mIX[HDy:V$ 一、操作步骤 .# [== 1、样品的处理
}{.0mu9 （1）
可乐型饮料
#N'W+M / 样品超声脱气5min，取脱气试样通过微孔滤膜，弃去初滤液，取后5mL滤液作HPLC分析用。
]1 (G:h\ （2）
咖啡及其制品
nD5
1,1> 称取2g已经粉碎，且小于30目的均匀样品或液体样品放入150mL烧杯中，先加2-3mL超纯水，再加50mL三氯甲烷，摇匀，在超声处理机上萃取1min（30s两次），静置30min，分层。将萃取液倾入另一150mL烧杯。在样品中再加50mL三氯甲烷，重复上述萃取步骤，弃去样品，合并两次萃取液，加入少许无水硫酸钠和5mL饱氯化钠，过滤，滤入100mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100mL，最后取10mL滤液经微孔滤膜过滤，弃去初滤液5mL，保留后5mL滤液作HPLC分析用。
}hy,
}2(8 2、色谱条件
+__PT4ps 色谱柱：Venusil XBP-C18-2 4.6*250mm 5um 100A
MQ{.% 流动相：甲醇：水=40:60
n$O[yRMI[ 流速：1mL/min
t5Oeb<REz 检测波长：286nm
}[gk
9uM_7 柱温30℃
@ysc?4% q 进样量：10uL
;mAlF>6]\ 3、
标准曲线的绘制
F
bWcq_ 用甲醇配制成
咖啡因浓度分别为0ug/ml、20ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、150ug/ml的标准系列，然后分别进样10uL于286nm测量峰面积，作峰面积-咖啡因浓度的标准曲线。
y]e[fZ`L 4、样品
测定 c?0.>^,B Q 从试样中吸取可乐饮料10ul或咖啡及其制品10ul进样，于286nm处测定其峰面积，然后根据标准曲线得出试样的峰面积相当于咖啡因的浓度C(ug/ml)。同时做试剂空白。
,p\ :Z3{ZH Z=&cBv4Fs 二、实验结果 X
DdF7i} 1、标准品实验图谱
r$
8 ^K\oF 
y`| 86`
Y 标准品1000ppm色谱图峰面积：（15386.4）
;n~-z5) 
JE<w7:R& 标准品200ppm色谱图（峰面积：3457.5）
~ ]_U!r[FA 
#@3& 1 }J/ 标准品100ppm色谱图（峰面积：1879.95）
#{ DX*;1m 
[Ep%9(SgA' 标准品50ppm色谱图（峰面积：966.1）
_* m<Z;Et 
标准品20ppm色谱图（峰面积：399.8）
o#~Lb9`@U N r,Q u8 2、样品实验图谱
bQlv b 
可乐-品牌1色谱图（峰面积：1687.95）
p Rys 5/&v 可口-品牌2色谱图（峰面积：1684.7）
) p^ " J| 咖啡样品色谱图（峰面积：12639.1）
空白甲醇色谱图
~9 [O' 三、实验数据1、标准曲线的建立 根据标准品作图，标准曲线为：y=0.0659x-17.338 R
2=0.9996
可乐型饮料中咖啡因含量（mg/mL）=c咖啡中咖啡因含量（mg/100g）=c*V*100/m*1000C：由标准曲线求得试样稀释液中咖啡因的浓度，ug/mLV：试样定容体积，mLm：试样
质量，g2、样品中咖啡因含量根据上式计算出可乐饮料中和咖啡中咖啡因含量如下：可乐-品牌1中咖啡因含量：93.9（mg/mL）可乐-品牌2中咖啡因含量：93.7（mg/mL）咖啡中咖啡因含量：4077.9（mg/100g）
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