水产品中氯霉素残留量的测定 气相色谱法 [复制链接]

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1．样品预处理 #G3N(wV3  
鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉；虾去头、去壳、去附肢，取可食肌肉部分；蟹、中华鳖等取可食肌肉部分；样品切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混匀，放置冰箱中冷冻贮存备用。 e,A)U 5X  
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2．提取 |kiJ}oy  
  将样品解冻，称取样品5g(精确到0.001g)，置于50mL玻璃离心管中，加入乙酸乙酯20mL，均质机均质1min，分散均匀，提取氯霉素，4000r/min离心3min，将乙酸乙酯层转移到100mL细口鸡心瓶中。再向离心管中加乙酸乙酯10ml，用原均质机均质混合1min，4000r/min离心3min，合并乙酸乙酯提取液于100mL细口鸡心瓶中，于40℃水浴中减压旋转蒸发至干。 G@d`F  
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3．脱脂 :,*eX' fH  
  向鸡心瓶中加1mL甲醇旋涡混合溶解残留物，再加入15ml正己烷和25mL 4%氯化钠溶液，盖塞振荡混合1min，充分混合提取脂肪，转移到另一50mL离心管中，4000r/min的速度离心2min，除去上层正己烷相并弃去。再向水相中加10mL正己烷，重复提取一遍，弃去正己烷相。 #w3ru6*W  
  水相中加入15mL乙酸乙酯，旋涡混合器混合2min，3000r/min离心3min，吸取乙酸乙酯层，经过无水硫酸钠柱脱水过滤于50mL鸡心瓶中。再向水相中加入5mL乙酸乙酯，重复上述操作。用少量乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱，合并提取液于50mL鸡心瓶中，在40℃水浴中减压旋转蒸发至干。对于大部分样品，到此步骤净化效果已可达到要求，对于净化不完全的样品可经C18固相萃取柱进一步净化。 <6N_at3  
  加入2mL乙酸乙酯溶解提取物并转移于5mL具塞离心管中，用1mL乙酸乙酯洗涤鸡心瓶，合并乙酸乙酯，于50～55℃的砂浴中吹氮蒸发至近干，再用1mL乙酸乙酯洗涤离心管壁并吹干。以5mL 5％（V/V）的乙腈水溶液溶解。待净化。 Gm=>!. p  
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4．Cleanert C18柱净化（1g/6mL） ]O!s'lC  
1）柱活化：依次用5mL甲醇、5mL氯仿、5mL甲醇和5mL水淋洗活化（注意不要干） u2qV6/  
2）上样：把处理好的样品溶液过柱（流速控制在1ml/min以内） E5x]zX y4  
3）淋洗：6mL水淋洗C18柱，让洗涤液完全流出C18柱后抽干 S
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4）洗脱：5mL乙腈洗脱并收集洗脱液 I($,9|9F  
5）浓缩：在温度50～55℃的砂浴中，用氮气吹除乙腈至近干，再用1mL乙腈洗涤离心管壁并用氮气吹干。 Ku%6$C!,  
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5．衍生化 tyXl}$)y  
  向干的残留物中加100μL 衍生化试剂（N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)体积比99∶1），盖塞并旋涡混合10s，在70℃烘箱中反应30min。再在50～55℃砂浴中，用氮气流吹除多余的试剂，至样品管刚好吹干为止（注意：此步过长的吹干时间可导致丢失分析物）。加入0.5mL正已烷，旋涡混合10s，供气相色谱分析用（DA-5, 30m×0.53mm×1.5µm，P/N:0153-3015）。