氘代同位素内标气相色谱-质谱法测定鱼贝类肌肉中β-雌二醇残留 [复制链接]

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2．样品处理

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2. 1　匀质和提取　取鱼贝类肌肉组织,用家庭用搅拌器制样后于- 18℃冷冻保存备用。准确称取5. 00 g试样于50 mL离心管中,加入100μL内标标准工作溶液及5 mL乙酸钠缓冲溶液, 用匀质器以18000 r /min匀质2次,每次30 s后,加入10 mL乙腈,充分旋涡混合1 min,室温下超声提取15 min。取出离心管,以10000 r/min于4℃离心10 min,上清液倒入另一离心管中。残渣中加入10 mL乙腈,按上述方法再提取一次, 合并上清液。

2. 2　净化　加入10 mL正己烷,加塞剧烈振荡1～2 min,以10000 r /min于4℃离心5 min,吸弃正己烷层,下层溶液用正己烷重复洗涤一次,合并离心后的溶液于鸡心瓶。加入0. 5 mL正丙醇,于45℃水浴条件下旋转蒸发至干。残渣中加入1 mL乙腈,超声波清洗瓶壁1 min后,吸至5 mL注射器中。再用1 mL乙腈提取一次,合并溶液并经有机系针头过滤器过滤,再用水稀释至10 mL。样液过C18 SPE小柱(过柱前,依次用6 mL甲醇、3 mL 0. 1%乙酸溶液和3 mL水活化) ,流速控制在1～2 mL /min。用3 mL水洗涤C18柱,弃掉流出液。然后用9 mL乙腈洗脱,收集洗脱液,氮气吹干。

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2. 3　衍生化　在残渣中准确加入100 μL MSTFA2DTE2TM IS衍生化试剂,盖紧塞子并旋涡混合1 min,在60℃烘箱中反应30 min,冷却至室温,于48 h内进行气相色谱2质谱分析。进行标准溶液的衍生化时,先吸取雌二醇和内标标准工作溶液于去活样品反应瓶(美国Agilent公司)中,旋涡混合并氮气吹干,然后同上进行衍生化反应。

HP25MS毛细管柱( 25 m ×0. 32 mm ×0. 52 μm ) ; 柱初始温度120℃ ( 2 min)---- 250℃（15℃/min）300℃(5 min，5℃/min) ；载气He ( ≥ 99. 999%)；流速1. 0 mL /min；进样口温度250℃；不分流进样1μL。EI离子源和四极杆温度分别为230℃和150℃；接口温度280℃；电离电压70 Ev；溶剂延迟3 min；电子倍增器电压为1106 V；扫描质量范围为40～500 amu