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1. 前言 9|1msg4 香兰素亦称香草素、香草醛等,学名为3-甲氧基-4-羟基苯甲醛,根据欧盟专家委员会2000年2月24日报道,大剂量可导致头痛,恶心,呕吐,呼吸困难,甚至损伤肝肾功能。 hCcI]#S& 《食品添加剂使用标准》(GB2760-2011)规定,较大婴儿和幼儿配方食品中香兰素最大使用量为5mg/100mL,其中100mL以即食食品计,生产企业应按照冲调比例折算成配方食品中的使用量;婴幼儿谷类辅助食品中可以使用香兰素,最大使用量为7mg/100g,其中100g以即食食品计;凡使用范围涵盖0至6个月婴幼儿配方食品不得添加任何食用香料。 'Qy6m'esW 国家标准中只规定了限值,未有检测方法。本实验使用Cleanert® PAX固相萃取小柱和Venusil® XBP C18(L)液相色谱柱,建立了一种奶粉中香兰素的检测方法,经实验验证,该方法简单、快速、准确度高。 0)ohab ,8@<sFB' 2. 实验方法 I2[Z0G@&= 2.1实验试剂和耗材 "cKD# l 水 (pH=4.5);取100mL水,用乙酸调节pH至4.5; 4YfM.~
6 l 2%乙酸铅溶液:称取乙酸铅2g,加水稀释并定容至100mL; NUV">i.( l 5%氨水溶液:取氨水溶液5mL,加水稀释并定容至100mL; rl|'.~mc l 5%酸化甲醇:取甲酸5mL,加甲醇95mL混匀; QLY;@-jF$ l 香兰素储备液 (1mg/mL):准确称取香兰素标准品10mg,加水稀释并定容至10mL; 1K
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~U l SPE柱:Cleanert® PAX (60mg/3mL),使用前分别用3mL甲醇和3mL水活化; rN}pi@ l HPLC柱:Venusil® XBP C18 (L) (5μm 150Å 4.6*150mm); ZNBowZI l 针式过滤器:亲水型 PTFE (0.45μm,13mm)。 Cbff:IP 2.2 仪器及设备l LC-10F高效液相色谱系统; l Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪; l 高速离心机 (转子50mL*6); l 氮吹仪; l 12位固相萃取装置。 _k@cs^
2.3试样处理 qO>UN[Y 准确称取奶粉试样1g(精确至0.01g)于50mL离心管中,加入pH=4.5的水溶液5mL,混匀超声提取5min,加2%乙酸铅溶液2mL,混匀后静置2min,8000r/min离心10min;取上清液用5%氨水溶液调节pH至中性;将上清液全部加样至活化好的Cleanert® PAX小柱,然后分别用3mL 5%氨水溶液和3mL甲醇淋洗小柱,弃去淋洗液;用3mL 5%酸化甲醇洗脱(以上固相萃取操作通过Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪完成),收集洗脱液于30℃下氮气吹干,用1mL流动相重新溶解,过滤,待测。 ;fNCbyg4
I vb>F)X?b_ 2.4液相色谱条件 k4q":}M 色谱柱:Venusil® XBP-C18(L),5um 150Å 4.6*150mm; 2.^{4 1: 流动相:A(0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液,磷酸调节pH=4.0):B(乙腈)= 90:10; U"GxXrl 流 速:1.0mL/min;进样量:20μL;波 长:276nm;柱温:30℃。 /b,>fK^ 3. 实验结果 mx9vjWfy 3.1线性关系和检出限 7!J-/#! 量取一定量香兰素标准储备液,分别用水稀释至1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL和50μg/mL,按照3.3检测条件依次进样,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合标准曲线方程,结果见表1:表1 香兰素标准曲线和检出限 sQgz}0_=) 3.2准确度表2. 5μg/g添加回收实验结果 表3. 25μg/g添加回收实验结果 }c8nn 4. 实验结论 cSPQ
NYU: 实验表明,Cleanert® PAX和Venusil® XBP C18(L)可以用于奶粉中香兰素的检测,本方法简单、快速、准确度高。 +
?)7l 5. 实验图谱 a"@f< wU~ 63E6nW M 图1 奶粉空白谱图 KS
*,'hvY xKu#OH 图2. 5μg/g添加谱图 WaB0?jI uX-^9t 图3. 1μg/g标准溶液谱图
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