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1. 前言 @8A[HP 香兰素亦称香草素、香草醛等,学名为3-甲氧基-4-羟基苯甲醛,根据欧盟专家委员会2000年2月24日报道,大剂量可导致头痛,恶心,呕吐,呼吸困难,甚至损伤肝肾功能。 gnxD'1_ 《食品添加剂使用标准》(GB2760-2011)规定,较大婴儿和幼儿配方食品中香兰素最大使用量为5mg/100mL,其中100mL以即食食品计,生产企业应按照冲调比例折算成配方食品中的使用量;婴幼儿谷类辅助食品中可以使用香兰素,最大使用量为7mg/100g,其中100g以即食食品计;凡使用范围涵盖0至6个月婴幼儿配方食品不得添加任何食用香料。 $bZ-b1{c C 国家标准中只规定了限值,未有检测方法。本实验使用Cleanert® PAX固相萃取小柱和Venusil® XBP C18(L)液相色谱柱,建立了一种奶粉中香兰素的检测方法,经实验验证,该方法简单、快速、准确度高。 lHTr7uF( R2 J A(Hn 2. 实验方法 X*5N&AJ 2.1实验试剂和耗材 K3,PmI&W
l 水 (pH=4.5);取100mL水,用乙酸调节pH至4.5; :7dc;WdM l 2%乙酸铅溶液:称取乙酸铅2g,加水稀释并定容至100mL; y+{)4ptg$< l 5%氨水溶液:取氨水溶液5mL,加水稀释并定容至100mL; #qD[dC$[t l 5%酸化甲醇:取甲酸5mL,加甲醇95mL混匀; `R.Pz _oe l 香兰素储备液 (1mg/mL):准确称取香兰素标准品10mg,加水稀释并定容至10mL; 734n1-F?I% l SPE柱:Cleanert® PAX (60mg/3mL),使用前分别用3mL甲醇和3mL水活化; H~>8q~o] l HPLC柱:Venusil® XBP C18 (L) (5μm 150Å 4.6*150mm); ,\aLv
l 针式过滤器:亲水型 PTFE (0.45μm,13mm)。 :)tsz; 2.2 仪器及设备l LC-10F高效液相色谱系统; l Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪; l 高速离心机 (转子50mL*6); l 氮吹仪; l 12位固相萃取装置。 ?d{O
'&|: 2.3试样处理 E'(nJ 准确称取奶粉试样1g(精确至0.01g)于50mL离心管中,加入pH=4.5的水溶液5mL,混匀超声提取5min,加2%乙酸铅溶液2mL,混匀后静置2min,8000r/min离心10min;取上清液用5%氨水溶液调节pH至中性;将上清液全部加样至活化好的Cleanert® PAX小柱,然后分别用3mL 5%氨水溶液和3mL甲醇淋洗小柱,弃去淋洗液;用3mL 5%酸化甲醇洗脱(以上固相萃取操作通过Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪完成),收集洗脱液于30℃下氮气吹干,用1mL流动相重新溶解,过滤,待测。 C8|# *,*O.#<6 2.4液相色谱条件 k*\)z\f 色谱柱:Venusil® XBP-C18(L),5um 150Å 4.6*150mm; o76!7 流动相:A(0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液,磷酸调节pH=4.0):B(乙腈)= 90:10; iF837ng5 流 速:1.0mL/min;进样量:20μL;波 长:276nm;柱温:30℃。 <p/2 hHfiD 3. 实验结果 ZZTf/s* 3.1线性关系和检出限 ~1twGG_; 量取一定量香兰素标准储备液,分别用水稀释至1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL和50μg/mL,按照3.3检测条件依次进样,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合标准曲线方程,结果见表1:表1 香兰素标准曲线和检出限 jWi~Q o+ 3.2准确度表2. 5μg/g添加回收实验结果 表3. 25μg/g添加回收实验结果 G e]NA]< 4. 实验结论 Qzo -Yw`= 实验表明,Cleanert® PAX和Venusil® XBP C18(L)可以用于奶粉中香兰素的检测,本方法简单、快速、准确度高。 cRD;a?0/6s 5. 实验图谱 ~OPBZ# &B[*L+-E 图1 奶粉空白谱图 CsycR @[ &oB*gGRw=7 图2. 5μg/g添加谱图 vo\'ycPv $hcv}<$/ 图3. 1μg/g标准溶液谱图
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