedFoods，简称GMF)，指的是利用转基因技术，将生物中所含的某些基因转移至其他物种中，从而改造后者的遗传物质，使其在外形、消费属性、营养属性等方面产生变化，符合人们的需要。

2.转基因食品的特点

　　(1)转基因食品本身或其原材料所含的基因组被人为地改变了。这是区别于传统食品的最主要特点。这些改变的目的包括了生长速度的改变、产量的提高或者剥离某些对人体不利或者不必要的基因。但是，由于科学技术水平的限制，在改变的过程中可能会导致一些无法预料的结果，人体是否适应还有很大的不确定性。这也是造成转基因食品安全性没有传统食品稳定的根奉原因。

　　(2)转基因食品的发展具有一定的前景和价值。在许多第三国家，它不仅改善作物的适应性、营养价值以及生物特性，还能提高耕地利用率，同时保持土地的肥沃率并降低农药带给农作物的副作用。可以说，转基因食品不仅拓展了食品领域的边界，而且，在满足人类对食品需求的同时，还能带动未来新型食品市场的发展，对经济的发展起着推动作用。

　　通过核酸扩增将物质的遗传物质进行扩增，通过特定引物对所需要的DNA或RNA进行合成，如能成功合成，则代表所要得到的DNA或者RNA是存在的。转基因检测既是对转入的特定基因进行检测，通过引物将特定的启动子和终止子合成，并在之后检测中表现出来，所使用的方法通常是凝胶PCR、RTPCR、LAMP、NASBA等等。

如何检测转基因食品

　　转基因食品检测方法发展异常的迅速，根据检测的物晶的不同，已经衍生出很多相应的检测方法和手段。在我们的实际的检测技术中我们要基于食品的种类和加工的方式不同，以及在食品中含有的相应的转基因片段的不同，适用合适的、高效的、精确地检测方法和手段。目前常用的检测方法有基于核酸水平和基于分子水平两种：

1、核算水平的检测

　　(1)定性PCR技术

　　在DNA的提取中，要为上述的启动子和终止子外源基因配备引物，通过有效的仪器对待检测的转基因食品的NDA进行适当的扩增。判定的依据就是有无特长度和序列的DNA序列和片段。例如Tung在检测转基因食品中的启动子CaMV35S时用到PCR检测技术；HUANG等在检测乳酸中的转基因成分时用到巢式PCR检测技术；王保珍（哈尔滨医科大学）研制出了用于转基因食品的定性检测中的电化学传感器；朱德斌在检测CaMV35S启动子是使用电化学发光的PCR检测技术；PCR定性转基因检测技术具有敏感性高的特点，但是会出现一些假性的现象：a模板的影响因素：如反应中提取的脱氧核糖核酸在抑制因子和产品深加工核酸时造成破坏都会造成假阴性反应；b当作物被花椰菜花叶病毒感染和拥有35S的启动子或因农杆菌感染而带有终止子nos时，PCR呈现出假阳性反应；c在运输过程中或者是收获的时候，或转基因食品在和非转基因食品的产生交叉污染时，也可以使测试结果不准确。

　　(2)定量PCR技术

　　许多国家在食品转基因成分含量有严格要求，因此定量检测是十分的必要的。定量聚合酶链反应检测技术是为根据参考物为标准进行的检测，分析PRC的最终产物或者是过程的监测，进一步的评价转基因食品中样品的靶基因的拷贝数量。用于检测转基因食品定量聚合酶链反应通常用的是：半定量聚合酶链反应，实时荧光定量聚合酶链反应和多重定量聚合酶链反应技术。如Hardegger用竞争性定量聚合酶链反应检测的35S的启动子和终止的；王燕梅和kuribaraH用实时聚合酶链反应检测荧光定量相玉米片中的转基因成分；Garcia-canas等用毛细管凝胶电泳分析和鉴定转基因成分的产品的方法进行检测。竞争性的PRC也是一种终点型的测试，测试过程的第一步骤为先构建包含修改过的内部标准DNA片段（竞争脱氧核糖核酸），并检测核酸扩增片段共同进行扩增，因为竞争DNA和待检测的在大小上存在显著的差异，在琼脂糖凝胶电泳的作用下可以将它们分开，结束产品的相对数量和启动量额是成正比的，它可用于定量检测的实施。竞争性的PRC检测的弱点是风险更大的污染PRC。实时定量的聚合酶链反应检测显着较高的灵敏度比竞争性的聚合酶链反应(PRC)，它可以检测样品中含有2微克（每克转基因）的基因数量，不管是处理过的还是加工过的和混合样品都能进行测试检测。此外，实时荧光(PRC)聚合酶链反应是使用的闭管荧光分析，不需电泳反应的后续的处理步骤，可有效消除检测中的核酸交叉污染。多重定量(PRC)聚合酶链反应在同一反应体系中，可以同时为两个或更多的转基因片段的进行检测，可以提高效率，节省资金，但这种方法的难度却较大。

　　(3)印迹法

　　不管是确定外源基因的Southem印迹方法或是确定印迹核糖核酸的Northern印迹方法，基本过程的待测程序都是将待检测的核酸段是转移到一个特定部分的固相的支持物上，并进一步的结合到固相支持物上，然后使用核酸探针事前标记过的，检测将要检测的核酸。如周学荣和李建粤等使用Southern印迹方法检测转基因水稻以及转基因油菜作物；黄晓等用Northern印迹法检测转基因烟草表达中的番茄花叶病毒移动蛋白。这种印迹方具有是快速方便和易于操作，在同时间可以对多个优势样品进行测试，但由于对测试样品之前，不能对样品进行扩增放大，使检测灵敏度较低。

2、转基因成分蛋白水平上的检测方法

　　(1)双向电泳技术

　　蛋白质组研究的核心关键技术之一的双向电泳技术，这种技术是分离蛋白质的关键技术手段，能够把两个样品之间的蛋白质以高分辨、高灵敏的方法分出他们之间各种的因素；这种技术的主要依据就是两个样品之间不同的物理和化学原理进行蛋白质的分离。当前已经制造出了具有不同PH长度的固态的梯度干胶条和不同梯度的干胶条，能够很明显的提高第二向的电泳的分离的重现性，能够使这种试验系统上升到一个标准化的程度土，能够是实验室内部和实验室之间的各种数据合作比较。

　　(2)Western杂交检测方法

　　这种方法使蛋白质分子首先根据大小分离，然后加入特异性的靶蛋白的抗体，使目的分子印迹的蛋白质和抗体结合，可加用专一和一抗相结合的酶结合来标记二抗，最后通过二抗检测出标记化合物的性能。根据检测显示的结果，我们可以知道通过检钡0的植物细胞蛋白表达或没有表达，浓度的大小和规模的分子量的多少。王静等用黄瓜花叶病毒蛋白的单克隆抗体，在Western杂交检测技术的指导下，检测CMVCP基因在番茄中的外源基因的表达的状况，检测的结果表明：具有PRC扩增的产物植株中，CMVCP基因的表达蛋白在相关的植株中表达出来了。

　　(3)蛋白质印迹法

　　蛋白质印迹法将电泳分离能力高，特异性抗体和显示酶的敏感的酶反应组合在一起，是用来测试复杂混合物中的特定蛋白质的最有力的方法手段之一。Dui-jn等在检测抗草甘膦大豆cp4合成酶中使用蛋白印迹法检测，检测精度能够达到0.526～126之间，验证这种方法，能够对大豆蛋白产品的转基因成分进行高精度的检测。

转基因食品检测的重要性

　　依据转基因技术的定义，运用转基因生物技术培育高产、优质、多抗、高效的新品种，不但对环境没有污染，还能够降低农药、肥料投入，既缓解了资源，还保护了生态环境，并改善了农产品的品质。

　　任何食品的安全都是相对的，日常生活中食用的食品大部分是天然食物极其简单加工的产品，是经过人类长期实践经验认为是安全的，但这些传统食物也不是绝对安全的，比如对于大多数人来说营养丰富的鸡蛋和牛奶，对于少数过敏体质的人来说确实罪魁祸首，谷物中也含有天然的毒素和影响消化和吸收的抗营养因子，如植酸和胰蛋白酶抑制剂等，发芽马铃薯种也有龙葵碱等。随着科技的发展出现了许多新型食品，如辐照食品，功能食品，还有各种化学食品添加剂，酶制剂等食品成分，这些都要经过专门的安全性评价。即便是水、糖和盐这些人体必须的东西，吃多了也是有害的。再者，所有食品，无论是转基因的还是非转基因的，都含有基因，食品进入人体后，会在消化系统的作用下降解成小分子，而不会以基因的形式存在或进入人体组织，更不会影响人类自身的基因组成。而且，转基因食品还可以增加土地利用率，开发新型食品，满足人类需要。

　　但是，转基因食品的安全性还是要关注的，毕竟现在对于转基因食品是否有害还没有确定的答案，我们不能盲从，但也不能放警惕，国家也应该制定及完善相关的法律法规来确保人们的安全。