1 仪器和材料
1.1 固相萃取柱:Cleanert PAX (200mg/6mL)(P/N:AX2006)
1.2 赭曲霉毒素A (Ochratoxin A,以下简称OA)
1.3 色谱条件
色谱柱:Waters Xbridge C18柱 (4.6 mm x 250 mm, 5mm)
保护柱:Waters SymmITry C18柱 (4.6mm x 20mm, 5mm)
流动相:乙腈:水:乙酸=49:55:1;
检测器波长:激发光333 nm,发射光460 nnq;进样量:25 µL;流速:1mL/min;柱温:30℃
2 样品处理
2.1 提取用试剂
提取液:含20% 0.1 mol/L氢氧化钾溶液60%甲醇水溶液;
淋洗液:含30% 0.1mol/L氢氧化钾溶液,50%乙腈水溶液;
洗脱液:甲醇:乙腈:甲酸:蒸馏水=4:5:0.5:0.5
2. 2 提取
2.2.1玉米:将样品粉碎,称取玉米粉10g,加入50mL氯仿,震荡3~5分钟,用滤纸过滤,取滤液10mL进入一个100mL平底烧瓶中,于60℃水浴中旋转蒸发至近干,用20mL石油醚溶解残渣,加入10mL提取液,震荡3~5分钟,分层后,用滤纸过滤,取下层提取液5mL进行固相萃取。
2.2.2糙米、小麦、小麦粉和大豆:将样品粉碎,称取粉碎样品l0g,加入50mL提取液,震荡3~5分钟,用滤纸过滤,取滤液10mL进入一个100 mL平底烧瓶中,加入20 mL石油醚,震荡3~5分钟,分层后,用滤纸过滤,取下层提取液5 mL进行固相萃取。
2.3 固相萃取净化
PAX固相萃取柱分别用5mL甲醇,3mL提取液活化,然后将5mL提取液以1~2滴/秒速度过柱,再用10mL淋洗液以1~2滴/秒速度洗柱,并吹干;最后用4~5mL洗脱液快速洗脱OA,洗脱液收集于一个100mL平底烧瓶中,于60℃水浴中旋转蒸发至干,用1mL流动相溶解残留物,经滤膜过滤后上液相色谱检测。
3 结果
以小麦粉、小麦、玉米、糙米和大豆为研究对象,分别作三个不同浓度OA添加水平,这三个浓度分别为0.8 µg/kg、4µg/kg、10g/kg,每个浓度水平作6次平行性检测。检测回收率和精密度数据见表l、表2和表3;典型色谱图见图3。
表1 添加OA浓度为0.8µg/kg时各种粮食回收率和精密度
表2 添加OA浓度为4ug/kg时各种粮食回收率和精密度
表3 添加OA浓度为10μg/kg时各种粮食回收率和精密度
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