一、背景 S59^$ 国标GB/T 22509-2008中利用22g的氧化铝柱进行油脂中的苯并(a)芘测定的前处理,利用氧化铝吸附油脂,通过80mL的石油醚或正己烷进行洗脱苯并(a)芘。该方法使用溶剂多,操作时间长,而且氧化铝对某些油样的净化效果较差。 W9;9\k 本实验利用Cleanert BAP-2固相萃取柱(装有经过特殊改性的活性炭)萃取油性样品中的苯并(a)芘,然后再用甲苯洗脱的方法,开发了一套油脂中苯并(a)芘检测的新方法,相对于国标GB/T 22509-2008的方法,具有更佳的油脂去除效果、稳定的苯并(a)芘回收率,溶剂用量更少更环保,方法也更简便。 =1\mLI}@ k\Y*tY#2 二、实验方法 |>b;M,`OO 2.1实验试剂及标准品 e?pQuF~ 正己烷(色谱纯,4L/瓶,P/N: AH216),二氯甲烷(色谱纯,4L/瓶,P/N: AH300),甲苯(色谱纯或分析纯重蒸),乙腈(色谱纯,4L/瓶,P/N:AH015-4) <{i1/"k?X 苯并(a)芘(100mg/瓶,P/N: B1760) gHFQs](G. 2.2实验仪器及耗材 Qe_C^(P Agilent HPLC,配荧光检测器,移液枪,PTFE滤头0.22μm(P/N:AS041320-T)。 iNilk!d6Q3 <o/l K\> 三、实验步骤 \jb62Jp 3.1试样处理 /x<uv_" (1)使用正己烷配制200ppm苯并(a)芘标准品标样备用,并用正己烷稀释成1ppm苯并(a)芘工作液备用。 7=s0Pm (2)取0.3g油于12mL样品瓶(P/N:1509-1800和P/N:1515-1748)中,加1mL正己烷涡旋震荡溶解,作为待净化液;若要做加标实验,根据需要向油中先加入适量的标准品。 KGc!#C 3.2 固相萃取方法 lbPn< 固相萃取柱名称:Cleanert BAP-2 (P/N:Bap10-2); C~pQJ@bF0 固相萃取方法如下:Ø 活化:2mL正己烷;
Ø 上样:3.1中的待净化液;
Ø 淋洗:6mL二氯甲烷;
Ø 洗脱:甲苯12mL,收集于20mL玻璃瓶(P/N:AV7100-7和P/N:AV7920-0)中
Ø 浓缩:将样液在80℃下氮气吹干,用0.3mL正己烷定容,过PTFE 0.22um滤头,收集于1.5mL样品瓶(P/N:1109-0519和P/N:AV2100-0)的内插管(P/N:0609-0357)中,待测;
ev4_}! ZXXJ!9-&+J 3.3液相色谱法检测条件 X_!km-{ (1)色谱条件: X
N{WxcZ 色谱柱:Venusil ASB-C18,4.6mm×250mm×5.0µm(P/N:VS952505-0); X&i;WI 流动相:乙腈:水 88%:12%; g<7Aln}Nl\ 流速:1.0mL/min; f=.!/e70 进样量:20µL; BoOuN94 荧光检测器:发射波长406nm,激发波长384nm。 q8n@fi6 TY5R=jh= 四、方法学考察 jatlv/, 4.1 标准曲线绘制 6b$C/ 将标准工作液稀释到浓度分别为:0.5,1.0,2.0,3.5,5.0,7.5,10.0µg/L,根据峰面积建立标准曲线。根据实际油样中苯并(a)芘的可能含量,可以将标准曲线的线性范围延伸到50µg/L。 ?k($Tc&Q 4.2 样品分析 u&[L!w 将3.1的样品进样分析,采用外标法定量。 N%ccy?B 4.3 计算公式 }fv7WhQ 苯并(a)芘含量按下式计算: uqU&k@ 其中: R*0mCz^+h w为样品中苯并(a)芘含量,单位为µg/Kg; *po
o.Zz c为从标准曲线得到的待测液中苯并(a)芘的浓度,单位为µg/L; "A&A?% V为待测液体积,单位为µL,本方法为300µL; <2L,+ m为称取的油样品质量,单位为g; Bha("kG
WTM 五、测试结果5.1液相色谱法测试结果图1 空白实验色谱图
图2 5µg/L苯并(a)芘的标准样品的色谱图
4nP4F+ 图3 实际样品的加标(5µg/L)回收率实验色谱图 表1 苯并芘的回收率
9S[.ESI{> CTKw2`5u 六、实验结论 at
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Cleanert BAP-2 去除油脂中杂质的效果良好,前处理的操作过程简单快捷。检测方法可采用液相色谱-荧光检测法,在5μg/L的添加水平的回收率可达85%以上。