一. 试剂配制 r8XY"< 1. 氢氧化钠溶液(0.2mol/L):称取氢氧化钠0.8g,加水100mL溶解,即得。
AW@I, 2. 二硫代二丙酸溶液:称取二硫代二丙酸200mg,加0.2mol/L氢氧化钠溶液10mL溶解,即得。
mM"!=' z 3. 水解溶液:取浓盐酸50mL,加水定容至100mL。
[E_6n$w 4. 三乙胺乙腈溶液:取三乙胺1瓶,加乙腈8.6mL,混匀。
$Jo[&, 5. 异硫氰酸苯酯(PITC)乙腈溶液:取异硫氰酸苯酯1支,加乙腈2mL,混匀。
M(o?I} 6. 流动相A: 称取8.2g无水醋酸钠,加水900mL溶解,用醋酸调pH至6.5,然后加 水至1000mL,加乙腈75ml,滤过。 流动相B: 乙腈/水=4/1 7. 内标溶液: 称取正亮氨酸内标10mg,加0.1mol/L盐酸溶解10mL使溶解。
F!jYkDY 二. 操作 9mkt.>$ (1)供试品溶液的制备 准确称取样品适量(约含总氨基酸50mg)(W1),加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至50mL,作为供试品溶液。
uiDK&@RS (2)氨基酸
标准溶液 准确称取胱氨酸约10.0 mg(W2),加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定容至100mL,作为氨基酸对照溶液。
Qjh5m5e (3)水解衍生 准确量取供试品溶液和氨基酸标准溶液各200μL,分别置一水解管中,准确加入正亮氨酸内标溶液20μL,加二硫代二丙酸溶液 100μL,加水解溶液0.5mL,110℃ 水解24小时,真空干燥或用氮气吹干除去盐酸,往每个水解管中分别加入水200μL,加三乙胺乙腈溶液100μL,振摇使溶解,加异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μ ,混匀,室温放置1小时,加入400μL正己烷,放置10分钟,取下层溶液,用水稀释5倍,滤过,作为上机
分析溶液。
D]v=/43 (4) 色谱条件: 色谱柱:Venusil-AA氨基酸分析柱 100Å,4.6mm×250mm,5μm
检测波长:254nm 柱温:40℃ 进样体积:10mL 流速:1.0mL/min
r>4.{\C 洗脱梯度: