MAS-HPLC法测定鱼肉、牛奶和鸡蛋中的三聚氰胺 [复制链接]

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1.1仪器与试剂 !g}9xIL  
`R; ct4-  
试剂：所用乙腈为色谱纯；磷酸二氢钾为分析纯；水为超纯水。 a. gu  
1.2 色谱条件 ufm#H#n)#X  
色谱柱：Venusil SCX-M色谱柱，4.6×250mm,5μm,300 ；（科技部“十一五”国家支撑计划成果）；流动相：磷酸二氢钾（0.050mol/L）：乙腈=70：30；流速：1.5mL/min；柱温：室温；波长：240 nm；实验中若非特别注明，进样量均为20μL。 Å L$jRg  
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1.3 三聚氰胺标准曲线工作液的配制 aoC
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1.4   试样的制备 wlkS+$<  
1.4.1牛奶样品 jCy2bE  
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取15.0g牛奶置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L 盐酸10mL，加入6% 磺基水杨酸3.0 mL， 混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。 c !5OK4+Z  
1.4.2鸡蛋样品 8XT Vpf4  
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       取10.0g混合均匀的鸡蛋置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L 盐酸10mL，均质后全部转入25mL容量瓶，加入6% 磺基水杨酸3.0mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。 vL-%"*>v  
1.4.3鱼肉样品 =`{!" 6a  
取5.0g剁碎的鱼脊背肉，加入0.1mol/L 盐酸10mL，均质后全部转入25mL容量瓶，加入6% 磺基水杨酸3.0 mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。 8;+t.{  

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2结果与讨论 \3JCFor/  
2.1 线性范围 2;v:Z^&  
低浓度曲线取0.005mg/L, 0.01mg/L, 0.02mg/L, 0.1mg/L, 0.2mg/L 5个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图： @[r[l#4yUi  
高浓度曲线取0.2mg/L, 0.5mg/L, 2mg/L, 5mg/L, 20mg/L, 50mg/L 6个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图： [cB^6v  
结果表明：本方法在0.005mg/L~ 50.0mg/L和范围内，三聚氰胺峰面积和浓度有良好的线性关系 r?DCR\Jq  
2.2 重复性 9QU\J0c/  
取浓度为5mg/L的标准品溶液，分别进样20μL，进样6次，计算保留时间及峰面积的RSD（相对标准偏差）。结果列于表3中

	1#	2#	3#	4#	5#	6#	平均值	RSD%
保留时间min	6.817	6.833	6.817	6.817	6.858	6.808	6.825	0.26
峰面积 μAu·s	571360	574492	569813	572187	574525	575593	572995	0.39

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2.3 检出限 X$@` 4  
以曲线最低点0.005mg/L的谱图（见图4）为准，以噪声对应峰高估算检出限为0.0032mg/L (S/N=3)。 mo^E8t.  
2.4 实际样品测试 "73*0'm  
2.4.1牛奶样品 KKsVZ~<6u  
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图5 空白牛奶样品谱图 [\3ZMH *  
2.4.1.2 牛奶加标回收率 )y8M
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分别在空白牛奶样品中加入相当于1.0mg/Kg，5.0mg/ Kg和10.0mg/ Kg的三聚氰胺标准品，测试谱图如图6所示。 lD0a<L3  
根据此谱图测得三聚氰胺的加标回收率如表4所示

样品名称	加标量（mg/Kg）	测得量（mg/ Kg）	回收率（%）
牛奶空白	0.00	-	-
1#	1.00	1.05	105.0%
2#	5.00	5.18	103.6%
3#	10.00	9.04	90.4%

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结果表明，MAS前处理方法对牛奶中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好；HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。 T%oJmp?0  
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2.4.2.2 鱼肉样品加标回收率分别在空白鱼肉样品中加入相当于1.0mg/kg、5.0mg/kg和10.0mg/kg的三聚氰胺标准品，测试谱图如图8和图9所示。 im9w|P5  
根据此谱图测得鱼肉中三聚氰胺加标回收率如表4所示

样品名称	加标量（mg/kg）	测得量（mg/kg）	回收率（%）
鱼肉空白	0.00	-	-
1#	1	0.98	98.0%
3#	5	5.81	116.2%
5#	10	9.67	96.7%

结果表明，MAS前处理方法对鱼肉中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好；HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。2.4.3鸡蛋2.4.3.2 鸡蛋加标回收率分别在样品中加入相当于1.0mg/Kg，5.0mg/ Kg和10.0mg/ Kg的三聚氰胺标准品，测试谱图如图11所示。鸡蛋中三聚氰胺的加标回收率如表6所示

样品名称	加标量（mg/kg）	测得量（mg/kg）	回收率（%）
鸡蛋空白	0.00	-	-
1#	1	0.89	89.0%
3#	5	5.55	111.0%
5#	10	10.48	104.8%

结果表明，MAS前处理方法对鸡蛋中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好；HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。3 结论上述实验结果表明，采用MAS样品前处理方法，以混合型阴离子交换填料Cleanert PAX作为萃取介质，可以快速准确的处理牛奶、鱼肉和鸡蛋样本，同时使用阳离子交换色谱柱进行HPLC分析，整个分析方法应用于不同样品中三聚氰胺的检测，具有检测限低，精密度高，线性范围宽和回收率高等优点，完全可以满足三聚氰胺的快速检测要求。