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一.实验目的 im@c|| BF(Kaf;<t. 本文使用Cleanert® PEP-2固相萃取柱、Venusil® MP C18色谱柱和Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪,遵照中华人民共和国国家标准《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定(GB/T 20752-2006)》提供的方法,检测猪肉中的4种硝基呋喃类代谢物残留。 4/QQX;w ziG]BZ 二.实验方法 zXT[}J VV 2.1.样品信息 `yWWX.` 2.2.样品称取和脱脂 [iT#Pu5 称取猪肉样品2g(精确到0.01g),置于50m棕色离心管中,加入15ml甲醇-水混合溶液(v:v=2:1),均质1min,再用5ml甲醇-水混合溶液洗涤刀头,二者合并8000r/min离心5min,吸取上清液倒掉。 09C[B+>h 注:为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响,可加入同位素内标,采用内标法定量检测。 _b1w<T
` 2.3.水解和衍生(注意避光) SUQk0 (M 向棕色离心管中加入20ml 0.2mol/l的盐酸溶液,涡旋1min使之混合均匀,之后加入0.3ml浓度为0.05mol/L的2-硝基苯甲醛,混匀,于37℃温水中避光衍生16小时。 hWqI*xSaJ 2.4.净化处理 <BNCo5* 将衍生后的样品冷却至室温,加入5ml 0.1mol/l的磷酸氢二钾,并用1 mol/l的氢氧化钠溶液调PH约为7.4,混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2ml/min的流速过Cleanert® PEP-2小柱(规格为60mg/3ml,用5ml甲醇、5ml水活化),并用10ml的水洗涤固相萃取小柱,然后负压抽干柱子15min。用5ml乙酸乙酯洗脱于20ml棕色瓶中(此过程可在Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪上完成,仪器方法见附录B)。洗脱液于40℃下氮气吹干。
=_/,C 用样品定容溶液(10ml乙腈,0.3ml的乙酸用水稀释至100ml)定容至1ml,充分溶解,并用0.22µm滤膜过滤。 '
h6Vj6 2.5.检测方法 }Dig'vpMx 色谱柱:Venusil® MP C18(2.1×150mm,5µm,100Å) $z9z'^HqO 质谱仪:API 4000+
i8`&XGEd 流动相:A:0.1%甲酸的水溶液 B:0.1%甲酸的乙腈溶液表1 梯度洗脱条件 'y#kRC=G: 流速:0.2mL/min >Hr0ScmN@" 进样体积:5μL :v k+[PzJ 离子源:电喷雾(ESI),正离子模式 13]sZ([B%| 扫描方式:多反应监测(MRM)表2 质谱仪离子源参数 3<x_[0v`K1 G!uQ|
<( 三.实验结果 {y|y68y0+ 0.5ppb猪肉基质加标回收实验结果:表4 猪肉中0.5ppb加标回收实验结果 `xkJ.,#Io o([+Pp 四、实验结论 Z{RgpVt l\5qa_{z Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪整机采用密封避光设计,用其进行硝基呋喃代谢物的前处理操作,全净化过程可在避光条件下进行,保证检测结果的准确性和重现性。Cleanert® PEP-2固相萃取柱和Venusil® MP C18色谱柱完全可以满足国标对于硝基呋喃代谢物的检测要求,结果准确可靠,重现性好。 SsafRK$ k+-u4W
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