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肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的致病菌,全称肉毒梭状杆菌,在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力。它在繁殖过程中所分泌的毒素具有极强的毒性,是氰化钾毒性的一万倍,是毒性最强的毒素之一。纯化结晶的肉毒杆菌毒素 1 mg 能杀死 2 亿只小鼠,对人的半致死量为 40 IU/kg。 b,#cc>76\
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肉毒杆菌毒素(Botulinum Toxin)前体是在肉毒杆菌细胞内产生的无毒化合物,肉毒杆菌死亡后无毒化合物释放出来,经肠道中的胰蛋白酶或细菌产生的蛋白酶激活后方始具有毒性。 肉毒杆菌毒素作用的机理是阻断神经末梢分泌能使肌肉收缩的乙酰胆碱,从而达到麻痹肌肉的效果。人们食入和吸收这种毒素后,神经系统将遭到破坏,将会出现头晕、呼吸困难和肌肉乏力等症状。 BYhPOg[
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新西兰乳制品巨头恒天然集团8月3日宣布,旗下部分婴儿奶粉和运动饮料等产品可能 “受到污染”,含有肉毒杆菌。多家食品厂商产品受到影响。RephiLe 技术人员根据《GB/T4789.12-2003食品中卫生微生物学检验肉毒杆菌及内毒素检验》和《SN/T 2525-2010 食品中肉毒梭菌的PCR 检测》总结出了对食品中肉毒杆菌进行初步检验的方法。 b0rC\^x
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一、实验原理 OJbY\U
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将样品经增菌后划平板分离单菌落,挑取可疑菌落到胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉汤 (TPGY)培养基培养,对培养物用 DNA 提取试剂盒抽提 DNA,进行 PCR 扩增,用琼脂糖凝胶电泳检验 PCR 产物中是否含有肉毒杆菌的的特征条带,从而初步判断食品是否被肉毒杆菌污染。 s,]6Lri`\
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二、仪器和试剂 /fBZRdB
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紫外检测仪 NanoDrop1000 (Eppendorf),台式微量冷冻离心机 Microfuge 22R(Beckman Counter),凝胶成像分析系统 Gel DocTM XR (Bio-RAD), PCR仪 My Cycler (Bio-RAD),Direct-Pure UP 超纯水系统(RephiLe),核酸电泳仪 EPS100 (上海天能)。
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细菌基因组 DNA 提取试剂盒(Axygen),dNTP (Takara) '=\]4?S
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三、试验方法 TcauCL
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1、样品制备和增菌培养 zw\"!=r^
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接种前,先将增菌培养基煮沸 10 ~ 15 min,以排除溶解于培养基中的氧,并迅速冷却,切勿摇动。每 15 ml 增菌肉汤中接种 1 ~ 2 g 固体食品或 1 ~2 ml 液体食品,接种时将接种物慢慢接入肉汤液面以下。每份样品接种两管庖肉培养基,置 35 ℃±1 ℃,同时接种两管 TPYG 培养基,置 28 ℃±1 ℃,厌氧培养 5 d。检查培养物的浊度、产气、肉粒的消化和产生的气味。若有生长,按步骤 2 分离纯化培养物。若未见生长,则继续培养 10 d。 A5ktbj&gy<
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2、分离纯培养物 57K1e~^
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取 1 ~ 2 ml 培养液置于无菌试管中,加入等量无菌无水乙醇,混匀,放置室温 1 h。用接种环取 1 ~ 2 环经处理过的培养物在厌氧卵黄琼脂上划线接种,35 ± 1 ℃ 下厌氧培养 48 h。接种可疑菌落到 TPGY 培养基,35 ± 1℃ 下厌氧培养 24 h。 fCx~K' UWn
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